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Modo de acción 0.01adenina 0.01 guanina 0.01 uracilo 0.01 xantita 0.01
Agar –Agar 12.0
La composición del medio de cultivo proporciona
condiciones de crecimiento favorables. El Preparación
almacenamiento intermedio del medio impide que los
Suspender el autoclave de 40g/litro (15 min a 121°C)
cambios de ph interfieran con la difusión. Las zonas de
verter las placas ph 7.2 = 0.2 a 25° C
inhibición están claramente definidas. Los antibioticos o
sulfonamidas no son inhibidos o antagonizados por Procedimiento experimental y evaluación
ninguno de los constituyentes del medio.
Realizar la prueba de sensibilidad como se indica en los
Composición típica (g/litro) métodos estándares. Las zonas de inhibición se pueden ver
claramente y sus diámetros se evalúan cualitativamente y
Peptona 20.0 D(*) glucosa 2,0 cloruro de sodio 3.0 fosfato
cuantitativamente en el caso de la evaluación cuantitativa,
di hidratado de hidrogeno 2.0 acetato de sodio
las zonas se miden y registran.
Control de calidad
Preparación
Control de calidad
Control de calidad
Control de calidad
Extracto de carne 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 - 1.5 1.5 - - 1.5 2.5 -
Extracto de levadura 3.0 3.0 1.5 3.0 3.0 - 3.0 3.0 - - 3.0 6.0 -
Peptona de caseína 4.0 - - - - 17.0 - - 17.0 17.0 4.0 - -
Peptona de la carne 6.0 6.0 5.0 6.0 6.0 - 6.0 6.0 - - 6.0 10.0 10.0
Peptona de harina de soya - - - - - 3.0 - - 3.0 3.0 - - -
D(+)glucosa 1.0 - 1.0 1.0 - 2.5 - - 2.5 2,5 1.0 10.0 10.0
Cloruro de sodio - - 3.5 - - 5.0 - - 5.0 5.0 - 10.0 -
Hidrogenofosfato de di- - - 3.68 - - 2.5 - - 2.5 2.5 - - -
potasio
Di hidrógeno fosfato de - - 1.32 - - - - - - - - - -
potasio
Agar-Agar 15.0 15.0 - 15.0 15.0 - 18.0 15.0 20.0 12.0 15-0 20.0 -
Polisorbato 80 - - - - - - - - - 10.0 - - -
Sulfato de manganeso - - - - - 0.03 - - - - - - -
Cantidad requerida 30.5 25.5 17.5 26.5 25.5 30.0 25.5 25.5 50.0 52.0 30.5 62.0 31.0
(g/litro)
PH a 25°C
6.5 6.5 7.0 6.5 7.9 7.0 7.0 5.6 7.2 7.2 7.9 5.1 7.1
(=0.2) (=0.2) (=0.2) (=0.2) (=0.2) (=0.2) (=0.2) (=0.2) (=0.2) (=0.2) (=0.2) (=0.2) (=0.2)
Preparación
Suspender la cantidad requerida de autoclave del medio
de cultivo (ver tabla)(15 min a121°C )agregar la cepa de
prueba de bacterias de 45-50° C verteer las placas.
Las placas listas para usar son claras y de color marron Se pueden almacenar en el refrigerador a 4°C, pipetear las
amarillento soluciones de antibióticos en los cilindros y luego incubar
a 37°C durante 16 a 24 horas
Procedimiento experimental y evaluación
Evaluación eliminar el cilindro medir el diámetro de las
1. Prueba de cilindrfo zonas de inhibición (es mejor usar un instrumento de
Procedimiento llene las placas de Petri con 14 ml del lectura de zona) Y evaluarlos estadísticamente, dibujar
medio para formar la capa base,después de que esto haya una curva estándar utilizando los valores de las
establecido la superposición con 4 ml de la capa de soluciones estándar y leer las actividades de las
semilla inoculada, coloque el cilindro de acero o de vidrio soluciones de prueba
en el medio del cultivo enfriado en condiciones esteriles:
las placas de prueba listas para usar 2. Prueba perforada
Se perforan orificios del medio de cultivo inoculado y las
soluciones de antibióticos se pipetean en ellos, todos los
demás pasos son análogos a los descritos en la prueba de
cilindro
3. Prueba con disco de papel
El disco de pael con un diámetro de 9 mm esta
impregnado con la solución de antibióticos y se coloca en
el medio del cultivo,el antibiótico tambioen se puede
aplicar al disco
Después de haber sido colocado en las placasmedianas
que continen una única capa de medio con un grsor de 2
mm, se puede utilizar para estas se pueden emplear
varios antibióticos No 2 0 5 dependiendo del ph requerido
todos los demás pasos son analogosa los descritos en la
prueba del cilindro. .evaluación del ultimo tubo que no muestra turbidez
frente al crecimiento microbiano contiene la actividad
4. Prueba de dilución en serie antibiótica en una concentración correspondiente a la
La actividad antibiótica se determina cuantitativamente CIM
utilizando la sensibilidad conocida de una cepa de prueba 5. PRUEBA TURBIDIMETRICA
frente a un antibitico que se expresa numericamentecomo Esta prueba es mas precisa y mas sensible que la prueba
la concentración inhibidora minima.MIC de dilución en
La dilución en serie del procedimiento del antibiótico a Serie
analizar se pipetea en el caldo de antibiótico, que luego se Procedimiento incubar tubos que contengan alícuotas de
inocula con una cantidad definida de la cepa de prueba 1 ml de la solución de antibiótico y alícuotas de 9 ml del
relevante caldo de durante 4 horas a37° C en un baño de agua ,
luego se detiene el crecimiento de las bacterias de prueba
mediante la adicion de 0.5 ml de un diluido formaldeido
sokurion y la turbidez evaluada fotométricamente.
Evaluacion . la concentración de antibióticos se
determina comparando la absorbancia de la solución de
prueba con la de una curva estándar previamente
construida.