Dpto. Biología 
Coloración de
Gram
Ana Liceth Montes Polo
Aquí se observa la forma estructural de una E. coli
en tinción negativa.
Se observa una pequeña ramificación de bacilos.
1 DISCUSIÓN
En el laboratorio se sometió una muestra de un
cultivo de una bacteria (​Escherichia coli) a la
tinción de gram para determinar a qué grupo
pertenecía, luego del procedimiento realizado se
llegó a la conclusión de que esta bacteria es una
perteneciente a las gram negativa, ​consta de tres
elementos: la membrana citoplasmática, la
membrana externa y, entre ambas, un espacio
periplásmico constituido por péptido-glucano. ​Las
bacterias gram negativas presumiblemente debido
a su mayor contenido lipídico en su pared celular,
1
Asignatura Microbiología 
pierden la coloración primaria del cristal violeta
aparecen rojas o rosadas al microscopio, habiendo
fijado la safranina como colorante de contraste a
sus paredes celulares.
Las bacterias del género E. coli son
Gram-negativas, tienen forma de barra (bacilos) y
pertenecen a la familia Enterobacteria. Esta
bacteria es un habitante común de los intestinos de
todos los animales, incluyendo el de los humanos.
Escherichia coli (E. coli) es quizás el organismo
procarionte más estudiado por el ser humano, se
trata de una ​bacteria unicelular​ que se encuentra
generalmente en los intestinos animales y por
ende en las ​aguas negras​.
Cabe resaltar que en la muestra estudiada en el
laboratorio estaba contaminada, pues en el
microscopio además de los bacilos llamados E.
Coli, se encontraron estructuras de cocos y una
ramificación difícil de decir su origen, aunque se
asume que sean pequeñas ramificaciones de
bacilos.
2 PREGUNTAS
COMPLEMENTARIAS
1. ¿Cuáles son las fuentes de error más
comunes en la tinción de Gram?
R//:
R: Edad de la bacteria.
II: Errores del operador.
III: Uso de antibióticos
A pesar de la gran utilidad de la tinción
de Gram, este método debe ser valorado
con precaución, ya que la reacción puede
variar según la edad de las células
(cultivos viejos de bacterias gram
positivas pueden perder capas de
peptidoglucano y teñirse como gram
negativos) y la técnica empleada (Al
decolorar por un tiempo muy prolongado
se puede correr el riesgo que bacterias
gram positivas se tiñan como gram
negativas),Es por esta situación que junto
a la muestra deben teñirse controles con
bacterias gram positivas (ej. S. aureus) y
gram negativas (ej. E. Coli).

2. ¿Cuál es el fundamento de la técnica de
Gram?
R//: Un frotis es tratado con una solución de
cristal violeta el cual se une a las paredes
celulares bacterianas, luego de un
tratamiento con lugol, algunas bacterias
debido a la naturaleza química de sus
paredes celulares, poseen la capacidad de
retener el cristal violeta, aún luego del
tratamiento con un decolorante orgánico
(alcohol acetona). Tales bacterias
se denominan GRAM POSITIVAS. Las
bacterias GRAM NEGATIVAS
presumiblemente debido a su mayor
contenido lipídico en su pared celular,
pierden la coloración primaria del cristal
violeta aparecen rojas o rosadas al
microscopio, habiendo fijado la safranina
como colorante de contraste a sus
paredes celulares, las GRAM
POSITIVAS aparecen al microscopio de
color azul intenso o violeta.
3. ¿Por qué las bacterias gram negativa se
tiñen de rosado a diferencia de las gram
positivas (morado) siendo el
procedimiento de tinción el mismo?
R//: Todas las células sin pared (como los
animales) pierden fácilmente el cristal
violeta (se verán de color rosa). Todas
las células con pared gruesa (como las de
hongos) se verán de color violeta. La
correlación entre el color y el tipo de
pared sólo tiene sentido con células
bacterianas.
4. Investiga. Además del calor que otros
métodos de fijación pueden ser usados
para tinciones diferenciales.
R//: Métodos físicos como congelación muy
rápida y algunos​ métodos
químicos utilizan soluciones acuosas
compuestas por moléculas fijadoras que
establecen puentes entre las moléculas
del tejido, manteniéndolas en sus lugares
originales e impidiendo su degradación.
2
Dpto. Biología 
Asignatura Microbiología 
Hay que considerar que los fijadores
químicos afectan al tejidos tanto física
como químicamente. Los efectos físicos
suelen ser retracciones o distensiones, y
la mayoría endurecen el tejido. Hay dos
métodos básicos de fijación con fijadores
líquidos: inmersión y perfusión. En
cualquier caso el fijador debe llegar a
todas las partes el tejido lo más
rápidamente posible.
5. ¿Cuál es la función del lugol en la técnica
anterior?
R//: El lugol es un compuesto formado por todo en
equilibrio con yoduro de potasio, el cual
está presente para solubilizar el todo, y
actúa de mordiente, haciendo que el
cristal violeta se fije con mayor
intensidad a la pared de la célula
bacteriana. El todo entra en las células y
firma un complejo insoluble en solución
acuosa con el cristal violeta. Después se
añade el lugol que deshidrata la
membrana y cierra los poros, de esta
manera el colorante queda atrapado
dentro de la pared bacteriana y por eso
las bacterias gram+ se ven de color
morado oscuro.
3 BIBLIOGRAFIA
https://www.clubensayos.com/Cienci
a/Coloracion-De-Gram/229126.html
https://mmegias.webs.uvigo.es/6-tecn
icas/2-metodos-fijacion.php
http://cbtis253escherichiacoli.blogspot.com
.co/p/caracteristicas-generales.html
  
Dpto. Biología 
Asignatura Microbiología 

Tinciones Selectivas: Tinción de Cápsula

Ana Liceth Montes Polo

4 RESULTADOS Tiñe el fondo de color negruzco y

permite ver los microorganismos sin
colorear sobre dicho fondo. De este
modo genera el contraste suficiente como
para permitir su visualización al
microscopio.

Para esta tinción se pueden utilizar dos

colorantes diferentes: nigrosina o tinta
china. En la práctica se utilizará la
primera de ellas.

La nigrosina es un colorante aniónico de

Tinción de capsulas: ​klebsiella sp color negro que es repelido por las
cápsulas, lo que imposibilita su
5 DISCUSIÓN penetración dentro de los
La tinción negativa facilita la observación de las
microorganismos. Permite la
capsulas bacterianas coloreando el medio que
visualización de cápsulas bacterianas y
rodea las bacterias, utilizando la tinta china, que es
fúngicas.
una suspensión de partículas de carbono coloidal.
La tinta china no logra penetrar la capsula
2. ¿Qué tipo de información se obtiene?
bacteriana permitiendo diferenciarla del medio
Cualitativa ya que podemos definir los rasgos y
que la rodea, lo cual también permite observar la
morfologías de las bacterias esporuladas,
morfología de estas, en el caso de ​klebsiella sp
ya que la tinta tiñe el fondo, el contraste
del cultivo bacteriano su morfología es de cocos.
de la luz del microscopio nos permite
Son bacterias de la flora normal gastrointestinal,
observarlas.
sin embargo su importancia médica radica debido
a que son oportunistas(osea se aprovechan del
3. ¿Qué otra técnica de tinción selectiva
debilitamiento del sistema inmunológico) y
permite observar estas estructuras
pueden producir enfermedades nosocomiales
bacterianas?
como infecciones respiratorias, urinarias,
Tinción de endoesporas:
neumonías.
La tinción de Shaeffer-Fulton,
PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS permite visualizar esta
estructura bacteriana, difícil de
1. Explique el fundamento de la tinción
teñir, siendo muy útil para
negativa realizada en la práctica.
detectar una contaminación por
La tinción negativa de cápsulas es una tinción
endosporas.
estructural, ya que pone de manifiesto las
cápsulas y no tiñe los microorganismos.

3
  
Dpto. Biología 
Asignatura Microbiología 

Tinción de flagelos:
La Tinción de Leifson, es una
tinción para lograr observar
flagelos de bacterias. Es usada
en laboratorios, pero no de
rutina. Los pasos que sigue son
el de usar para rosanilina sirve
como tinción principal, y ácido
tánico es agregado a la solución
como mordiente.

Tinción de núcleo:
La tinción hematoxilina-eosina
corresponde a la mezcla de
hematoxilina. La tinción
hematoxilina y eosina es uno de
los métodos más populares de
tinción utilizado en histología y
medicina diagnóstica.
El método supone la aplicación
de la tinción de hematoxilina,
que por ser catiónica o básica,
tiñe estructuras ácidas
(basófilas) en tonos azul y
púrpura, como por ejemplo los
núcleos.

4. Realiza una lista de bacterias que

sinteticen capsulas.
streptococcus pneumonidae
Haemophilus influenziae
Scherichia coli
Leuconostoc mesenteroides
Xanthomonas sp
Bacillus megatherium

6 BIBLIOGRAFIA
✔ http://www.higiene.edu.uy/cefa/200
8/Staphylococcus.pdf