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PRACTICA N° 1 Bioquímica

Extracción e identificación de lípidos

Profesor:

INTRODUCCIÓN
Los lípidos son biomoléculas orgánicas químicamente distintas entre sí:
- Son insolubles en solventes polares como el agua.
- Y son solubles en solventes orgánicos no polares (cloroformo, éter, benceno).
Los lípidos están constituidos básicamente por carbono e hidrogeno, pero la gran mayoría,
además contienen oxígeno. E incluso pueden contener fosforo, azufre y nitrógeno.
La molécula del colesterol es hidrofóbica que al igual que otros lípidos es bastante soluble en
disolventes apolares como el cloroformo, acetona y éter. Considerando lo anterior, cualquier
método de extracción de lípidos requiere utilizar mezclas de solventes orgánicos que permitan
solubilizar todos los lípidos y precipiten proteínas e hidratos de carbono para su mejor separación.
Funciones: Almacenamiento de energía (TAG), Componentes de las membranas biológicas
(fosfolípidos, esfingolipidos, colesterol), Otras: hormonas, vitaminas, mensajeros intracelulares,
componentes de pigmentos.
FUNDAMENTO TEORICO.
El colesterol es el principal esterol del organismo humano y precursor de todos los demás esteroides
corporales. Se encuentra formando parte de membranas celulares, lipoproteínas, ácidos biliares y
hormonas esteroideas. La separación de los lípidos es extremadamente difícil por extracción con varios
solventes orgánicos puros. Se hace uso de la propiedad que tienen la mayoría de los lípidos de ser solubles
en mezclas de etanol: éter o etanol: cloroformo. La yema de huevo contiene buenas cantidades de grasas
neutras, lecitinas y colesterol. Las lecitinas tienen un pH aproximadamente neutro, ya que contienen
grupos ácidos (HPO4-2) y básicos (Colina) formando zwitteriones (son moléculas que contienen grupos
ácidos y grupos básicos (y son, por tanto, anfóteros) existiendo como iones dipolares en ciertos intervalos
de pH muy polares. Se dispersan coloidalmente en agua en contraste con las grasas neutras que no se
emulsionan. Las lecitinas se precipitan a partir de una solución etérea por adición de acetona. Las
esfingomielinas también tienen colina, pero son solubles en éter y se presentan en cantidades
despreciables en el huevo crudo. El colesterol no precipita por tratamiento con acetona de una solución
etérea. El colesterol puede extraerse de muestras biológicas.
OBJETIVOS.
• Verificar reacciones de saponificación.
• Reconocer por reacciones de color de lípidos.
• Probar la solubilidad de los lípidos variando las características del medio en el que se
encuentran.
MATERIALES (Por grupo).
Tubos de ensayo
Erlenmeyer
Un vaso de precipitado de 50 ml
Placa de calentamiento
Una gradilla para tubos de ensayo
Una pinza metálica para tubo de ensayo
Mortero de porcelana

Reactivos: solución de sudan, hidróxido de sodio al 20%, éter, cloroformo, etanol.


Muestras: aceite vegetal, queso, manzana, salchicha, yema de huevo cocida, concentrado.

METODOLOGÍA Y PROCEDIMIENTO

Saponificación.
Las grasas reaccionan en caliente con el hidróxido sódico o potásico descomponiéndose en los
dos elementos que la forman: glicerina y los ácidos grasos. Estos se combinan con los iones sodio
o potasio del hidróxido para dar jabones, que son en definitiva las sales sódicas o potásicas de los
ácidos grasos.
1. Colocar en un tubo de ensayo 2 cc de aceite vegetal y 3 cc de solución de hidróxido sódico al
20%.
2. Agitar enérgicamente y colocar el tubo al baño de maría de 20 a 30 minutos.
3. Transcurrido este tiempo, se puede observar en el tubo tres capas: la inferior clara (que
contiene la solución de sosa sobrante junto con la glicerina formada), la superior amarilla de
aceite no utilizado, y la intermedia, de aspecto grumoso que es el jabón formado.
Identificación de lípidos en diferentes muestras.
1. macerar las diferentes muestras.
2. Tome 6 tubos y agregue a cada uno las diferentes muestras: aceite vegetal, queso, manzana,
salchicha, yema de huevo cocida, concentrado.
3. Agregue 1 ml de etanol (alcohol etílico).
4. Deje 10 minutos en reposo, si la muestra toma un color blanco quiere decir que se agregó
mucho alimento y se puede agregar un poco más de etanol.
5. Retire el sobrenadante a otro recipiente y agregue 10 gotas de agua destilada
6. si presenta turbidez existe presencia de lípidos.

Solubilidad.

Las grasas son insolubles en agua. Cuando se agitan fuertemente en ella se dividen en pequeñísimas gotitas
formando una “emulsión” de aspecto lechoso, que es transitoria, pues desaparece en reposo, por
reagrupación de las gotitas de grasa en una capa que por su menor densidad se sitúa sobre la de agua. Por
el contrario, las grasas son solubles en los llamados disolventes orgánicos como el éter, benceno, xilol,
cloroformo.

1. Tomar dos tubos de ensayo y poner en uno de ellos 2 – 3 cc de agua y en el otro 2 – 3 cc de éter u otro
disolvente orgánico.

2. Añadir a cada tubo 1 ml de aceite y agitar fuertemente. Observar la formación de gotitas o micelas y
dejar en reposo. 3. observe la reacción.

DATOS Y RESULTADOS
1. Determine cualitativamente las coloraciones de cada uno de los procedimientos y ensayos
realizados.
2. Anote observaciones que considere necesarias y realice una tabla de las soluciones tratadas y
los reactivos utilizados.
3. ¿Qué posibles lípidos contienen cada muestra?
4. ¿Qué es el reactivo de Sudan y a para que sirve?
5. Cuál es el fundamento de cada una de las reacciones utilizadas en cada ensayo.
6. ¿Cuáles deben ser los valores promedio de colesterol total, triglicéridos y lipoproteínas (VLDL,
LDL, HDL)? ¿A que hace referencia VLDL, LDL, HDL?.
REFERENCIAS

Sin autor, 2005. Tema3. Lípidos, Bioquímica. Obtenido de:


http://www.uhu.es/08007/documentos%20de%20texto/apuntes/2005/pdf/tema_03_lipidos.pd
f
Sin autor, s. f. Lípidos: Reconocimiento, Solubilidad y Reacciones,
RecursosTIC, Educación.Obtenidode: http://recursostic.educacion.es/ciencias/biosfera/web/pro
fesor/practicas/Lipidos.pdf
Thorpe, Bray y James. Bioquímica CECSA
White et al Bioquímica McGraw Hill
Harper et al Manual de Química fisiológica Manual moderno
Conn y Stumpf Bioquímica fundamental Limusa
Macarulla y Goñi Biomoléculas
Ramsey y Bronk Biología Química
Matheus Van Holder Bioquímica