Universidad de La Frontera

Depto. de Ciencias Químicas y Recursos Naturales

Análisis Instrumental

Generalidades de las Técnicas Espectroscópicas

Espectroscopía de Absorción Molecular
Dra. Antonieta Ruiz
Campo C= λ ν
eléctrico Donde:
C: velocidad de la luz
Λ: longitud de onda
ν: frecuencia
 ESPECTRO ELECTROMAGNETICO
103 10 10-1 10-3 10-5 10-7 10-9 10-11
l (m)
Virus

Punto Célula Bacteria Proteína Molec.

Estadio Ondas de Tennis
radio Infrarrojo Ultravioleta Rayos X X agua
Rayos

Visible
Microondas Rayos X Rayos
gama

۷
(ciclo/seg) 106 108 1010 1012 1014 1016 1018 1020

E foton
(eV) 10-9 10-7 10-5 10-3 10-1 101 103 105
 ESPECTRO ELECTROMAGNETICO
103 10 10-1 10-3 10-5 10-7 10-9 10-11
l (m)
Virus

Punto Célula Bacteria Proteína Molec. agua

Estadio Tennis
Casa

Infrarrojo Ultravioleta Rayos X

Visible
Ondas de radio
Microondas Rayos X Rayos
gama

۷
(ciclo/seg) 106 108 1010 1012 1014 1016 1018 1020

E foton
(eV) 10-9 10-7 10-5 10-3 10-1 101 103 105
En espectroscopía estudiamos:

Ultravioleta cercano: 10 – 380 (200 - 380) nm

Visible: 380 - 780 nm
Infrarrojo: 0.78-1000 (2.5-15) um
 Absorción de la luz
Sólido
transparente,
REM incidente líquido REM transmitida
o gas

Átomos, moléculas y iones presentan un número limitado de niveles energéticos discretos y

cuantizados

Estados
excitados
REM ABSORBIDA ES
Energía

TRANSFERIDA a átomos,
moléculas o iones capaces de
absorber la radiación, pasando
de un estado fundamental a
Estado uno excitado.
Basal
Absorción Emisión
 ESPECTROSCOPÍA
Es el estudio de las transiciones típicas de una especie (átomo, ión, molécula), con lo que
es posible su caracterización
A

Lo que se obtiene es un:

ESPECTROGRAMA

Las especies que pueden absorber Radiación Electromagnética (REM) son:

 ABSORCION
ATOMOS ESPECTROSCOPIA ATOMICA  EMISION

ESPECTROSCOPIA MOLECULAR  ABSORCION

MOLECULAS  EMISION
LOS ESPECTROS ATÓMICOS SON MÁS SENCILLOS QUE LOS ESPECTROS MOLECULARES

3s 3p

ÁTOMOS

MOLÉCULAS

Absorción molecular
involucra transiciones
• ELECTRÓNICAS
• VIBRACIONALES
• ROTACIONALES
 ABSORCIÓN MOLECULAR
E = E ELECTRÓNICA + E VIBRACIONAL + E ROTACIONAL

Dependiendo del tipo de energía presente en la molécula, va a presentar absorción en

diferentes zonas del espectro electromagnético.

Aumenta E electrónica de la molécula:

E del fotón permite que los electrones pasen de un nivel
electrónico a otro superior. Este cambio va acompañado de
ABSORCIÓN DE REM DE cambios vibracionales y rotacionales.
REGIÓN UV-VIS
(l =200-780 nm) E captada puede disiparse a la forma de calor (vibraciones,
rotaciones) o a la forma de Fluorescencia.

ABSORCIÓN REM DE REGIÓN Aumenta E vibracional de la molécula:

IR cercana y me-dio (l =0.78 – E del fotón permite que las molécula vibren alrededor de
50 um) sus enlaces

ABSORCIÓN DE REM DE Aumenta E rotacional de la molécula:

REGIÓN IR lejana y microondas E del fotón permite que las molécula roten en torno a su
(l = 50 -100 um) eje.
El instrumento que se utiliza para realizar determinaciones de absorción molecular
se llama ESPECTROFOTOMETRO.

P0 P
Selector de longitud Detector de
Fuente de Muestra
de onda luz
luz
(monocromador)

Las determinaciones cuantitativas se realizan a la forma de:

Transmitancia (%T): fracción de luz incidente que sale de la muestra. T = P
P0
Absorbancia (A): A = log10 P = -log T
P0
Las importancia de la absorbancia es que esta es directamente proporcional a la
concentración de la especie absorbente en la muestra:
Ley de Beer
A=Ɛbc Ɛ : coeficiente de absortividad
b: espesor óptico
c: concentración
ESPECTROGRAMA: dependiendo de la unidad de medida en que sea expresado el
espectrograma, puede presentar diferentes formas.
Si recordamos la ley de Beer:

A=Ɛbc
A e

l max lo۷ l max lo۷

%T

l max l o ۷
La Ley de Beer, se puede expresar como:
A=Ɛbc ó A= a b c
Las unidades de Ɛ y a son:
a = A / b c = 1 / cm x (g/L) 1 L= 1000 mL= 1000 cm3

2
a = 1 / cm x (g/1000cm3)
a = cm2 / mg
mg a: coeficiente de absortividad

M= moles/L
e=A/bc = 1 / cm x (mol/L)
1 L= 1000 mL= 1000 cm3

2
e = 1 / cm x (moles/1000cm3)
e = cm2 / mmol
mmol Ɛ: coeficiente de absortividad molar

a y e dependen de:
Por lo tanto: a x PM = e • Naturaleza de la sustancia
• Longitud de onda
La absorción de REM por un medio
depende de:
1. l de la radiación

2. Naturaleza de la especie molecular que

absorbe (a o e)

3. Concentración de la especie molecular

A (l) = a (e) (l) x b x c
que absorbe

4. Camino óptico que debe recorrer la REM

a través del medio que absorbe
 VALIDEZ DE LA LEY DE BEER
Como toda ley, tiene restricciones:
• Es válida para luz monocromática (una sola l), porque A = f(l)
• Es válida para soluciones diluidas (10-2-10-3 M como max.)
• Es válida para soluciones verdaderas (no suspensiones, etc)
• Es válida para T° cte. y n cte.

DESVIACIONES DE LA LEY DE BEER

• Origen Químico + o -)
• Origen Instrumental (-)

Desviaciones de origen químico (+ o -) :

• Indica presencia de un equilibrio químico (el analito se disocia, asocia o reacciona
con el solvente, dando un producto con un espectro de absorción diferente que el del
analito).
• La desviación puede ser positiva o negativa (se visualiza en la c. de c.)
 Ejemplo Cr2O7= + H2O 2 CrO4= + 2H+
pH
Curva de calibración
(sin ajuste de pH)
l = 450
A
Espectrograma

CrO4=/OH- Desv. Neg.

A
Cr2O7=/H+ C
Curva de calibración
(sin ajuste de pH)
l = 375 Desv. positiva
375 450 A
l

C
 Desviaciones de origen instrumental (-):
•Pueden producirse por falta de monocromaticidad
•Pueden producirse por presencia de luz “parásita” o “espúrea” (luz que proviene de otras fuente y
no del haz de luz incidente).
Falta de monocromaticidad
Haz monocromático
%T A
l1
100 50 50 0.301
C

Haz policromático
%T A
l1 (50)
25
75 0.125
l2 (50) 50
C
Presencia de luz parásita o espúrea:
•Corresponde a luz que llega al detector, pero que no forma parte del haz de medida.
•Es producto de dispersiones y reflexiones en varias superficies internas del instrumento.
•Cuando hay luz espúrea (Ps), la A está dada por:
GRAFICANDO AMBAS CURVAS DE CALIBRACIÓN TENEMOS:

A1

0.8 Haz
monocromático
0.6

Haz
0.4
policromático Desviación
0.2 negativa de
LLB
0
0 1 C 2C 3 C C4
Medidas
absorciométricas a
Espectrofotómetro UV/VIS
longitudes de onda
extremas de un
instrumento.

Espectrofotómetro VIS sencillo

 a = cm2/mg
e= cm2/mmol
RESUMEN: LLB: A = a x b x c dependen de l y de la
naturaleza de la sustancia
Valores de A : entre 0 y infinito
A= - log T ó 2 - log %T Valores de T : entre 0 y 1
Valores de % T: entre 0 y 100

Limitaciones de LLB:
Desviaciones de origen Químico: Desviaciones de origen Instrumental:
Equilibrios químicos • Falta de monocromaticidad del haz de medida
Desviaciones + ó – Desviaciones –
• Presencia de luz espúrea
Desviaciones -

Para dilucidar si existe desviación de LLB: A

Hacer curva de calibración de A vs C
y verificar linealidad
Desv. negativa
Si el resultado es:
Una recta: no hay desviación
Desv. +: Desv. Orig. Químico C
Desv. -: Desv. Orig. Químico o
Instrumental
 APLICACIONES CUANTITATIVAS
1.- Método absoluto: cMP = A MP/ a (e) x b
•Aplicación directa de la LLB Donde a (e) se ha determinado
•Método exige que se cumpla LLB previamente con un patrón de
concentración conocida
2.- Método del factor:
• Se prepara una solución patrón de la A MP = a x b x cMP
sustancia (concentración conocida) y se hace
regla directa con la muestra problema (MP)
A ST = a x b x cST
• Método exige que se cumpla LLB
C MP / A MP = C ST /A ST
3.- Método de la curva de calibración: factor
• Se preparan varias soluciones de A
concentraciones conocidas del patrón y se
grafica vs A de cada solución.
m=axb
• La muestra problema se interpola dentro A MP m=exb
del rango lineal obtenido
a o e se obtienen como un valor C MP C
promedio por lo tanto es la mejor
manera de determinarlo
 APLICACIONES CUANTITATIVAS

Para construir una curva de calibración, debemos tener presente que: :

Ecuación
y = b ± mx
A= a (e) x b x c
de una
recta A = 0 + (ab) x C
A = 0 + (eb) x C

%T -Log T A

Dy/Dx = m = a*b (e*b) Dy/Dx = m = a*b (e*b)

C
C C
 Pasos para construir una Curva de Calibración:
1. Primero hay que determinar la l a la que se hace una curva de calibración:
l se elige a través del espectrograma
Espectrograma
A
Definir λ de máxima
absorción.

l1 l2 l
2. Preparación de serie de soluciones de concentraciones crecientes y realizar medidas de
absorbancia a la l elegida.
Pendientes de l1 y l2 son distintas:
A Curva de calibración  l1 tiene mayor pendiente, lo que
corresponde a un máximo de absorción.
l1
Curva de Calibración adecuada es la de
mayor absorción (tiene mayor
l2
sensibilidad).
Para obtener concentración de M.P se
interpola en la curva adecuada.
MP C
Ejemplo: Se desea determinar la concentración del compuesto XXZ en el producto final de un
proceso industrial.
Para ello, previamente se ha preparado un espectrograma del compuesto sintetizado con una
concentración de 2.5 x 10 -4 M el cual presentó una máxima absorción de 0.729 a 520 nm de
long. de onda.
Su muestra problema (el producto final de un proceso industrial) presentó una A= 0.690 a 520
nm.
Determinar la concentración del producto XXZ en su muestra.

Con la solución de concentración conocida

A= e x b x c e = A/ (b x c) b = 1 cm

e = 0.729 / 2.5 x 10 -4 M = 2916 cm2/mmol

Para la muestra problema con e calculado se determina C

C = A / (b x e) = 0.690 / 2916 = 2.37 x 10-4 M

Ejercicio 1:
a.¿A qué valor de absorbancia corresponde un valor de T de 45%?.
b. Si una solución 0,010 M tiene 45% de T a cierta longitud de onda, ¿cuál será el
porcentaje de transmitancia para una solución 0,020 M de la misma sustancia?.

Ejercicio 2:
Un compuesto con peso molecular 292,16 g/mol, se disuelve en un matraz aforado de
5 mL. Una alícuota de 1,00 mL de esta solución se coloca en un matraz aforado de 10
mL y se afora hasta la marca. La absorbancia medida para esta solución en una celda
con un espesor óptico de 1 cm a 340 nm es de 0,427. La absortividad molar de este
compuesto a 340 nm es de Ɛ= 6130 M-1 cm-1.
a. Calcule la concentración del compuesto en la solución leída.
b. ¿Cuál es la concentración del compuesto en el matraz de 5 mL?
c. ¿Cuántos mg de compuesto se utilizaron para preparar la solución de 5 mL?.
 INSTRUMENTACION
EN ESPECTROSCOPIA DE ABSORCION MOLECULAR
Existen 2 tipos de instrumentos:

1. FOTOMETROS DE FILTRO

2. ESPECTROFOTOMETROS
 FOTÓMETRO DE FILTRO
SELECIONADOR
DE LONGITUD DE
FUENTE ONDA (FILTRO)
LUMINOSA
DETECTOR SISTEMA DE
PRESENTACIÓN
DE DATOS

CONTROL DE PORTAMUESTRA
INTENSIDAD AMPLIFICADOR
LUMINOSA DE SEÑAL

Con el fotómetro de filtro NO se pueden obtener espectrogramas.

 ESPECTROFOTÓMETRO

SELECIONADOR DE
LONGITUD DE ONDA
(MONOCROMADOR)
FUENTE
LUMINOSA DETECTOR
SISTEMA DE
PRESENTACIÓN
DE DATOS

CONTROL DE PORTAMUESTRA
INTENSIDAD AMPLIFICADOR
LUMINOSA DE SEÑAL

Con el espectrofotómetro se pueden obtener espectrogramas moviendo el

monocromador, barriendo así distintas longitudes de onda.
1. FUENTES LUMINOSAS
FUENTES
LUMINOSA FUNCIÓN: Proporcionar la REM de trabajo

TIPOS: Continuas, que emiten dentro de cierto rango de ls

Discontinuas, que emiten ciertas ls discretas

P Teórico REQUISITOS:
Emisión constante: Potencia luminosa constante en función del
Real
tiempo
Tiempo
P = f (t) = cte.

P Teórico b) Distribución espectral constante: Que a las distintas longitudes de

onda de emisión, la potencia luminosa sea constante.
Real
P = f (l) = cte.
l En la práctica, que emita en el rango espectral en el que se hará
la medición .
Lámpara de filamento de wolframio o tungsteno
(medidas absorciométricas en región Vis-IR)

FUNCIONAMIENTO:
Vidrio
Se calienta el filamento de W a través de una corriente
Filamento estabilizada e igual como un cuerpo caliente, emite
de W radiación dependiendo de la temperatura de
calentamiento.
Vacío CARACTERÍSTICAS:
Emite un espectro continuo entre 350 nm y 2,5 um.
La potencia luminosa depende directamente de la
temperatura de calentamiento del filamento. A mayor
temperatura, menor l.
Se utiliza para hacer determinaciones absorciométricas
en la región visible e infrarroja.

Lámparas de tungsteno-halógeno:
Contiene una pequeña cantidad de I2 en
el filamento, lo que le da un tiempo de
vida útil mayor y emiten radiación
abarcando parte de la región UV.
En este caso el bulbo es de cuarzo.
 Lámpara de deuterio e hidrógeno
(medidas absorciométricas en región UV)

FUNCIONAMIENTO:
Cuarzo Una descarga eléctrica disocia al deuterio o hidrógeno
contenido en la lámpara, el cual, al recombinarse
emite radiación en la región UV.
Deuterio o
hidrógeno a CARACTERÍSTICAS:
baja presión Emite un espectro continuo desde 160-375 nm.
También emite espectro discontinuo (líneas) a ls
superiores de 400 nm
Electrodo Es la lámpara de elección para trabajar en la en la
metálico región UV.
El espectro discontinuo muchas veces es utilizado para
Filamento la calibración de escalas de longitudes de ondas de
calentado espectrofotómetros.
PORTAMUESTRAS
FUNCIÓN: Contener la muestra, tanto si esta es líquida o si es gaseosa
CARACTERÍSTICAS: Deben ser transparentes a la radiación en la región
espectral donde se está trabajando
Su colocación debe ser reproducible
Debe ser resistente a la muestra
Debe tener un espesor óptico definido (b)

MATERIAL ÓPTICO: Su elección es exclusivamente dependiente de la región espectral

donde se está trabajando.

VISIBLE: Vidrio Transparente entre 325 nm – 3um

Poliestireno Transparente entre 340 nm – 3um
Metacrilato Transparente entre 285 nm -750 nm

UV: Cuarzo Transparente entre 200 nm – 3um

Metacrilato Con ciertas limitaciones y precauciones (l<285 nm)

ESPESOR ÓPTICO (b) : 1 -100 mm

NORMALMENTE 10 mm (1 cm)
TRANSMISIÓN DE MATERIALES ÓPTICOS MÁS USADOS EN ABSORCIOMETRÍA

CUARZO

VIDRIO
 FORMAS Y TIPOS DE CUBETAS

Tipos:
A. Cilíndricas
B. Prismáticas
C. Semi-micro cubetas
D. Micro-cubetas
E. Cubetas de Flujo
F. Cubetas de succión
A B B C/D E E F
2. SELECCIONADOR DE LONGITUD DE ONDA

FUNCIÓN: Seleccionar cierta l o un intervalo de l (LLB rige

para luz monocromática o ésta tiende a serlo).

TIPOS: a) Discontinuos: Aislan un intervalo o banda de ls

(FILTROS ÓPTICOS) FOTOMETROS
DE FILTRO
b) Continuos: Permiten aislar cualquier l dentro de
cierto rango espectral (MONOCROMADORES)
Filtro Monocromador ESPECTROFOTOMETRO
3. DETECTORES
FUNCIÓN: Transformar la señal luminosa (REM) en señal eléctrica
CARACTERÍSTICAS DE UN DETECTOR IDEAL:
•Sensible: Obtener una alta señal eléctrica con una baja señal
luminosa (alta pendiente (m) de la curva de respuesta).
•Relación señal/ruido alta: para una fácil amplificación
•Respuesta Lineal: Señal proporcional a la potencia luminosa
•Respuesta constante: frente a distintas l.
•Tiempo de respuesta rápido
•Señal eléctrica =0 en ausencia de iluminación
•Señal eléctrica proporcional a potencia luminosa

Respuesta: S = kP + k’
S: Señal eléctrica
S k: Constante dependiente de la l
P: Potencia luminosa
k k’: Corriente oscura: corriente proveniente del
detector que se produce sin que le llegue luz.

k’ Es necesario su ajuste, cada vez que se comienza

P a trabajar con un absorciómetro. Para ello se
obstruye el paso de luz al detector y se lleva la
lectura a %T=0 o A=∞
 ESCALA DE LECTURA EN ABSORCIOMETRIA

A = 2 – log % T

Absorbancia
oo 1 0,7 0,52 0,4 0,3 0,22 0,15 0,097 0,047 O A

70 80 90 100 % T
0 10 20 30 40 50 60

1° Ajuste de
3° Lectura MP 2° Ajuste de blanco
corriente oscura
(cubeta con MP, (cubeta con blanco,
(paso luz
paso luz abierto) paso luz abierto)
interrumpido)
CONDICIONES ÓPTIMAS PARA DETERMINACIONES CUANTITATIVAS
1.- Seleccionar lT

2.- Verificar cumplimiento de LLB

3.- Asegurarse que %T o A medidas estén en un

INTERVALO ADECUADO

ERROR QUE SE COMETA EN LA MEDIDA SEA PEQUEÑO

(incertidumbre sea pequeña)

RUIDO
Ruido (R):
Señal aleatoria que aparece superpuesta a la señal producida por el analito y que afecta la
exactitud y la precisión de la medida.

Relación señal/ruido S/R

En la mayoría de los casos el ruido es constante e independiente de la magnitud, razón por la
cual afecta en mayor forma a señales pequeñas que a señales grandes (error relativo aumenta
con disminución de la señal)
X = media
S/R = X/s
s = desv. estándar

Fuentes de ruido:
Ruido químico: Variables incontroladas que afectan la química del sistema (ej. T°,
humedad, presión, etc).
Ruido instrumental: Se asocia a cada componente de un instrumento y tiene distintos
orígenes
• Ruido térmico o Johnson: Producto de agitación térmica de ē que generan variación
aleatoria de la tensión eléctrica
• Ruido de parpadeo: Sus causas no se conocen claramente pero se relaciona
inversamente con la frecuencia
• Ruido ambiental: Mezcla de ruidos que provienen del entorno.
 TIPOS DE ABSORCIOMETROS
1.- ABSORCIÓMETROS DE HAZ SENCILLO O MONO HAZ:
 ESPECTROFOTÓMETROS
 FOTÓMETROS DE FILTRO

CARACTERÍSTICAS GENERALES:
 Necesitan un estabilizador de la fuente de alimentación
 Se interpone en el haz de luz la cubeta con blanco (P0) y después la cubeta
con muestra
 Es necesario ajustar P0 cada vez que se cambia de l
Ej: Espectrofotómetros Spectronic 20, Shimadzu UV 120-02, Helios d
Colorímetro Jenway 6061, colorímetro Eppendorf, etc
 TIPOS DE ABSORCIOMETROS
2.- ABSORCIÓMETROS DOBLE HAZ
2.1.- Absorciómetros doble haz en el espacio

CARACTERÍSTICAS GENERALES:
 Un espejo rotatorio o un chopper divide el haz en 2. Un haz pasa constantemente por
el blanco (P0) y el otro haz pasa constantemente por la muestra (P)
Requiere 2 detectores idénticos con la misma sensibilidad, uno para el haz que
emerge de la cubeta de referencia y el otro de la cubeta de muestra
 Se requiere mayor intensidad de la fuente luminosa o una mayor amplificación de la
señal
 TIPOS DE ABSORCIOMETROS

2.- ABSORCIÓMETROS DOBLE HAZ

2.1.- Absorciómetros doble haz en el espacio

CARACTERÍSTICAS GENERALES (cont):

 El cuociente P/P0 o su log P/P0 amplificados y se determina electrónicamente
(LECTURA POR RELACIÓN).
 La calibración se hace en 2 etapas:
A) Se obtura el paso de luz por la muestra = 0 %T (corriente oscura)
B) Ambas cubetas se llenan el blanco y se ajusta 100 %T
 No es necesario ajustar 100 %T cada vez que se varía l.
 TIPOS DE ABSORCIOMETROS

2.- ABSORCIÓMETROS DOBLE HAZ

2.2.- Absorciómetros doble haz en el tiempo

CARACTERÍSTICAS GENERALES:
 Los impulsos de radiación se recombinan en un espejo y llegan a un solo detector
 La lectura se hace por relación o por compensación óptica
 TIPOS DE ABSORCIOMETROS

2.3- ABSORCIÓMETROS DOBLE HAZ VIRTUAL

 Corresponde a un espectrofotómetro registrador controlado por un computador que
permite realizar un barrido de las ls.
 Su óptica es de un espectrofotómetro de un haz
1° Se hace un barrido de las ls interponiendo la cubeta con blanco (referencia)
2° La respuesta del detector se digitaliza en tiempo real y se guarda en la
memoria del computador
3° Se hace el barrido de las ls interponiendo la cubeta con muestra
4° Con los datos de P0 y P a cada l se calcula % T o A y se construye un
espectrograma virtual
VENTAJAS:
Mayor sensibilidad que instrumentos doble haz (no se divide el haz de medida)
Menor costo instrumental

DESVENTAJAS:
 Inestabilidades de la lámpara o del detector entre el barrido del blanco
 La muestra genera mayor incertidumbre en la medida
 Mayor deriva
 TIPOS DE ABSORCIOMETROS
3.- ABSORCIÓMETROS MULTICANAL
Espectrofotómetro de “arreglo” de diodos (Fila de diodos)

Monocromador:
Red de difracción FIJA

CARACTERÍSTICAS GENERALES:
 Permite obtener el “barrido” de un rango de
ls en menos de un segundo
 No necesita girar monocromador.
 Se calibra corriente oscura , 100% con blanco
y se obtiene casi instantáneamente el %T o A a
TODAS las ls del rango espectral seleccionado.
 VENTAJAS DE ESPECTROFOTÓMETROS DOBLE HAZ RESPECTO A
MONOHAZ

 FLUCTUACIONES DE FUENTE LUMINOSA NO AFECTAN LECTURA

 NO ES NECESARIO REEMPLAZAR MUESTRA POR BLANCO

 CONSTANTEMENTE SE VA OBTENIENDO LA RELACIÓN P/P0, POR LO

QUE NO SE REQUIERE AJUSTAR 100% T CADA VEZ QUE SE CAMBIE
l

 PERMITE REGISTRAR ESPECTROGRAMAS EN FORMA CONTINUA

(SE SINCRONIZA EL MOVIMIENTO DEL ELEMENTO DISPERSOR
(monocromador) CON EL REGISTRADOR, A TRAVES DE UN MOTOR,
REGISTRANDO %T o A AUTOMATICAMENTE AL CAMBIAR l)
APLICACIONES ESPECTROSCOPIA DE
ABSORCION EN LA REGIÓN VISIBLE
Sustancias coloreadas y Reactivo
cromogénico
 Reactivo Cromogénico

Hay 2 tipos de compuestos:

1.- Sustancias coloreadas (absorbente) ej: KMnO4 (e altos)
2.- Sustancias incoloras (no absorbente) ej: Fe 3+

Para sustancias que no absorben en el visible se

puede hacer reacción para que absorban:

Analito reactivo compuesto

+ cromogénico coloreado
 REQUISITOS DE LOS REACTIVOS UTILIZADOS COMO
REACTIVOS CROMOGÉNICOS

 Estable y soluble en solución

 Desarrollar rápidamente el color
 Reaccionar estequiométrica con el analito
 No absorber a la longitud de onda donde se va a
determinar el complejo
 Ser selectivo
 Ser puro y libre de interferentes.

PUEDEN SER

Inorgánicos: Poco sensibles, poco selectivos y afectados por interferentes.

Ej: SCN- para Fe3+, NH3 para Cu2+.

Orgánicos: Colores selectivos, bastante reproducibles, sin interferencia y

sensibles. Ej. 1,10-fenantrolina, quinalizarina, batocuproína.
 CARACTERÍSTICAS QUE DEBEN TENER LAS SUSTANCIAS
COLOREADAS Y LOS COMPUESTOS COLOREADOS FORMADOS
MEDIANTE UNA REACCIÓN CON UN REACTIVO CROMOGÉNICO

• Estables en función del tiempo

• Color intenso
• Cumplir con la LLB
• Ser soluble
• Tener composición perfectamente definida
• No deben ser afectados por cambios de pH,
temperatura, luz y/o interferentes
 ESTUDIO DE UN SISTEMA COLOREADO
1° Formar el complejo coloreado utilizando información bibliográfica

2° Confeccionar un espectrograma para determinar l de trabajo

3° Estudiar efecto del tiempo: La formación del complejo puede ser lenta o el complejo
puede descomponerse en el tiempo

4° Estudiar efecto del medio (pH): La formación del complejo, como muchas reacciones
químicas, depende del pH. Su ajuste puede eliminar ciertas reacciones interferente

5° Estudiar de concentración de reactivo cromogénico: Es necesario determinar la

concentración óptima de reactivo cromogénico (R.C.) para que sea suficiente (o en exceso)
para reaccionar con el analito a determinar

6° Estudiar de efecto de presencia de interferentes: Hay analitos que pueden reaccionar con
el R.C. disminuyendo la concentración disponible de éste para su reacción con el analito a
determinar, razón por la cual hay que determinar su efecto.

APLICACIONES CUANTITATIVAS:

1° VERIFICACIÓN DE LA LLB: Construcción de curva de calibración A vs C

2° DETERMINACIÓN DE CONCENTRACIÓN DE UNA MUESTRA PROBLEMA ej. Por
Interpolación en curva de calibración
 APLICACIONES DE LA
ESPECTROSCOPIA DE ABSORCION EN
LA REGIÓN ULTRAVIOLETA
TRANSICIÓN REGIÓN DEL ESPECTRO EJEMPLO

s s* UVV (alta E, l corta) CH4 a 125 nm

n s* UVV, a veces UVC Acetona a 190 nm

p p* UV Aldehidos saturados a 180 nm

n p* UVC y VIS Acetona a 277 nm

APLICACIONES UV-VIS:
Moléculas que poseen:
•dobles enlaces
•grupos funcionales no
saturados
CROMÓFOROS:
• Grupos funcionales no saturados responsables de la absorción de REM en la región UV-VIS
• Poseen e de valencia fáciles de exitar (n y p)
• Presentan absorción entre 160-700 nm
• Son estos grupos y no la molécula completa los responsables de la absorción

Estos valores son sólo de orientación porque las l máximas de absorción y su intensidad de
absorción son fuertemente influenciadas por el solvente en el que se disuelven los analitos y por la
presencia de otros grupos cromóforos conjugados o por presencia de otros grupos funcionales
(grupos auxocromos).
AUXOCROMOS:
 Grupos funcionales que no absorben REM en la región UV, pero tienen la propiedad de
desplazar los máximos de absorción de los cromóforos hacia l mayores, aumentando tambien su
intensidad de absorción (aumentando e max)
 Poseen un par de electrones n capaces de interaccionar con electrones p
 ELECCIÓN DE SOLVENTE:

Se debe considerar que:

a) Solvente no debe o absorber radiación en el rango espectral de

trabajo (tanto para aplicaciones cualitativas como cuantitativas)
b) Que no interaccione con la sustancia a determinar
c) Solventes polares tienden a borrar estructura vibracional de la
molécula, por lo que los espectros se simplifican (bandas de
absorción son anchas y poco definidas).
d) Se debe tener en cuenta si existe un equilibrio dependiente de
pH
e) Se debe tener en cuenta efectos batocrómico, hipsocrómico de
los solventes
1,2,4,5-TETRAZINA

VAPORES PUROS

DISUELTO EN
HEXANO

DISUELTO EN
AGUA
ESPECTROS ULTRAVIOLETA DE COMPUESTOS ORGÁNICOS REPRESENTATIVOS
 EFECTOS QUE MODIFICAN ESPECTROS DE ABSORCION UV

EFECTO BATOCRÓMICO: es el desplazamiento de un pico de absorción

hacia l mayores

EFECTO HIPSOCRÓMICO: es el desplazamiento de un pico de absorción

hacia l más cortas

EFECTO HIPERCRÓMICO: es el incremento de la intensidad de una banda de

absorción (aumento de e max.)

EFECTO HIPOCRÓMICO: disminución de la intensidad de una banda de

absorción (disminución de e max)