Cátedra: Microbiología General

Universidad nacional Daniel Alcides Carrión

Facultad de ciencias agropecuarias
E.F.P.ING.IND.ALIMENTARIAS

MORFOLOGÍA DE LEVADURAS

PRÁCTICA NO. 10

CATEDRA: MICROBIOLOGIA GENERAL

CATEDRATICO:
Blgo. IBAÑEZ OJEDA Julio

ALUMNOS
RUBIN TORRES Jerson David

SEMESTRE:
V

LA MERCED - CHANCHAMAYO
2018

Mg. Blgo. Julio IBÁÑEZ OJEDA E-mail: jibanezo@hotmail.com

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I. INTRODUCCION

Los hongos microscópicos comprenden las levaduras, hongos filamentososy mohos

pueden usarse en la degradacion de hidrocarburos crecentanto en agua dulce como en
agua salada algunos hongos producen sustancias toxicas en alimentos. Los hongos son
muy abundantes y ubicuos en la naturaleza. Son excelentes degradadores de materia
orgánica. Los hongos son diferentes a otros organismos vivos, carecen de clorofila, no
pueden ser autótrofos, por tanto, necesitan obtener sus requerimientos nutricionales de
material orgánico ya formado. Son organismos eucariotas. Son quimio heterótrofos.
*Son inmóviles. Pueden ser unicelulares o pluricelulares.
La célula fúngica es una de las menos conocidas. Posee organización eucariota
también. Se suele decir a menudo que este tipo de célula se parece a la célula animal.
Anatomía: elementos de la envoltura: Cápsula Pared celular Membrana plasmática
elementos internos: Núcleo Sistema endomembranal Ribosomas Anatomía. Situada
fuera de la pared celular (en pocas especies) Del género Cryptococcus, como el
Cryptococcus neoformans. cápsula Compuesta por polisacáridos
(glucoroxidomananos) que brinda protección frente a las defensas del hospedero. En
hongos unicelulares tiene polisacáridos mucilaginosos, con capacidad inmunógena y
acción antifagocitaria. cápsula: Tiene crecimiento constate. Protege a la célula. Le da
su forma característica. Tiene nutrición absortiva.

II. OBJETIVOS

2.1. OBJETIVO GENERAL

 Reconocer y manejar la técnicas de coloración para levaduras de los

géneros Saccharomyces, Schizosaccharomyces sp., Zygosaccharomyces sp
y/o Candida sp. asociados a fermentaciones yalteraciones en alimentos.

2.2. OBJETIVO ESPECIFICOS

 Determinar, morfológicamente y con ayuda del microscopio óptico, los

géneros Saccharomyces, Schizosaccharomyces sp., Zygosaccharomyces sp
y/o Candida sp. haciendo usod e las técnicas de tinción simples para
levaduras.

III. MATERIALES Y METODOS

3.1. MATERIALES

 Muestra: Levaduras granuladas o pasta (Fleshmman); rapado de lesiones

gingivales (mucosa labial) y Candida sp. obtenida de ulceras expuestas
(manchas de recubrimiento blanquecinas).
 Pipeta Pasteur
 Asa de Koll
 Mechero de alcohol
 Palillos mordadientes

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 Algodón hidrófilo
 Laminas portaobjeto y cubreobjeto.
 Cubeta de tinción.
 Alcohol de 70%
 Jabón carbólico
 Bálsamo de canadá.
 Colorante: Giemsa, azul de lactofenol, azul de metileno 10%; Gram o Ziehl
Neelsen.
 lugol
 Agua destilada
 Placas petri
 Solución de Carnoy
 Xilol
 Microscopio óptico compuesto.

3.2. PROCEDIMIENTO

1. Observación de Saccharomyces sp., Schizosaccharomyces sp. y/o

Zygosaccharomyces sp.

Técnica:

a. Inactivación de las ascosporas de S. cerevisiae u otras levaduras con

fenol al 10% por 10 minutos dentro e la placa petri.
b. Fijar en Carnoy (ácido acético glacial 1 volumen: alcohol 95° 3
volúmenes).
c. Colorear con Giemsa diluido en agua destilada: 1/10 por 10 minutos (se
puede emplear Giemsa diluido 1/40 por 1 hora).
d. Retirar la lámina portaobjetos y con una pinza levantar la lámina
cubreobjeto pero con sumo cuidado, ya que puede romperse las hifas y
variar su disposición natural en la lámina cubreobjeto.
e. Añadir 1 ml. del fijador
f. Luego, dejar reposar hasta que se evapore por 3 a 5 minutos.
g. Enjuagar con alcohol.
h. Agregar Giemsa en cantidad suficiente para cubrir las estructuras.
i. Enjuagar con agua destilada, dejar secar al medio ambiente.
j. Luego, secar por lo menos 10 minutos, aclarar con xilol para montar
con bálsamo de canadá.
k. Observar al microscopio a menor aumento.

IV. RESULTADO Y DISCUSIONES

4.1. RESULTADOS

Después de realizar los procedimientos como seguimos de la guía, lo llevamos al

microscopio y observamos primero en 10X la levadura media verdosa esto
estaba solo con agua y en 40X ya se observó en forma de dos helicoidales juntos
una sobre otra, y en resolución de 40X ya con lactofenol se pudo apreciar

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colonia de levadura ya reproducido se encontró en gran cantidad una sobre otra

formo lógicamente en corma circular elíptica.

4.2. DISCUSIONES

 SEGÚN GARCIA D. (2010), Las levaduras son hongos cuyo crecimiento

es generalmente unicelular, son sprófitas y de manera característica
fermentan gran cantidad de carbohidratos. Su morfología celular se describe
igual que para las bacterias y su morfología microscópica presenta formas
características: elíptica, esférica, alimonada etc., midiendo de 2 a 8micras de
diámetro por 3 a 15 micras de largo. Su reproducción asexual generalmente
es por gemación o por fisión binaria y las que presentan reproducción sexual
por ascosporas, se les agrupa dentro de los ascomicetos. Desde el punto de
vista industrial las levaduras son muy importantes por su participación en
diversas fermentaciones.

 SEGÚN LA PRACTICA, se observó el crecimiento de las levaduras al

principio poco luego en gran cantidad se observó la morfología como
menciona García D. se observó en forma esférica elíptica una sobre otros
alimonadas.

V. CONCLUSIONES

 Se reconoció y se manejó la técnicas de coloración para levaduras de los géneros

Saccharomyces, Schizosaccharomyces sp., Zygosaccharomyces sp y/o Candida
sp. asociados a fermentaciones y alteraciones en alimentos.

 Se determinó, morfológicamente y con ayuda del microscopio óptico, los géneros

Saccharomyces, Schizosaccharomyces sp., Zygosaccharomyces sp y/o Candida
sp. haciendo usod e las técnicas de tinción simples para levaduras.

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VI. BIBLIOGRAFIA

 GARCIA D. Discusión, [en línea], Lima, Perú 2010, [fecha de acceso 17 de

Julio del 2018].
URL disponible en:
https://microbiologiaitt.es.tl/12-.--Cultivo-y-observaci%F3n-de-levaduras.htm

 FRANCISCO C. Respuesta del cuestionario uno, [en línea], Lima, Perú 2009,
[fecha de acceso 17 de Julio del 2018].
URL disponible en:
http://www.icarito.cl/2009/12/estructura-de-las-levaduras.shtml/

 EDIHT R. Respuesta del cuestionario dos, [en línea], Lima, Perú 2013, [fecha
de acceso 17 de Julio del 2018].
URL disponible en:
https://prezi.com/caimquizmzsc/hongos-filamentosos-y-levaduriformes/

 JULIO C. Respuesta del cuestionario tres, [en línea], Madrid, España 2013,
[fecha de acceso 17 de Julio del 2018].
URL disponible en:
http://juliochewurlescuintla.blogspot.com/2013/02/estructura-de-
loshongos.html

 HERNANDEZ M. Respuesta del cuestionario cuatro, [en línea], Barcelona,

España 2018, [fecha de acceso 17 de Julio del 2018].
URL disponible en:
https://es.wikipedia.org/wiki/Fermentaci%C3%B3n_alcoh%C3%B3lica

 ROJAS N. Respuesta del cuestionario cinco, [en línea], Barcelona, España

2017, [fecha de acceso 17 de Julio del 2018].
URL disponible en:
https://copro.com.ar/Solucion_de_Carnoy.html
VII.CUESTIONARIO

1. Esquematice una levadura indicando sus principales estructuras internas.

a. Pared celular: permite el paso de aire, líquidos y alimentos.
b. Protoplasma: es el cuerpo propiamente dicho, contiene grasas, proteínas e
hidratos de carbono con sus sales y vitaminas.
c. Núcleo: al dividirse da lugar a la fermentación de nuevas células.
d. Vacuola: Cavidad con sustancias útiles para la célula.
En condiciones normales, se produce emitiendo un “brote” llamado yema que va

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creciendo hasta formar una nueva célula, cada célula se reproduce a sí misma en
2 horas
La levadura se alimenta de proteínas, sales minerales y principalmente sacarosa y
maltosa, este ultimo azúcar contenido naturalmente en la harina. A los azucares los
descompone transformándolos en alcohol, anhídrido carbónico (co2) “gas” y otras
sustancias que hacen a los sabores y aromas. A este proceso se lo denomina
fermentación y se facilita por la acción de las enzimas que poseen las levaduras.
Cuanto mas fuerte y sana sean las levaduras mayor será su capacidad enzimática.
Como todo ser vivo, necesita temperaturas optimas para su desarrollo y
reproducción, siendo el rango óptimo de 28ºC a 35ºC grados. Se conserva en la
heladera a 5ºC, durante aproximadamente 7 días, mientras que si la sometemos a
mas de 40ºC se alterará y pasando los 58ºC morirá.

Fuente: Francisco C. (2009).

2. Mencione al menos ocho ejemplos de especies de hongos levaduriformes.

 Malassezia
 Esporotrix
 Histoplasma
 Blastomyces
 Paracoccidiodes
 Cryptococcus
 Candida (tambien crece en forma de seudohifa)
 Coccidioides.
 Orulopsis, Candida
 Schizosaccaromyces
 Saccharomyces
 Pseudomicelios
Fuente: Edith R. (2013).

3. Diga Ud. 5 diferencias estructurales entre levaduras y mohos.

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 Carecen de fases móviles, tales como formas flageladas, con la excepción de

los gametos masculinos y las esporas de algunas
formas filogenéticamente “primitivas” (los Chytridiomycota).
 No poseen plasmodesmos.
 La pared celular de los hongos se compone de glucanos y quitina; los primeros
se presentan también en plantas, y los segundos, en
el exoesqueleto de artrópodos; esta combinación es única.
 Además, y a diferencia de las plantas y oomicetos, las paredes celulares de los
hongos carecen de celulosa.
 La mayoría de los hongos carecen de un sistema eficiente de transporte a
distancia de sustancias (estructuras que en plantas conforman
el xilema y floema).
 Algunas especies, como Armillaria, desarrollan rizomorfos, estructuras que
guardan una relación funcional con las raíces de las plantas.
 En cuanto a rutas metabólicas, los hongos poseen algunas vías biosintéticas
comunes a las plantas, como la ruta de síntesis de terpenos a través del ácido
mevalónico y el pirofosfato.
Fuente: Julio C. (2013).

4. Detalle Ud. el mecanismo bioquímico por el cual las levaduras realizan

fermentaciones.

es un proceso biológico de fermentación en plena ausencia de oxígeno (- O2),

originado por la actividad de algunos microorganismos que procesan los hidratos de
carbono (por regla general, azúcares: por ejemplo, la glucosa, la fructosa,
la sacarosa, es decir, cualquier sustancia que tenga la forma empírica de la glucosa,
es decir, una hexosa) para obtener como productos finales: un alcohol en forma
de etanol (cuya fórmula química es: CH3-CH2-OH), dióxido de carbono (CO2) en
forma de gas y moléculas de adenosín trifosfato (ATP) que consumen los propios
microorganismos en su metabolismo celular energético anaeróbico. El etanol
resultante se emplea en la elaboración de algunas bebidas alcohólicas, tales como
el vino, la cerveza, la sidra, el cava, etc.1 En la actualidad ha empezado a
sintetizarse también etanol mediante la fermentación a nivel industrial a gran escala
para ser empleado como biocombustible.
Fuente: Hernandez M. (2018).

5. En las observaciones de levaduras, ¿Cómo actúa el reactivo Carnoy?.

Solución de Carnoy es un fijador compuesta de 60% etanol30% cloroformo y el
10% glacial ácido acético.
Solución de Carnoy se compone de:

 1 g de cloruro férrico (FECLAS) disuelto en 24 mL de alcohol absoluto

 12 mL de cloroformo
 4 mL de glacial ácido acético
Esta es la misma proporción en volumen de la fórmula anterior, con la adición de
cloruro férrico.

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Es un fijador ácido especialmente indicado para preservar ácidos nucleicos

(núcleos, cromatina, grumos de Nissl) y glucógeno. También es útil para la
preservación de las proteínas fibrosas. Es de acción muy rápida gracias al
cloroformo y es por ello recomendado para acortar tiempos de fijación (1 hora
aproximadamente) y, además, la propia fijación deshidrata la muestra. Así, tras la
fijación y unos cortos baños en etanol absoluto se pude proceder a la inclusión.
Fuente: Rojas N. (2017)

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