Académique Documents
Professionnel Documents
Culture Documents
B. La microsopie électronique
1. Le microscope électronique à transmission
a. Principe
1. On diminue la limite de séparation en diminuant la longueur
d’onde d’excitation à utilisation des électrons à la place des
photons
b. Caractéristiques
1. d = 1 nm
2. G = de 1400x à 500 000x
c. Description
1. Canon à électrodes
2. Accélérateur d’électrons
3. Lentille électromagnétique
4. Ecran fluorescent de visualisation
2. Le microscope électronique à balayage
a. Principe
1. Les cellules sont traitées par des sels de métaux lourds
2. Les électrons émis par la cathode vont balayer la surface de
la cellule
b. Caractéristiques
1. d = 10 nm
2. G = 20 000x
c. Applications
1. Biologie cellulaire
3. Préparation des échantillons
a. Coloration positive
1. Fixation chimique
2. Déshydratation
3. Inclusion dans la résine
4. Coupes de 50 à 100 nm
5. Dépôt de sels de métaux lourds à augmentation du contraste
b. Coloration négative
1. Les sels de métaux lourds se déposent après évaporation de
l’eau autour des particules
c. Ombrage de particules & réplication de surface
1. Réalisation de répliques quand la surface est trop épaisse
pour être traversée par les électrons
d. Cryodécapage & cryofracture
1. Cryofracture
Congélation des organites dans l’azote liquide
Fracture du bloc
Réplication par ombrage
2. Cryodécapage
Congélation ultra rapide
Fracture de l’échantillon
Sublmation de l’eau sous vide
Réplication
II. Les techniques de fractionnement des constituants cellulaires
B. Préparation de l’homogénat cellulaire
1. Méthodes permettant la rupture de la membrane plasmique
a. Mécanique : broyage
b. Choc osmotique
c. Congélations décongélations successives
d. Ultra-sons
e. Attaque enzymatique
2. Précautions à respecter pour obtenir un bon homogénat
a. Liquide isotonique
b. Basse température
c. En présence d’agents réducteurs
d. PH neutre
C. La séparation des organites
1. Par centrifugation différentielle
a. Augmentation de la vitesse et du temps
2. Par centrifugation en gradient de densité (ultracentrifugation)
a. Principe : séparation des organites en fonction de leur constante
de sédimentation, fonction de leur masse molaire
1. Séparation en solution de saccharose de 5 à 20 %
2. Dépôt des organites en surface
3. Centrifugation : arrêt de la migration quand les organites
rencontrent une couche de saccharose de densité supérieure à
la leur
4. Séparation des organites en fractions ( = aliquotes)
D. Suivi de la séparation des fractions
1. Utilisation de marqueurs moléculaires des organites
a. Ce sont des enzymes caractéristiques de ces organites
b. On peut aussi évaluer la purification par microscopie
E. Applications
1. Utilisation de systèmes cellulaires
a. Ex : synthèses protéiques in vitro
III. Techniques de marquage cellulaire
. Techniques cytochimiques et immunocytochimiques ; techniques
cytoenzymologiques
1. Techniques cytochimiques
a. Mise en évidence d’un composé chimique de la cellule au
microscope optique/électronique
2. Techniques immunocytochimiques
a. En microscopie optique
b. En microscopie électronique
3. Techniques cytoenzymologiques
a. Mise en évidence dans une cellule de protéines à activité
enzymatique
A. Techniques de marquage isotopique
1. Principaux isotopes utilisés en biologie
a. X(A, Z) : A différent, Z identique
b. Isotopes non radioactifs : 15N
c. Isotopes radioactifs : a, b, g
d. 3H ; 14C ; 131I ; 32P ; 35S
Archéobactéries Plantes
Animaux
Forme d’organisation Unicellulaire Uni ou pluricellulaire
Organites, Absent Présent, complexe,
compartimentation spécialisé
cellulaire
ADN Petit, circulaire, sans Grand, dans le noyau
introns cellulaire, nombreux introns
ARN : synthèse et Simple : dans le cytoplasme Complexe : dans le noyau
maturation cellulaire
Protéines : synthèse et Simple : couplée à la Complexe : dans le
maturation synthèse de l’ARN cytoplasme et le réticulum
endoplasmique rugueux
Métabolisme Anaérobie ou aérobie Surtout aérobie
Grande capacité
d’adaptation
Endo/exocytose Non oui
* canaux ioniques
* transporteurs
* enzymes
Caractères Molécules amphiphiles Essentiellement des glycoprotéines, oses fixés
côté extracellulaire
Catégories Glycérophospholipides Périphériques
Le Cytosquelette et
la Motilité cellulaire
I. Généralités
A. Définitions
1. Le cytosquelette
a. Est constitué d’un ensemble de filaments protéiques que l’on
classe en trois catégories en fonction du diamètre des filaments
2. Les microfilaments
a. 7 nm
b. Dans toutes les cellules eucaryotes (essentiellement musculaires)
c. Ex : actine
3. Les filaments intermédiaires
a. 10 nm
b. La constitution biochimique de ces filaments est très variée
c. Ex : neurofilaments, tomofilaments
4. Les microtubules
a. 25 nm
b. Présents dans toutes les cellules eucaryotes
B. Rôles
1. Morphologie de la cellule
a. Déformation du polynucléaire par émission de pseudopodes
b. Cellules nerveuses
2. Motilité cellulaire
a. Mouvements cellulaires
1. Contraction de la cellule (cellules musculaires)
2. Déplacements de la cellule (mouvements grâce aux
pseudopodes, filaments)
b. Mouvements des organites
1. Déplacements des mitochondries
2. Transport axonal
II. Les microfilaments
A. Microfilaments et cellules musculaires
1. Différents types de cellules musculaires
a. Cellules musculaires squelettiques (striées, polynuclées)
b. Cellules musculaires cardiaques (striées)
c. Cellules musculaires lisses (non striées, paroi des vaisseaux
sanguins et des intestins)
2. Microfilaments et cellules musculaires squelettiques
a. Organisation du muscle squelettique
1. Muscle squelettique = responsable du mouvement
2. Muscle squelettique à ensemble de fibres musculaires
3. Chaque cellule musculaire est constituée de
Plusieurs noyaux
Myofibrilles = association de filaments protéiques
(actine et myosine)
Organites classiques d’une cellule (mitochondrie,
Golgi, Reticulum Endoplasmique)
b. Organisation de la cellule musculaire : ultrastructure
1. Les cellules possèdent plusieurs noyaux rejetés à la
périphérie
2. La taille des filaments reste constante mais celle des zones
de chevauchement est variable
c. Organisation moléculaire des myofibrilles
1. Filament mince
Principales protéines
Actine + tropomyosine + troponine
L’actine résulte de la polymérisation de
molécules d’actine G (= Globulaire) : c’est
une structure dynamique : " modèle du tapis
roulant "
La troponine est constituée de 3 sous-unités
o TnC catalytique
o TnI inhibitrice
o TnT tropomyosine
Rôle
L’actine est une protéine motrice : interaction
entre actimyosine et actinine
Les autres protéines viennent s’ajouter à
l’actine, elles interviennent dans la régulation
de la contraction musculaire
La troponine se fixe sur l’actine et empêche
l’interaction entre l’actyne et la myosine