Práctica de Laboratorio N°2

Escuela de Estudios Generales

Área de Ingenierías
Curso: Laboratorio de Biología
Semestre Académico 2018-1
Profesor: Álvarez Bejar
Grupo: 1 (9:30 a.m.- 11:00a.m.)
Alumnos:
-Aguirre Gonzales Nayiph Meynlee
-Aniceto Contreras Renzo Nicolás
-Bardales López Lucy Erika
-Lucano Barrientos Johana
-Palomino Gutierrez Erick Victor
-Osorio Uribe Eduardo Franco
-Rios Espinoza Mariangela Jeanine

1
Resumen
En el presente informe se presentarán los fundamentos teóricos y prácticos de las distintas
reacciones experimentales que se hicieron en el laboratorio. El objetivo de este experimento
fue el de identificar las biomoléculas conocidas como “Proteinas” y “Lípidos. Se define de
qué están hechas y donde podemos encontrarlas. Además se muestran muchas de sus
características y propiedades celulares. Como también se menciona las distintas funciones
que cumplen en los cuerpos de los seres vivos y no vivos (virus).

2
Índice
Resumen.............................................................................................................................................. 2
Índice ................................................................................................................................................... 3
1. Introducción ................................................................................................................................ 4
2. Marco Teórico ............................................................................................................................. 5
3. Detalles Experimentales .............................................................................................................. 7
4. Reacciones Químicas ................................................................................................................... 9
5. Discusión de Resultados ............................................................................................................ 13
6. Conclusiones.............................................................................................................................. 14
7. Recomendaciones ..................................................................................................................... 14
8. Apéndice.................................................................................................................................... 15

3
 1. Introducción

En el cuerpo humano existen distintos tipos de moléculas, algunas tienen función de reserva
y otras de protección o estructurales.

Estas moléculas generalmente son de estructura; sin embargo cumplen distintas funciones:
como transporte, recubrimiento o protección, y hasta pueden ser usados como reserva (en
última instancia). Estamos hablando, pues, de las “proteínas”; la cual podemos encontrar
principalmente como parte de estructuras celulares formando tejidos como lo hace el
colágeno. Su función de transporte es representada por los glóbulos rojos que contienen
hemoglobina y son encargados de transportar Oxígeno por el torrente sanguíneo.
Finalmente su función de reserva es expresada cuando las reservas energéticas se agotan en
el cuerpo; es decir, los lípidos son utilizados en su totalidad y el cuerpo aún necesita
energía; es entonces cuando el cuerpo comienza a degradar las proteínas como las
estructurales (lo cual produce el enflaquecimiento) y así las va consumiendo.

Pero los “Lípidos” no son simplemente biomoléculas de reserva, pues pueden cumplir
función estructural como la quitina en los hongos e insectos. También se ve expresada
dicha función en la membrana celular formada por una bicapa de fosfolípidos. Pero
principalmente cumplen la función de reservas energéticas.

4
 2. Marco Teórico

PROTEINAS

Las proteínas son moléculas formadas por aminoácidos que están unidos por un tipo de
enlaces conocidos como enlaces peptídicos. El orden y la disposición de los aminoácidos
dependen del código genético de cada persona. Todas las proteínas están compuestas por:
Carbono, Hidrógeno, Oxígeno, Nitrógeno; y la mayoría contiene además azufre y fósforo.

Las proteínas suponen aproximadamente la mitad del peso de los tejidos del organismo, y
están presentes en todas las células del cuerpo, además de participar en prácticamente todos
los procesos biológicos que se producen.

Funciones:

-Las enzimas son proteínas que actúan como catalizadores en las células y hacen posibles
las reacciones disminuyendo la cantidad de energía de activación que necesita.

-Protección: función de defensa y la cumplen los anticuerpos, los cuales son proteínas que
se presentan en los vertebrados.

-Transporte: la hemoglobina, se encarga de transportar el oxígeno a todas partes del cuerpo

de los vertebrados. Caseína transporta oxígeno en los músculos. Seroalbúmina transporta
ácidos grasos en la sangre.

-Algunas proteínas funcionan como hormonas, estas se producen en tejidos endocrinos.

Ejemplo: la insulina regula la concentración de azúcar en la sangre.

-Estructural: Las proteínas forman parte de la membrana celular y permite la regeneración

de tejidos epiteliales (piel).

-Ante la ausencia de otras sustancias que proveen de energía, las proteínas pueden ser
fuente de energía para los organismos.

Clasificación:

5
-Proteínas fibrosas: tienen una estructura alargada, formada por largos filamentos de
proteínas, de forma cilíndrica. No son solubles en agua. Ejemplo: colágeno.

-Proteínas globulares: tienen una naturaleza esférica. Debido a su distribución de

aminoácidos son muy solubles en las soluciones acuosas. Ejemplo: mioglobina

-Proteínas de membrana: se encuentran en asociadas con las membranas lipídicas. No son

solubles en soluciones acuosas. Ejemplo: rodopsina.

LIPIDOS

Los lípidos son biomoléculas orgánicas que existen de forma natural en seres vivos
formadas básicamente por carbono e hidrógeno y generalmente también oxígeno. Es un
grupo de sustancias muy heterogéneas que sólo tienen en común estas dos características:
Son insolubles en agua y son solubles en disolventes orgánicos, como éter, cloroformo,
benceno, etc.

Los lípidos son encontrados en productos lácteos, carnes, aceites, etc. Representan el 10%
del peso corporal humano por lo cual es fundamental en la dieta.

Funciones:

-Reservas energéticas a largo plazo

-Transportan vitaminas liposolubles (A, D, E, K)

-Retardan la sensación de hambre

-Protege órganos internos, ya que se depositan debajo de la piel

-Actúa como aislante térmico (como en las ballenas)

-Las células utilizan estas sustancias como combustible, como bloques de construcción de
hormonas esteroideas y sales biliares

-Las ceras son importantes para los vegetales porque los impermeabilizan, recubren flores,
hojas, algunos tallos y frutos. Recubren la piel, el plumaje de aves.

Clasificación:

6
-Simples: Son los que contienen carbono, hidrógeno y oxígeno.
- Acilglicéridos. Son ésteres de ácidos grasos con glicerol. Cuando son sólidos se les llama
grasas y cuando son líquidos a temperatura ambiente se llaman aceites.
- Céridos (ceras).

-Complejos: Además de contener en su molécula carbono, hidrógeno y oxígeno, contienen

otros elementos como nitrógeno, fósforo, azufre u otra biomolécula como un glúcido. Son
las principales moléculas que forman las membranas celulares. Ejemplos: Fosfolípidos,
Fosfoglicéridos, Fosfoesfingolípidos, Glucolípidos, Cerebrósidos, Gangliósidos.

3. Detalles Experimentales
Ilustración 1 Reacción de Biuret:

-Luego de rotular el tubo, se coloca 2ml de la

ovoalbúmina (clara de huevo)
-Se agrega 2 gotas de NaOH y 2 gotas de Biuret
-Agitar y observar coloración

Fuente: Propia

Reacción Xantroproteica:
Ilustración 2

-Se coloca 2ml de ovoalbúmina

-Se agrega 2 gotas de ácido nítrico (HNO3 )
-Calentar por unos minutos y observar su
coloración y endurecimiento

Fuente: Propia

7
 Reaccion con la Ninhidrina:
Ilustración 3

-Colocar 1ml de ovoalbúmina

-Se agregan 2 a más gotas de Ninhidrina

-Después de calentar por unos minutos toma una
coloración entre purpura o azul oscuro.

Fuente: Propia

Ilustración 4 Fuente: Propia

Prueba de Sudán:
-Agregar al tubo unos 1 ml de aceite
-Luego poner 2 gotas del colorante de Sudán III
-Agitar suavemente y dejar reposar por unos
cuantos minutos.
-Observar la coloración rojiza que obtiene

Ilustración 5 Fuente: Propia

Solubilidad:
1) 1ml Agua destilada y 2 gota de aceite
2) 1ml Alcohol y 2 gota de aceite
3) 1ml Cloroformo y 2 gota de aceite
4) 1ml Acetona y 2 gota de aceite
Agitarlos y observar resultados
1) Se separan en dos fases y no se mezclan

8
 2) Se separan al igual que el agua
3 y 4) Se disuelven parcial o totalmente Ilustración 6 Fuente: Propia

Emulsión:
1) 1ml Agua y 1ml de aceite
2) 1ml Agua, 1ml de aceite y 4 gotas de
NaOH
Al agregar las 4 gotas de NaOH el agua y el
aceite pueden mezclarse.

4. Reacciones Químicas

Reactivos:

- Ácido sulfúrico y nitroso concentrado.

- NaOH y CuSO4.
- Ninhidrina.
- Alcohol.
- Cloroformo.
- Agua destilada.

Muestras:

- Ovoalbúmina diluida (clara de huevo).

- Aceite (diferentes tipos).

9
Para la identificación de proteínas

a) Reacción con la ninhidrina

Este un reactivo común que se usa para observar bandas de separación de
aminoácidos. La ninhidrina reacciona con los aminoácidos alfa, formando una
base de Schiff, resultando un complejo azul-violeta intenso. La prueba da
positiva a proteínas y aminoácidos. Si una prueba da positiva a la ninhidrina, y
negativa a Biuret, quiere decir que no hay proteínas, pero sí aminoácidos libres.

b) Reacción de Biuret
El reactivo contiene CuSO4 en solución acuosa alcalina de NaOH. Esta prueba
da positiva para proteínas, péptidos cortos y compuestos con dos o más enlaces
peptídicos consecutivos en sus moléculas, formando un compuesto de color
violeta. En caso de dar negativo, el compuesto tomará una coloración amarilla.

10
c) Reacción Xantoproteica
Es utilizado para determinar la presencia de proteínas solubles, empleando ácido
nítrico. La prueba da positivo en proteínas con aminoácidos que tengan anillo
aromático (grupo bencénico), dando al compuesto un color amarillo.

11
Para la identificación de lípidos

a) Sudan III
Se usa para detectar la presencia de grasas mediante la tinción de los
triglicéridos. Es un colorante indiferente, es decir, no tiene afinidad por
estructuras ácidas o básicas. Cuando da positivo el compuesto toma una

tonalidad roja-rosada.

b) Solubilidad
Se trata de la capacidad de una sustancia para disolverse en otra, en este caso, la
capacidad de los lípidos para ser solubles en solventes orgánicos.

c) Emulsión de lípidos
La emulsión se trata de la mezcla de dos líquidos inmiscibles de manera
homogénea, es ese sentido, la emulsión de las grasas permitiría mezclarlas con
otras sustancias a base de agua.

12
 5. Discusión de Resultados
En los resultados obtenidos en las distintas muestras que se han podido observar, se
puede relacionar los siguientes conceptos:

En el caso de la reacción de Biuret, este reactivo tiene la capacidad de teñir de color

violeta a la mezcla de albumina diluida con el NaOH. Esta coloración se debe a que el
reactivo contiene 𝐶𝑢𝑆𝑂4 al estar en una solución acuosa alcalina, para tener esta
solucion se le agrega NaOH. Apenas le añadimos la reacción vemos como se colorea de
violeta por la formación de un complejo que se da entre Cu+2 y los pares de electrones
no compartidos del nitrógeno la cual son parte de los enlaces peptídicos, son enlaces de
proteinas. Esta última nos da entender que el reactivo de Biuret nos puede ayudar para
la identificación de proteínas.

En el caso de la reacción de Xantoproteica, este reactivo tiñe de color amarillo a la

mezcla de albumina diluida con HNO3 . Esta coloracion se debe a que se forma
compuestos nitrados amarillos. Esta coloracion nos muestra la presencia de tirosina o
triptófano en una proteína. Al obtener color amarillo es porque contiene proteína. Se
debe mencionar que esta coloracion se da en proteínas que contienen anillo aromatico.

En el caso de la reacción con la Ninhidrina, este reactivo tiñe de color azul-violeta al

mezclarse con ovoalbúmina diluida. Despues de añadir el reactivo de Ninhidrina a la
ovoalbúmina diluida, se le lleva al mechero a calentar. Este paso de calentar es donde se
reacciona el reactivo con el alfa-aminoacido formando, asi, un compuesto de color azul-
violeta. Con eso se puede concluir que al cambiar de color nos encontramos con una
proteína. Hay que mencionar que para que suceda esto se debe de añadir más reactivo
en el tubo de ensayo que la ovoalbúmina, sino saldrá un color rosado blanquecino.

En el caso de la prueba de Sudan III, este reactivo tiñe de color rojo rosada al mezclarse
con aceite. Esto se da gracias a que es más soluble en los lípidos.

13
En el caso de la solubilidad, se basa de la característica de los lípidos que es su
solubilidad. En este caso usamos cinco muestras: agua destilada, alcohol, cloroformo,
acetona. En cada una de estas muestras le echamos una gota de aceite y a continuación
vemos como se separan estos dos elementos. Con esto podemos ver su gran
característica, la solubilidad.

6. Conclusiones

Si bien los lípidos y proteínas pueden cumplir las mismas funciones, estos están muy
diferenciados por su objetivo principal y su estructura molecular. Mientras unos tienen
un enlace de tipo peptídico, los otros usan enlaces éster. Y es esta una de las muchas
diferenciaciones que hemos podido observar en estas moléculas. Su consistencia y
cómo reaccionan con los compuestos usados en la experimentación sirvieron para poder
identificarlos satisfactoriamente.

Y esta diferenciación es muy importante, pues trabajar con moléculas tan importantes
para el cuerpo puede ser delicado a veces y es necesario identificar cuál es cuál para
poder usar los reactivos correctos sin dañar o perjudicar ninguna de dichas moléculas.

7. Recomendaciones

-Prestar atención a las indicaciones del profesor y anotar las ideas conceptuales del tema
que va diciendo durante la práctica, para que luego puedan comparar con los resultados
de sus pruebas en el laboratorio.

-Realizar cuidadosamente paso por paso, las indicaciones de la guía para poder tener los
resultados esperados.

-Anotar detalle a detalle cada paso de la practica en el laboratorio, luego podrá ser usado
en las observaciones para el informe.

14
-Pedir la asistencia del profesor cuando no se está seguro de los pasos indicados por la
guía del laboratorio.

8. Apéndice
1. Explique la diferencia a nivel de estructura química y a nivel de función

fisiológica y biológica de las proteínas, carbohidratos y lípidos.

Para poder responder la pregunta planteada en clase, debemos tener claro la idea sobre

las biomoléculas. Las biomoléculas son el resultado de la unión entre átomos de uno o

más bioelementos que van a adoptar diversas conformaciones y distintas funciones

dependiendo del grado de complejidad que cada una de estas pueda tener. Como ya

mencionamos, muchas de estas biomoléculas van a tener distintas funciones, de las

cuales podemos resaltar las siguientes: un papel estructural (proteínas), conservación e

información hereditaria (ácidos nucleicos), procurar mantener el mecanismo activo

(enzimas y hormonas), entre otras. De estas, acogeremos las necesarias para definirlas y

diferenciarlas con el objetivo de dar respuesta a la pregunta.

Carbohidratos Proteínas

(Fuente: www.biorom.uma.es) (Fuente: www.ehu.es)

15
 Cuadro comparativo entre las tres biomoléculas citadas en la pregunta

Funciones fisiológicas y
Estructura química
biológicas

Después del agua, son las

Compuestas por biomoléculas más
aminoácidos, que están abundantes en los seres
constituidas por una vivos. Forman estructuras
cadena hidrocarbonada protectoras externas como
que en uno de sus los cuernos y piel.
Proteínas
extremos presenta un Intervienen en el
radical básico movimiento mecánico tanto
nitrogenado o amino, y en nivel celular como
en el otro, un grupo orgánico y corporal.
ácido carboxilo y un Aceleran las reacciones
grupo R. químicas (catalizadores-
enzimas).
Los carbohidratos son
biomoléculas orgánicas Los carbohidratos, glúcidos
ternarias (combinación o azúcares; son importantes
de 3 bioelementos, en ya que actúan como
este caso C, H y O). Ha moléculas energéticas, es
sido clasificado en 3 decir, proporcionan energía
grupos que son los a los seres vivos. Entre las
Carbohidratos
monosacáridos, distintas funciones que
oligosacáridos y posee podemos destacar su
polisacáridos. Los función farmacológica al
primeros son los más existir algunos antibióticos
simples, se caracterizan como la estreptomicina
por ser dulces, producida por algunas
hidrosolubles y bacterias.
cristalizables.
Estas biomoléculas En cuanto a funciones,
(generalmente podemos resaltar su
Lípidos constituidas por carbono, importancia estructural, ya
hidrógeno y oxígeno) que va constituir el 40% de
van a tener consistencia las membranas celulares;
sólida o aceitosa. Los participan en los seres vivos
16
 componentes de los
lípidos serán los
alcoholes (glicerol,
esfingosina, etc.) y
ácidos grasos (saturados
e insaturados).
como fuente de energía;
algunos lípidos actúan como
hormonas, lo que los hace
también tener una función
reguladora.

2. Explique el fundamento y reacción de las pruebas de Biuret, Xantoproteícas,

Ninhidrinas y Sudán III.

A) REACCIÓN DE BIURET:

Este reactivo contiene CuSO4 en una solución alcalina de NaOH., y se basa en la formación de
un compuesto de color violeta, esto como producto de la formación de un complejo de
coordinación entre los iones Cu+2 y los pares de electrones no compartidos del nitrógeno que
forma parte de los enlaces peptídicos. La coloración se dará al agregar el sulfato de cobre más
la solución de proteína.

Hay que tener en cuenta que no siempre la respuesta es positiva, en algunos casos no se torna de
violeta, sino de otro color, como el amarillo por ejemplo; esto se debe principalmente a que la
concentración del reactivo es variable

B) REACCIÓN XANTOPROTEÍCAS:

Esta reacción se basa en la capacidad de los aminoácidos que contienen anillo aromático para
formar compuestos dinitroderivados de color amarillo por interacción de ácido nítrico
concentrado, y de esta manera poder determinar la cantidad de proteína soluble en una solución.
Dichos aminoácidos que portan de grupos aromáticos darán un resultado positivo. Pero si al
momento de realizar la prueba se neutraliza con un álcali se tornará de un color amarillo oscuro

17
C) REACCIÓN CON LA NINHIDRINA:

La ninhidrina reacciona con todos los alfa aminoácidos contenidos en la proteína que dará lugar
a la formación de un complejo de color azul-violeta, el resultado dependerá igualmente de la
concentración del reactivo, puesto que algunas veces se tornará de color rosado. La ninhidrina al
momento de reaccionar también formará una base de Schiff (compuesto intermedio de vida
media muy corta, que se forma por la reacción de un grupo amino con un grupo carbonilo).

Esta prueba resulta ser positiva tanto para las proteínas y carbohidratos. Un claro ejemplo será
cuando la prueba de Biuret resulte negativa y la ninhidrina positiva, lo cual indicará que no
existen proteínas, pero sí aminoácidos libres.

D) PRUEBA DE SUDÁN III:

Este reactivo es usado principalmente para poder identificar lípidos o grasas en una muestra,
debido que es insoluble en agua, pero sí lo es con las grasas, especialmente con los triglicéridos;
de tal manera que al momento de reaccionar tendrán una tonalidad rojo rosada.
Cabe mencionar que pertenecen a un grupo de colorantes indiferentes, es decir, no poseen
alguna afinidad por ciertas estructuras ácidas o básicas.

Básicamente, los colorantes tienen a disolverse o ser más solubles en las grasas que en la misma
solución donde se encuentran. De este modo, cuando la grasa se baña con dicho colorante, éste
se disuelve en la grasa que al final tornará esa coloración.

Por último, es importante resaltar que estos colorantes siempre están en una solución alcohólica
o en mezclas de alcohol-acetona.

18
9.- Bibliografía
Angelfire. (s.f.). Obtenido de Angelfire:
http://www.angelfire.com/scifi/anarkimia/Reconocimiento%20de%20Protenas.htm

Bekaloff, A. (1981). Biología y Fisiología celular. Barcelona: Omega.

Eldra Solomon, L. B. (1992). Biología. México: Editorial Interamericana.

Llerena, M. (s.f.). Bioquímica. Obtenido de Bioquímica: http://bioquimicamarzo-

julio.blogspot.com/2014/07/reaccion-de-biuret.html

Murray, R. (1992). Bioquímica de Harper. México: El manual Moderno.

Shw, T. (s.f.). Academia.edu. Obtenido de Academia.edu:

http://www.academia.edu/28698417/Experimento_1_reacción_con_ninhidrina

19