Guia de Laboratorio

ESCUELA POLITÉCNICA DEL EJERCITO
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS DE LA TIERRA Y DE LA CÓDIGO:

CONSTRUCCIÓN
LABORATORIO DE MEDIO AMBIENTE DECTC-01
GUÍA DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO
CARRERAS: INGENIERÍA GEOGRÁFICA Y DEL MEDIO AMBIENTE

INGENIERÍA EN BIOTECNOLOGÍA
ASIGNATURAS: CONTROL Y CONTAMINACIÓN DE AGUAS
QUIMICA AMBIENTAL (BIOTECNOLOGÍA)
PROFESOR: ING. OLIVA ATIAGA M.Sc.
ELABORADO POR: APROBADO POR:

ING. OLIVA ATIAGA COORDINADOR ÁREA DE CONOCIMIENTO
FIRMA: FIRMA:
FECHA: ABRIL DE 2017 FECHA: ABRIL DE 2017

ESCUELA POLITÉCNICA DEL EJERCITO
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS DE LA TIERRA Y DE LA CÓDIGO:
CONSTRUCCIÓN
LABORATORIO DE MEDIO AMBIENTE DECTC-01
CONTENIDO
1. PROCEDIMIENTO PARA EL MUESTREO DE AGUAS Y

DETERMINACIÓN DE OXÍGENO DISUELTO.
2. PROCEDIMIENTO ESPECÍFICO PARA LA DETERMINACIÓN DE LA

DEMANDA BIOLÓGICA DE OXÍGENO (DBO)
3. PROCEDIMIENTO ESPECÍFICO PARA LA DETERMINACIÓN DE LA

DEMANDA QUÍMICA DE OXÍGENO (DQO)
Código:
PROCEDIMIENTO ESPECÍFICO Edición: 1
Fecha:
PROCEDIMIENTO PARA EL MUESTREO DE
Av. Del Progreso S/N
AGUAS Y DETERMINACIÓN DE OXÍGENO Hoja 1 de 5
Sangolquí-Ecuador DISUELTO
PROCEDIMIENTO PARA EL MUESTREO DE AGUAS Y DETERMINACIÓN

DE OXÍGENO DISUELTO
Código:
Fecha:
“La confiabilidad del resultado de cualquier prueba
inicia con la confiabilidad en el muestreo”
1. OBJETO
El presente procedimiento tiene por objeto describir el procedimiento para el muestreo de aguas y
determinación de oxígeno disuelto.
2. APLICACIÓN
Este método se aplica para aguas limpias y residuales.
3. FUNDAMENTO DEL MÉTODO
La primera tarea en un análisis químico es el muestreo, aunque algunas veces no se tenga demasiado en
cuenta. La importancia de los procedimientos que se deben utilizar para realizar un muestreo correcto, no
se pueden subestimar, aunque se tenga un equipo instrumental muy sofisticado, sólo se analizará la
muestra que llegue al laboratorio. La muestra debe ser representativa del conjunto del agua que se
necesita analizar y debe recogerse de tal manera que la concentración de las especies que se tienen que
analizar no cambie ni durante el transporte, ni durante el almacenamiento.
Supóngase que se tiene que analizar el agua de un río, pues bien, antes de realizar el muestreo se tienen
que tomar una serie de decisiones:
 Se tiene que decidir qué analitos se tienen que analizar. Las técnicas analíticas que se vayan a utilizar
afectarán a la cantidad de muestra que se tiene que recoger, al tipo de envase que se debe utilizar
y también al método de almacenamiento.
 Se tiene que decidir el programa de muestreo, ya que la composición del agua natural está siempre
cambiando.
 Se deben conocer las variaciones en las concentraciones del oxígeno disuelto, sobre todo.
OXÍGENO DISUELTO
Es una función de la temperatura y de la presión y cumple con la ley de Henry para gases:
cs = k pO2
“ la solubilidad de un gas en un líquido es proporcional a la presión parcial del gas en contacto
con ese liquido”.
k= moles /litro atm. = 1.28x10-3 para el oxígeno
pO2 = ( 1-pvt ) % de O2 en el aire
La contración de saturación (CS ) depende de:

 temperatura
 salinidad
 presión
Código:
Fecha:
La concentración de saturación del oxígeno en agua fresca puede calcularse a través de la

siguiente ecuación:
1.575701 *105 6.642308 *107 1.243800 *1010 8.621949 *1011

ln cs =  139.34411    
T T2 T3 T4
El impacto de la baja concentración de oxígeno y de las condiciones aeróbicas se refleja en un desbalance

del ecosistema, mortalidad de peces, olores y otras circunstancias antiestéticas.
El problema del OD puede resumirse así: la descarga de residuos orgánicos e inorgánicos oxidables en un
cuerpo de agua, durante el proceso de estabilización de materia orgánica resulta en el decrecimiento de la
concentración de OD que interfiere con el uso deseable del agua.
El oxígeno disuelto puede reaccionar cuantitativamente con un exceso de hidróxido de

manganeso (II), transformándose rápidamente en hidróxido de manganeso (III):
4 Mn(OH)2 (s) + O2 + 2 H2O 4 Mn(OH)3 (s)
Al acidificar, el hidróxido de manganeso (III) producido oxida al yoduro, formándose yodo:
2 Mn(OH)3 (s) + 2 I- + 6 H+ I2 + 3 H2O + 2 Mn2+
El yodo producido, equivalente al oxígeno que había en la muestra, puede ser valorado con
tiosulfato sódico, según la reacción:
I2 + 2 S2O32- 2 I- + S4O62-
Debido a que un mol de oxígeno equivale a dos moles de yodo, se requerirán cuatro moles
de tiosulfato por cada mol de oxígeno disuelto.
4. MATERIALES Y EQUIPOS
Se enumeran a continuación los equipos y el material necesarios:
4.1. Equipos
- Medidor de pH
- Balanza analítica. Rango 0 – 110 g. Resolución 0,0001 g.
- Medidor de conductividad
- Medidor de turbidez
4.2. Material
- Botellas Winckler de 300mL
- Probeta de 50mL
- Buretas de 50mL
- Pipetas automáticas de 1mL
- Vasos de precipitación de 10mL
- Agitador
Código:
Fecha:
- Balones aforados de 100mL
- Vasos de presipitación de 250mL
- Termómetro
5. REACTIVOS
Se enumeran a continuación los reactivos necesarios para la realización de este procedimiento.

Solución Sulfato Manganeso : Disolver 364 g MnSO 4 .H 2 O en agua destilada, filtrar y diluir a
1L.
Solución de Alcali-Yoduro-Acido: Para muestra saturada o menos que la muestra saturada, disolver
500 g hidróxido de sodio (NaOH) y 150 g KI en agua destilada y dilui r a 1 L. Añadir 10 g de Azida de
Sodio (NaN3) disueltos en 40 mL de agua destilada. Precaución: el NaOH concentrado es muy corrosivo para
la piel. Usar guantes y lavar inmediatamente las zonas afectadas.
Acido sulfúrico, H2SO4, concentrado.
Solución de almidón: Disolver 2 g almidón soluble (grado de laboratorio) y 0.2 g ácido salicílico como un
conservante, en 100 mL de agua destilada caliente.
Titulante estándar de Tiosulfato de Sodio: disolver 6.205 g de Na 2S 2O 3.5H 20 en agua destilada.
Añadir 0.4 g de NaOH y diluir a 1 litro.
6. PROCEDIMIENTO
6.1 Toma y preservación de muestras

Se procederá de acuerdo a lo establecido en los Métodos Estándares para Análisis de Agua y Agua Residual
6.2 Determinación de Oxígeno disuelto

- A la muestra recogida en una botella de 300 mL, añadir por debajo de la superficie 1 mL
de sulfato manganoso (MnSO 4) con una pipeta, y 1 mL del reactivo de álcali-yoduro-ácido,
agitar vigorosamente después de cada adición y eliminar el sobrante.
- Cuando el precipitado se ha asentado suficientemente (1/3 botella), destapamos el frasco y
agregamos 1 mL de Acido sulfúrico concentrado. Tapamos y agitamos hasta que el precipitado se
disuelva.
- Titule un volumen correspondiente a 200 mL de, la muestra original. Titule con la solución 0,025M de
Na2S2O3 a un color amarillo pálido
- Añadir unas gotas de solución de almidón y continuar la titulación hasta la primera desaparición
del color azul.
7. CÁLCULOS Y EXPRESIÓN DE LOS RESULTADOS
1 mL de Na2S2O3 = 1 mg/L de oxígeno disuelto
8. ANÁLISIS DE LOS RESULTADOS

Analizar y comentar los resultados obtenidos, comparando con los límites permisibles del TULAS según
corresponda.
Código:
Fecha:
9. REFERENCIAS
9.1 Standard Methods for the examination of water and wastewater. Publication office American
Public Health Association. 1998
9.2 Texto Unificado Legislación Secundaria, norma de calidad ambiental y de descarga de

efluentes: recurso agua. de efluentes: recurso agua. Publicada por el Decreto ejecutivo No 3516.
10. CUESTIONARIO
- Demostrar que para el procedimiento de Determinación de OD indicado:

- 1 mL de Na2S2O3 = 1 mg/L de oxígeno disuelto
- La solubilidad del oxígeno en agua sigue la ley de Henry. Formule y explique dicha ley,
teniendo en cuenta la importancia de la temperatura.
- Describa el fundamento de un método instrumental para determinar el oxígeno disuelto y
compare sus ventajas e inconvenientes con el método de Winkler.
- Complete la siguiente tabla 1, de Procedimientos oficiales aplicables en Ecuador, para recolección y
preservación de muestras instantáneas de agua según lo establecido pr las Normas Ecuatorianas
(Normas INEN), la EPA (Environmental Protection Agency), así como los SM (Métodos Estándares para
Análisis de Agua y Agua Residual). Presente sus resultados en forma de tabla comparativa (los
parámetros se indicarán en la práctica)
Parámetro Nombre y número del procedimiento

INEN EPA SM
Sulfatos
(turbidimétrico)
- Complemente la siguiente tabla comparativa de los procedimientos para recolección y preservación de

muestras instantáneas de agua (los parámetros se indicarán en la práctica)
Parámetro Tipo de Método de Tiempo máximo Observaciones

recipiente preservación de preservación generales al
procedimiento de
muestreo
INEN EPA SM INEN E PA SM INEN EPA SM
Color
- En un muestreo es importante que la muestra sea “representativa”, explicar el significado de este

término.
- Indique porque es importante conocer la variación de nitrógeno en una muestra de agua de río.
- De manera general que precauciones se tienen que tomar en cuenta en el muestreo para el análisis de
compuestos orgánicos
Código:
Fecha:
PROCEDIMIENTO PARA LA DETERMINACIÓN DE
Av. Del Progreso S/N LA DEMANDA BIOLÓGICA DE OXÍGENO (DBO) Hoja 1 de 8
Sangolquí-Ecuador
PROCEDIMIENTO PARA LA DETERMINACIÓN DE LA DEMANDA

BIOLÓGICA DE OXÍGENO (DBO)
Código:
Fecha:
Sangolquí-Ecuador
1. OBJETO
El presente tiene por objeto describir el procedimiento para la determinación de la Demanda
Biológica de Oxígeno (DBO)
2. APLICACIÓN
Este método se aplica para aguas limpias y residuales.
La materia orgánica constituye aproximadamente 75% de los sólidos en suspensión y el 40% de

los sólidos disueltos en un efluente líquido de composición media. En la tabla 1 se indica la
composición aproximada de las aguas residuales.
Tabla 1.Distribución de las impurezas en las aguas residuales domésticas

Solutos 50% O 20%
M 30%
Coloides 10% O 8%
M 2%
Insolubles no 20% O 15%
sedimentables M 5%
Insolubles sedimentables 20% O 15%
M 5%
O: orgánico
M: mineral
Los principales grupos de sustancias orgánicas presentes en el agua residual son las proteínas
(40-60%), hidratos de carbono (25-50%) y grasas y aceites (10%).
Otro compuesto orgánico con importante presencia en el agua residual es la urea. No obstante,
debido a la velocidad del proceso de descomposición de la urea, raramente está presente en
aguas residuales que no sean muy reciente, junto con estas sustancias el agua residual puede
contener pequeñas cantidades de gran número de moléculas orgánicas sintéticas como agentes
tensoactivos, contaminantes orgánicos prioritarios, compuestos orgánicos volátiles y los
pesticidas de uso agrícola.
Por otro lado, dado el incremento en la síntesis de moléculas orgánicas, el número de ellas
presentes en las aguas residuales va en aumento cada año.
Los métodos de medición del contenido de orgánicos más utilizados en la actualidad son:
 Demanda Biológica de Oxígeno (DBO)

 Demanda Química de Oxígeno (DQO)
 Carbono Orgánico Total (COT).
Demanda biológica de oxígeno (DBO):
La DBO mide la cantidad de oxígeno necesaria para que los microorganismos aerobios presentes
en un agua oxiden la materia orgánica biodegradable. Se mide en mg O2/L.
Código:
Fecha:
Sangolquí-Ecuador
Para determinar la DBO se incuba una muestra a una dilución apropiada de la misma, durante
un tiempo dado y una temperatura determinada. Esta muestra se inocula previamente con un
cultivo microbiano, aunque este paso se puede obviar si existen evidencias de que el residual
trae consigo microorganismos.
Por ejemplo en el caso de que un compuesto como la glucosa requiere de 6 moléculas de

oxígeno para su conversión completa a CO2 y agua.
C6H12O6 + 6O2  6CO2 + 6H2 O
DBO = gramos de oxígeno utilizado / gramos de carbón oxidado = 192 / 72 = 2.67g/g
La DBO real es menor a la teórica debido a la incorporación de algo de carbón en las nuevas
células bacteriales.
Cuando la descomposición de los nutrientes de una muestra es tan completa como se pueda
obtener aeróbicamente, el oxígeno disuelto así consumido es la DBO total o última.
Sin embargo, alguna materia orgánica puede quedar, la que no es afectada por procesos
aeróbicos, pero que se descomponen anaeróbicamente como la celulosa.
La DBO de un agua residual en donde estén de por sí los microorganismos presentes en la

muestra no requiere que se le siembre microorganismos y su cálculo se puede hacer a través
de :
D1  D2
DBO 
P
D1 = oxígeno disuelto inicial de la muestra de agua residual, mg/l
D2 = oxígeno disuelto de la muestra de agua residual después de 5 días a 20 0C, mg/l
P = fracción residual decimal de la muestra de agua residual usada.
Volumen de la muestra de agua residual (ml)

P
volumen del frasco para DBO(ml)
Si la prueba se realiza inoculando un cultivo microbiano:
( D1  D2)  ( B1  B2) f
DBO 
P
D1 = oxígeno disuelto de la muestra diluída inmediatamente después de la preparación
en mg/l.
D2 = oxígeno disuelto después de 5 días de incubación, mg/l
P= fracción decimal volumétrica de la muestra usada.
B1 = oxígeno disuelto en el inóculo control antes de la incubación mg/l
B2 = oxígeno disuelto en el inóculo control después de la incubación, mg/l
f= proporción de inóculo en la muestra a inóculo en las botellas control o blanco.
%inóc. en D1
f 
%inoc. en B1
Código:
Fecha:
Sangolquí-Ecuador
Si las muestras en las cuales se va ha determinar el DBO están lejos del laboratorio el oxígeno
necesita ser fijado en ellas en el mismo sitio de determinación (se añade 1ml de MnSO 4 y 1ml
de KI).
La cantidad de sustancias nutrientes descompuestas en la prueba, y por tanto, la cantidad de

oxígeno disuelto consumido, depende de la temperatura y duración de la incubación. La
descomposición de una muestra residual fácilmente biodegradable podría durar varias semanas,
de manera que, para propósitos prácticos se usa un período normal de incubación más corto,
en el que tenga lugar una proporción razonablemente alta de la descomposición total posible.
Estas condiciones generalmente son: 5 días a 20C, y se suponen dichas condiciones si no se

especifican otras. No obstante, no existe razón alguna para que no se puedan usar otros
períodos y otras temperaturas, siempre que se especifiquen claramente junto con los resultados.
El proceso de descomposición se realiza en dos etapas: en la primera, se produce la

descomposición de los compuestos carbonáceos, cuya descomposición finaliza después de tres
semanas a 20C.
En la segunda fase, son los nutrientes nitrogenados los que se oxidan primero; comienza
después de 10 - 12 días cuando el nitrógeno amoniacal se transforma en nitritos y nitratos,
aumentando el gasto de oxígeno.
Las sustancias orgánicas que contienen nitrógeno en las aguas residuales se encuentran
primordialmente en estado insoluble y se remueven por sedimentos en forma de sedimentos
primarios y secundarios. Debido a lo señalado para medir la contaminación orgánica de las
aguas residuales en estado coloidal y en disolución como de las sustancias no sedimentables e
insolubles, se utiliza la DBO correspondiente a la primera fase.
La DBO de las aguas residuales domésticas se rigen por determinadas reglas y procesos a 20ºC;
cada día se consume 20,6% de la DBO residual (no consumida)
En el primer día se consumirá el 20,6% del valor total de la DBO 20 (la oxidación bioquímica de
las aguas residuales domésticas se desarrolla en 20 días), en el segundo día se consumirá
20,6% del valor residual , esto es:
100% - 20,6% = 79,4% o 0,206 x 79,4 = 16,3%

para los 5 días 68,4% y para los 20 días el 99%.
DBO20 = 1.462 DBO5 o DBO5 = 0.684 DBO20
Con fines prácticos se sugiere:

DBO total = 1.5 DBO5
CINETICA DE LA DBO:
Si se asume una reacción cinética de primer orden
L
dL t

L Lo
  k1 dt 
o
L = material carbonáceo oxidable remanente en el tiempo t.

–1
k = constante de la tasa de oxidación, día
La solución de la ecuación es:
Código:
Fecha:
Sangolquí-Ecuador
dl L t
L Lo
  K1dt 
o
l
ln  k1 t
lo
L = Lo e-k1t o
L = Lo 10-kt
Lo = cantidad inicial de material carbonáceo.

k = 2,303 K
El oxígeno consumido en la estabilización del material orgánico es:
Y = Lo – L = DBO
Y = Lo – Loe-kt = Lo ( 1- e-k t )
Y5 = CDBO5 = Lo ( 1- e-5k )
Lo = DBO último
Los compuestos simples tales como azúcares y almidones son utilizados fácilmente por los
microorganismos y tienen una taza k alta, mientras que los compuestos tales como los fenoles
son difíciles de asimilar y tienen valores k bajos.
4. MATERIALES Y EQUIPOS
4.1. Equipos
- Incubadora
- Estufa
4.2. Material
- Botellas Winckler de 300mL
- Probeta de 50mL
- Buretas de 50mL
- Pipetas automáticas de 1mL
- Agitador
- Balones aforados de 100mL
- Vasos de presipitación de 250mL

Código:
Fecha:
Sangolquí-Ecuador
- Termómetro
5. REACTIVOS
Se enumeran a continuación los reactivos necesarios para la realización de este procedimiento:

Solución Buffer de Fosfato: Disolver 42.5 g de KH 2 PO 4 o 54.3 g de KH 2 PO 4 en
agua destilada. Ajustar el pH a 7.2 con NaOH al 30% y diluir a 1 L
Solución Cloruro de Calcio: Disolver 27.5 g de CaCl 2 en agua destilada y diluir a 1 L.
Solución Sulfato de Magnesio: Disolver 22.5 g de MgSO 4.7H2O en agua
destilada y aforar a 1 L.
Solución Cloruro Férrico: Disolver 0.25 g de FeC1 3.6H20 en agua destilada y aforar a 1 L.
S o l uc ió n S ulf a t o M an g a n e so: Di sol ve r 364 g M nSO 4 . H 2 O e n ag ua de stila da,
filtrar y diluir a 1 L.
Solución de Alcali-Yoduro-Acido: Para muestra saturada o menos que la muestra
saturada, disolver 500 g hidróxido de sodio (NaOH) y 150 g KI en agua destilada y diluir
a 1 L. Añadir 10 g de Azida de Sodio (NaN3) disueltos en 40 mL de agua destilada. Precaución:
el NaOH concentrado es muy corrosivo para la piel. Usar guantes y lavar inmediatamente las
zonas afectadas.
Acido sulfúrico, H2SO4, concentrado.
Solución de almidón: Disolver 2 g almidón soluble (grado de laboratorio) y 0.2 g ácido
salicílico como un conservante, en 100 mL de agua destilada caliente.
Titulante estándar de Tiosulfato de Sodio: disolver 6.205 g de Na 2 S2O 3 .5H20 en agua
destilada. Añadir 0.4 g de NaOH y diluir a 1 litro.
6. PROCEDIMIENTO
6.1 Preparación de preparación del agua de dilución:
- Medir un volumen determinado de agua destilada y oxigenarle durante 24 horas.
- Añadir en el agua destilada los nutrientes (solución de cloruro de calcio, solución de sulfato
de magnesio, solución de cloruro férrico) y la solución buffer de fosfato. Por cada L de agua
destilada se añade 1mL de cada nutriente y 1 mL de la solución buffer.
6.2 Dilución de las muestras:
- De acuerdo a la concentración de las soluciones diluídas a preparar, se toma una alícuota

de muestra necesario y se coloca en la botella Winkler (Tabla 2. volúmenes de alícuota
recomendados).
- Se llena totalmente la botella Winkler mencionada con el agua de dilución y se agita para
homogenizar.
-Se preparan al menos tres soluciones diluídas por muestra a analizar.

Código:
Fecha:
Sangolquí-Ecuador
Tabla 2. Alícuotas de muestra para determinación de DBO
Alícuota de Intervalo de
muestra para valores de DBO5
botella de 300mL esperados
(mL) (mg/L)
0.05 12000-
42000
0.1 6000-21000
0.2 3000-
10500
0.5 1200-4200
1 600-2100
2 300-1050
5 120-420
10 60-210
20 30-105
6.3 Incubación de la muestra:
- Las soluciones diluidas preparadas se colocan en la incubadora a 20°C ±1°C, durante 5

días.
- Se prepara un blanco (agua de dilución) en una botella Winkler y se incuba con las
soluciones diluidas de la muestra a 20°C ±1°C, durante 5 días.
- Se procede a determinar el oxígeno disuelto de las soluciones incubadas y del blanco.
6.2 Determinación de Oxígeno disuelto

- A la muestra añadir por
debajo de la superficie 1 mL de sulfato manganoso (MnSO 4 ) con una pipeta, y 1 mL
del reactivo de álcali-yoduro-ácido, agitar vigorosamente después de cada adición y
eliminar el sobrante.
- Cuando el precipitado se ha asentado suficientemente (1/3 botella), d estapamos el

frasco y agregamos 1 mL de Acido sulfúrico concentrado. Tapamos y agitamos hasta
que el precipitado se disuelva.
- Titule un volumen correspondiente a 200 mL de, la muestra original. Titule con la solución
0,025M de Na2S2O3 a un color amarillo pálido.
- Añadir unas gotas de solución de almidón y continuar la titulación hasta la primera

desaparición del color azul.
Código:
Fecha:
Sangolquí-Ecuador
7.1 Cálculo del Oxígeno Disuelto
1 mL de Na2S2O3 = 1 mg/L de oxígeno disuelto

7.2 Cálculo de la DBO
ODblanco = Oxígeno disuelto del blanco a los 5 días de incubación.
ODmuestra = Oxígeno disuelto de la muestra a los 5 días de incubación
f = factor de dilución
Analizar y comentar los resultados obtenidos, comparando con los límites permisibles del TULAS
según corresponda.
9. REFERENCIAS
9.1 Standard Methods for the examination of water and wastewater. Publication office
American Public Health Association. 1998

efluentes: recurso agua. de efluentes: recurso agua. Publicada por el Decreto ejecutivo No 3516
10. CUESTIONARIO
- ¿Qué importancia tiene realizar un blanco en la determinación de la DBO5?

- Mencionar diferentes industrias en las que por sus desechos de agua residual sea necesario
determinar DBO5
- Buscar la reglamentación existente relacionada a las descargas de aguas residuales con
respecto a los valores de DBO5 y comparar los resultados obtenidos en esta norma.
- Realizar un diagrama de bloques para determinar la Demanda Bioquímica de Oxígeno
Código:
Fecha:
PROCEDIMIENTO ESPECÍFICO PARA LA
DETERMINACIÓN DE LA DEMANDA QUIMICA DE Hoja 1 de 4
Sangolquí-Ecuador OXÍGENO (DQO)
PROCEDIMIENTO PARA LA DETERMINACIÓN DE LA DEMANDA

QUÍMICA DE OXÍGENO (DQO)
Código:
Fecha:
1. OBJETO
El presente tiene por objeto describir el procedimiento para la determinación de la Demanda Química
de Oxígeno (DQO) mediante método espectrofotométrico.
2. APLICACIÓN
Este método se aplica para aguas residuales que tengan DQO superiores a 10mg/L y
menores de 500mg/L.
La DQO mide la cantidad de oxígeno equivalente a los agentes químicos, dicromato o

permanganato de potasio, necesarios para la oxidación de la materia orgánica de un agua, bio y no
biodegradable. Se mide en mg O2/L .
Las reacciones podemos representarlas así:
C + O 2  CO2
2 H + O 2  2H2O
X + n O 2  X(O2)n formas inorgánicas hasta su
máxima oxidación
De esta forma el concepto de DQO incluye no solo la oxidabilidad de la materia orgánica

presente en el agua residual sino en todas las formas oxidables, por lo cual no se puede
considerar esta técnica como un estimador exacto de materia orgánica. No obstante el
ensayo trata de minimizar la oxidación de la materia orgánica.
Por otra parte teniendo en cuenta que en la mayoría de los residuales procedentes de las
industrias procesadores de las sustancias biológicas (industrias bioquímicas, procesos
fermentativos, industria alimentaria) el componente orgánico es muy superior a la
fracción inorgánica, se puede considerar que la DQO es un estimador relativamente bueno
del contenido de materia orgánica. Algo similar ocurre con los efluentes domésticos y los
residuos agropecuarios.
INTERFERENCIAS.- compuestos alifáticos de cadena recta, hidrocarburos aromáticos y la

piridina no son oxidantes en forma apreciable aunque con K2Cr2O7 se logra una oxidación
más completa que el método del permanganato.
Los compuestos de cadena recta son más fácilmente oxidados cuando se añade sulfato de
plata. No hay ventaja alguna en el empleo de catalizadores frente a los hidrocarburos
Código:
Fecha:
aromáticos, pero es esencial (el catalizador) en la oxidación de los alcoholes y ácidos de

cadena recta .
DQO puede deberse a la oxidación de compuestos como

NH4+ + 2O2  2H+ + NO3- + H2O
o por oxidación química de algún agente reductor.

4Fe2+ + O2 + 4H +  4Fe3+ + 2H 2º
2SO32- + O 2  2SO42-
De manera general la oxidación de la materia orgánica se puede representar de la

siguiente manera:
Materia orgánica ( CaHbOc) + Cr2O72- + H+  Cr3+ + CO2 + H 2 O
4. MATERIALES Y EQUIPO
4.1. Equipos
- Digestor
- Estufa
- Espectrofotómetro
- Vórtex
4.2. Material
- Pipeta volumétrica de 5 y 10 mL
- Probetas de 10 mL
- Peras automáticas
- Pipetas automáticas de 10-1000µL
- Viales
- Balones aforados de 100mL y 1L
- Picetas
Código:
Fecha:
5. REACTIVOS
Se enumeran a continuación los reactivos necesarios para la realización de este procedimiento.
Reactivo de Ácido Sulfúrico: Añadir 5,06 g de Ag 2 SO 4 grado reactivo en cristales

a 500 mL de H 2 SO4 concentrado. Dejar reposar y agitar por 1 o 2 días en un agitador
magnético.
Solución digestora, Rango Alto: Añadir 2.554 g de K2Cr2O7 de grado estándar p r i m a r i o ,
que previamente fue secado a 150° C po r dos horas, posteriormente
agregar 41.75 mL de H 2 SO 4 concentrado, y 8.325 g de H 2 SO 4 . Disolver en un balón
de 250 mL y aforar con agua destilada.
Estándar de bifttalato de Potasio (KHP), HOOCC6H4COOK: Secar a 110° C el KHP.
Disolver 0.2125 g en agua destilada y aforar a 500 mL, para obtener una solución con una
DQO teórica de 500mg/L. Esta solución es estable hasta por tres meses si se mantiene en
refrigeración y en ausencia de crecimiento biológico visible.
6. PROCEDIMIENTO
6.1 PREPARACIÓN DE DISOLUCIONES
Para la elaboración de la curva de calibración se preparan disoluciones entre 10 y 500mg/L de KHP

a partir del estándar de 500mg/L.
6.2 DIGESTIÓN Y VALORACIÓN COLORIMÉTRICA
- Colocar en un vial vacio 1.5 mL de la solución digestora, seguido de 3.5 mL del reactivo de
sulfato de plata en Acido Sulfúrico.
- Mezclar la solución sin topar con los dedos la base del vial, ya que es una reacción exotérmica.
- Añadir 2.5 mL del estándar, blanco (agua destilada) o de la muestra que se quiera analizar y
tapar.
- Sujetar el vial por la tapa y agitar en el Vórtex.
- Colocar el vial en el Digestor, a una temperatura de 150° C por dos horas.
- Dejar enfriar y leer en el espectrofot6metro directamente el valor de
absorbancia a una longitud de onda de 600 nm.
7.1 Elaborar un gráfico: Absorbancia- Concentración, con los datos obtenidos para las
soluciones de biftalato de potasio.
7.2 Por interpolación con los valores medidos de absorbancia determinar la concentración de las
muestras analizadas.
Analizar y comentar los resultados obtenidos, comparando con los límites permisibles del TULAS
según corresponda.
Código:
Fecha:
9. REFERENCIAS
9.1 Standard Methods for the examination of water and wastewater. Publication office
American Public Health Association. 1998

efluentes: recurso agua. de efluentes: recurso agua. Publicada por el Decreto ejecutivo No 3516.
10. CUESTIONARIO
- Indicar el fundamento de la determinación de DQO

- Buscar la reglamentación existente relacionada a las descargas de aguas residuales con
respecto a los valores de DQO y comparar los resultados obtenidos en esta norma.
- Realiza un diagrama de bloques para determinar la Demanda Química de Oxígeno

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ESCUELA POLITÉCNICA DEL EJERCITO

DEPARTAMENTO DE CIENCIAS DE LA TIERRA Y DE LA CÓDIGO:

GUÍA DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO

GUÍA DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO

CARRERAS: INGENIERÍA GEOGRÁFICA Y DEL MEDIO AMBIENTE

PROFESOR: ING. OLIVA ATIAGA M.Sc.

ELABORADO POR: APROBADO POR:

FECHA: ABRIL DE 2017 FECHA: ABRIL DE 2017

GUÍA DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO

1. PROCEDIMIENTO PARA EL MUESTREO DE AGUAS Y

2. PROCEDIMIENTO ESPECÍFICO PARA LA DETERMINACIÓN DE LA

3. PROCEDIMIENTO ESPECÍFICO PARA LA DETERMINACIÓN DE LA

PROCEDIMIENTO PARA EL MUESTREO DE AGUAS Y DETERMINACIÓN

Este método se aplica para aguas limpias y residuales.

3. FUNDAMENTO DEL MÉTODO

La contración de saturación (CS ) depende de:

La concentración de saturación del oxígeno en agua fresca puede calcularse a través de la

1.575701 *105 6.642308 *107 1.243800 *1010 8.621949 *1011

El impacto de la baja concentración de oxígeno y de las condiciones aeróbicas se refleja en un desbalance

El oxígeno disuelto puede reaccionar cuantitativamente con un exceso de hidróxido de

4 Mn(OH)2 (s) + O2 + 2 H2O 4 Mn(OH)3 (s)

Al acidificar, el hidróxido de manganeso (III) producido oxida al yoduro, formándose yodo:

2 Mn(OH)3 (s) + 2 I- + 6 H+ I2 + 3 H2O + 2 Mn2+

Se enumeran a continuación los equipos y el material necesarios:

- Balanza analítica. Rango 0 – 110 g. Resolución 0,0001 g.

- Pipetas automáticas de 1mL

- Vasos de precipitación de 10mL

- Balones aforados de 100mL

- Vasos de presipitación de 250mL

- Vasos de precipitación de 500mL

Se enumeran a continuación los reactivos necesarios para la realización de este procedimiento.

6.1 Toma y preservación de muestras

6.2 Determinación de Oxígeno disuelto

1 mL de Na2S2O3 = 1 mg/L de oxígeno disuelto

8. ANÁLISIS DE LOS RESULTADOS

9.2 Texto Unificado Legislación Secundaria, norma de calidad ambiental y de descarga de

- Demostrar que para el procedimiento de Determinación de OD indicado:

Parámetro Nombre y número del procedimiento

- Complemente la siguiente tabla comparativa de los procedimientos para recolección y preservación de

Parámetro Tipo de Método de Tiempo máximo Observaciones

INEN EPA SM INEN E PA SM INEN EPA SM

- En un muestreo es importante que la muestra sea “representativa”, explicar el significado de este

PROCEDIMIENTO PARA LA DETERMINACIÓN DE LA DEMANDA

Biológica de Oxígeno (DBO)

Este método se aplica para aguas limpias y residuales.

3. FUNDAMENTO DEL MÉTODO

La materia orgánica constituye aproximadamente 75% de los sólidos en suspensión y el 40% de

Tabla 1.Distribución de las impurezas en las aguas residuales domésticas

 Demanda Biológica de Oxígeno (DBO)

Demanda biológica de oxígeno (DBO):

Por ejemplo en el caso de que un compuesto como la glucosa requiere de 6 moléculas de

C6H12O6 + 6O2  6CO2 + 6H2 O

DBO = gramos de oxígeno utilizado / gramos de carbón oxidado = 192 / 72 = 2.67g/g

La DBO de un agua residual en donde estén de por sí los microorganismos presentes en la

Volumen de la muestra de agua residual (ml)

Si la prueba se realiza inoculando un cultivo microbiano:

La cantidad de sustancias nutrientes descompuestas en la prueba, y por tanto, la cantidad de

Estas condiciones generalmente son: 5 días a 20C, y se suponen dichas condiciones si no se

El proceso de descomposición se realiza en dos etapas: en la primera, se produce la

100% - 20,6% = 79,4% o 0,206 x 79,4 = 16,3%

Con fines prácticos se sugiere:

Si se asume una reacción cinética de primer orden

L = material carbonáceo oxidable remanente en el tiempo t.

Lo = cantidad inicial de material carbonáceo.

1.575701 105 6.642308 107 1.243800 1010 8.621949 1011