UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE

SAN MARCOS
(Universidad del Perú, Decana de América)

FACULTAD DE QUIMICA E INGENIERÍA QUÍMICA

E. P. INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL

LABORATORIO DE ANÁLISIS QUÍMICO INSTRUMENTAL

TEMA:
ESPECTROSCOPIA REGIÓN VISIBLE:
OBTENCIÓN DE UN ESPECTRO DE
ABSORCIÓN

Profesor:
Integrantes:
● Ayala Osorio, María José Alexandra
● Calero Barreto, Yoselin Marisol
● Rojas Romaní, Diana Cristina

LIMA-PERÚ

2019-I

I. INTRODUCCIÓN
El estudio a nivel bioquímico de cualquier biomolécula requiere la utilización de técnicas
analit́ icas que permitan su determinación cualitativa y cuantitativa, así como su caracterización
fiś ico-química y biológica. Uno de los métodos más sencillos, accesibles, útiles y utilizados es
la espectroscopiá , en general, y la espectroscopiá ultravioleta-visible, en particular. Se pueden
identificar y cuantificar biomoléculas en solución y en muestras biológicas, con el empleo de
reactivos específicos que reaccionan con el compuesto a analizar y forman un producto
coloreado que permite detectarlo en muestras complejas.

La espectroscopia es el estudio de la reacción de los materiales a la energía irradiada. La luz es

una energía irradiada. El espectrofotómetro instrumento que tiene la capacidad de proyectar un
haz de luz monocromática (de un largo de onda particular) a través de una muestra y medir la
cantidad de luz que es absorbida por dicha muestra.

Las aplicaciones de este método en las ciencias lo podemos encontrar en la determinación de

grupos funcionales en moléculas orgánicas, análisis de muestras bioquímicas, determinación
de metales en compuestos de coordinación, análisis de semiconductores, medidas de color,
determinación cuantitativa y seguimiento de la cinética de procesos químicos y bioquímicos
de muestras vegetales

El objetivo del presente trabajo fue aprender el dominio y manejo del instrumento denominado
espectrofotómetro así como también encontrar la curva espectral y la curva de calibración de
soluciones de cloruro de cobalto, se aplicará la ley de Lambert-Beer y tras hacer una recta de
calibrado para dos sustancias, se calculará gráficamente el valor de los correspondientes
coeficientes de extinción molar. Además adquirir los conocimientos básicos sobre
espectrofotometría de absorción visible, incluyendo la Ley de Lambert-Beer y sus aplicaciones.

II. PRINCIPIOS TEÓRICOS

2.1. ESPECTROSCOPÍA ULTRAVIOLETA VISIBLE

La espectroscopía UV-Vis está basada en el proceso de absorción de la

radiación ultravioleta-visible (radiación con longitud de onda
comprendida entre los 160 y 780 nm) por una molécula. La absorción de
esta radiación causa la promoción de un electrón a un estado excitado.
Los electrones que se excitan al absorber radiación de esta frecuencia son
los electrones de enlace de las moléculas, por lo que los picos de
absorción se pueden correlacionar con los distintos tipos de enlace
presentes en el compuesto. Debido a ello, la espectroscopía UV-Vis se
utiliza para la identificación de los grupos funcionales presentes en una
molécula. Las bandas que aparecen en un espectro UV-Vis son anchas
debido a la superposición de transiciones vibracionales y electrónicas.

2.2 TRANSMITANCIA Y ABSORBANCIA

Cuando un rayo de luz de una determinada longitud de onda de intensidad Io incide

perpendicularmente sobre una disolución de un compuesto químico que absorbe luz o
cromóforo, el compuesto absorberá una parte de la radiación incidente (Ia) y dejará pasar el
resto (It), de forma que se cumple:
Io = Ia + It
La transmitancia (T) de una sustancia en solución es la relación entre la cantidad de luz
transmitida que llega al detector una vez que ha atravesado la muestra, It, y la cantidad de luz
que incidió sobre ella, Io, y se representa normalmente en tanto por ciento: % T = It/Io x 100
La transmitancia nos da una medida física de la relación de intensidad incidente y transmitida
al pasar por la muestra. La relación entre %T y la concentración no es lineal, pero asume una
relación logarítmica inversa.
La absorbancia (A) es un concepto más relacionado con la muestra puesto que nos indica la
cantidad de luz absorbida por la misma, y se define como el logaritmo de 1/T, en consecuencia:
A = log 1/T = -log T = -log It/ Io
Cuando la intensidad incidente y transmitida son iguales (Io = It), la transmitancia es del 100%
e indica que la muestra no absorbe a una determinada longitud de onda, y entonces A vale log
1 = 0.
La cantidad de luz absorbida dependerá de la distancia que atraviesa la luz a través de la
solución del cromóforo y de la concentración de éste.

2.3 LEY DE LAMBERT-BEER

Esta ley expresa la relación entre absorbancia de luz monocromática (de longitud de onda fija)
y concentración de un cromóforo en solución:
A = log I/Io = ε·c·l
La absorbancia de una solución es directamente proporcional a su concentración –a mayor
número de moléculas mayor interacción de la luz con ellas-; también depende de la distancia
que recorre la luz por la solución –a igual concentración, cuanto mayor distancia recorre la luz
por la muestra más moléculas se encontrará-; y por último, depende de ε, una constante de
proporcionalidad -denominada coeficiente de extinción- que es específica de cada cromóforo.
Como A es adimensional, las dimensiones de ε dependen de las de c y l. La segunda magnitud
(l) se expresa siempre en cm mientras que la primera (c) se hace, siempre que sea posible, en
M, con lo que las dimensiones de ε resultan ser M-1·cm-1. Este coeficiente así expresado, en
términos de unidades de concentración molar (o un submúltiplo apropiado), se denomina
coeficiente de extinción molar (εM). Cuando, por desconocerse el peso molecular del soluto,
la concentración de la disolución se expresa en otras unidades distintas de M, por ejemplo g·L-
1, las dimensiones de ε resultan ser distintas, por ejemplo g-1·L·cm-1, y al coeficiente así
expresado se denomina coeficiente de extinción específico (εs).
La ley de Lambert-Beer se cumple para soluciones diluidas; para valores de c altos, ε varía
con la concentración, debido a fenómenos de dispersión de la luz, agregación de moléculas,
cambios del medio, etc.

2.4 INSTRUMENTACIÓN PARA LA MEDICIÓN DE ABSORCIÓN DE LUZ VISIBLE Y

ULTRAVIOLETA: ESPECTROFOTÓMETRO UV-VISIBLE

La medición de absorbancia de la luz por las moléculas se realiza en unos aparatos llamados
espectrofotómetros. Aunque pueden variar en diseño, en especial con la incorporación de
ordenadores para el análisis de datos, todos los espectrofotómetros constan, según se indica en
la figura, de:
1. Una fuente de energía radiante: lámpara de deuterio y tungsteno.
2. Un monocromador para la selección de radiaciones de una determinada longitud de onda:
filtros, prismas, redes de difracción.
3. Un compartimento donde se aloja un recipiente transparente (cubetas o tubos) que contenga
la muestra Pueden ser de vidrio, cuarzo o plástico transparente. Para medir en UV se deben
usar las de cuarzo o sílice fundido, porque el vidrio no transmite la radiación UV.
4. Un detector de luz y un amplificador convertidor de las señales luminosas en señales
eléctricas.
5. Un registrador o sistema de lectura de datos.

III. MATERIALES Y EQUIPOS

3.1 Materiales
● Espectrofotómetro
● 4 fiolas de 25 ml
● Frasco lavador con agua destilada.
 ● Cubetas de plástico para medir en el espectrofotómetro.

3.2 Reactivos
● Cloruro de cobalto
● HCl
● Agua destilada

IV. DETALLES EXPERIMENTALES

4.1. CALIBRACIÓN DEL ESPECTROFOTÓMETRO

El instrumento utilizado en esta práctica es el espectrofotómetro SHIMADAZU el cual es

encendido siguiendo las indicaciones del profesor.
Para la calibración de este espectrofotómetro se usó el CoCl2.6H2O y la solución de HCl al 1%
como blanco. Con la solución de CoCl2 en HCl al 1% se hacen medidas de la transmitancia
entre el rango de 450nm a 550 nm, hallando de esta manera el λ máximo, el cual al coincidir
con el valor indicado con el catálogo indicaría que la calibración es correcta.

4.2. ESPECTRO DE ABSORCION DE LA MUESTRA

A partir de la muestra estándares preparadas en fiola de 25 ml. Se lee en espectrofotómetro

utilizando una celda para la muestra y otra celda con el blanco (agua destilada). Se miden las
transmitancias en el rango de 450 a 550nm. Determinar la absortividad molar (cn.M-1).

IV. CÁLCULOS

4.1 CALIBRACIÓN DEL ESPECTROFOTÓMETRO

Luego de la calibración del espectrofotómetro con solución de CoCl en HCl a 1% y de medir
2

los valores de transmitancia en el rango de 450 hasta 550 nm,.Se obtuvo el gráfico “A vs.λ ”
obteniendo así el λ max igual a 510 nm .

4.2 CÁLCULO DE LAS CONCENTRACIONES

Sol. Madre CC=0.0059 mol/0.05L=0.118 mol/L

ST1:0.118xfd= 0.118x0.1=0.0118 mol/L
ST2:0.118xfd= 0.118x0.2=0.0236 mol/L
ST3:0.118xfd= 0.118x0.4=0.0472 mol/L
ST4:0.118xfd= 0.118x0.6=0.0708 mol/L

4.3 CÁLCULO PARA LA CONCENTRACIÓN DE LA MUESTRA “D”

Con los datos de concentración y absorbancia se grafica la curva de calibración (ver gráfica
N 2) y aplicamos el ajuste por mínimos cuadrados.
0

A = mC(CoCl2) + b → Y = mX + b
Donde obtenemos que:
m= 4.94
b= 7.52
A = 4.94 C(CoCl2)+ 7.52
Cuando: A= 0.141
Entonces: C(mol/L)=0,0270181

V. RESULTADOS

5.1 DETERMINACIÓN DEL λ MÁXIMO A PARTIR DE LA SOLUCIÓN ESTÁNDAR

 λ(nm) A

450 0,160

460 0,209

470 0,246

480 0,276

490 0,303

510 0,356

520 0,343

530 0,299

GRÁFICO 1: Obtención de λ máx

5.2 ABSORBANCIAS Y CONCENTRACIONES PARA CADA SOLUCIÓN PATRÓN DE

CoCl PARA λ =510nm
2 máx

N° SOLUCIONES
A C(mol/L)
ESTÁNDAR DE CoCl 2
 1 0.065 0,0118

2 0.124 0,0236

3 0.242 0,0472

4 0.356 0,0708

GRÁFICO 2: Curva de calibración

5.3 MUESTRA ¨D¨

● A=0,141 : Por mínimos cuadrados:A=4,94*C+7,52*(10^-3)
● Entonces: C(mol/L)=0,0270181
● GRÁFICO 3: Curva de calibración

VI.
DISCUSIÓN DE RESULTADOS

La determinación del espectro de absorción para el cloruro de cobalto se hace para conocer la
longitud de onda donde ocurre la absorción máxima de energía que permite el mayor salto
energético, es decir, que las sustancias pasen de un estado menor a uno mayor conocido como
estado excitado. Además, para cada especie existen bandas de absorción que especifican la
energía necesaria para lograr esos saltos energéticos, siendo esto una huella digital para
identificar las sustancias, según Whitten, K (2008). En consecuencia, un espectro de absorción
no es más que una representación gráfica que indica la cantidad de energía absorbida en función
de la longitud de onda por cada especie química. En la práctica la onda donde se daba la mayor
absorción para el cobalto fue de 510 nm como se observa en el Grafico 1, indicando así la onda
donde se absorbe la cantidad de energía necesaria para dar el mayor salto energético.
Igualmente, muchos autores señalan que el espectro de absorción puede verse afectado por los
otros componentes de la solución, entonces, la longitud donde ocurre la máxima absorción de
las especies estudiadas se encuentra sujeta al error de tal asociación, manifiesta Underwood, A
(1986). Se recuerda que el espectro de absorción tanto para el cobalto se determinó a partir de
una solución madre prepara a partir de la disociación de Cloruro de Cobalto Hexahidratado, y
las demás sustancias presentes interfieren en la absorción de la radiación monocromática. Por
otra parte, al tener para cada especie determinada la longitud de onda donde ocurre la absorción
máxima, se procede a construir la curva de calibración (Grafico 2), ya que para obtener los
espectros en el ultravioleta con fines cualitativos se suele emplear disoluciones diluidas del
analito según Skoog, D (2010). En el Grafico 3 encontramos la curva de calibración para la
muestra problema denominada “D” , con esto se determina el valor de absorbancia para cada
dato, referida en las tablas de datos, y encontrado sustento en la ley de Beer, que establece que
a bajas concentraciones es menor la absorbancia, y a mayores concentraciones mayor
absorbancia. En tal sentido, las curvas de calibración se relacionan por medio de una tendencia
lineal o correlación lineal, donde los valores se grafican en función de la absorbancia y la
concentración, para cada curva de las especies (Co, Cr); dando así la linealidad explicada
anteriormente, estableciéndola mediante el coeficiente de correlación, el cual, según los valores
reportados estuvo en el rango 0 y 1 lo que implica una correlación positiva entre tales variables

Respecto al instrumento estadístico, fue usado el método de regresión lineal para obtener los
datos referentes a las variables de la función que correspondían a las cifras obtenidas en cuanto
a absorbancia y concentración.

VII. CONCLUSIONES

● La banda máxima de longitud de onda para el CoCl es 510 nm en el cual se observa la

2

absorbancia máxima es de 0,356 para el caso de la solución estándar 4.

 ● La muestra desconocida evaluada presentó una absorbancia de 0,141 con lo cual se
halló su concentración igual a 0,02701 mol/L.

VIII. RECOMENDACIONES

● El espectrofotómetro usado es de una sola celda, entonces se debe colocar la parte lisa
de la celda en el reflector y como siempre, tomar la celda por las partes rugosas de la
celda.

IX. BIBLIOGRAFÍA

● Gral, C. R. (2006). ESPECTROSCOPIA VISIBLE - UV. UNNE, Facultad de Ciencias

Exactas, Naturales y Agrimensura, 4.7.

● Skoog D, W. D. (2001). Principios de Análisis Instrumental. México: Ed. Mac. Graw

Hill.

● Day Jr. R, Underwood A. Química Analítica Cuantitativa. (1989). Pearson

● Whitten, K (2008) “Química octava edición” Cengage Learning Editores. Ciudad de

México. México.