PRÁCTICA Nº 13

MEDIOS DE CULTIVO – SIEMBRA - DE HONGOS

Apellidos y Nombres: Huarilloclla Cordova Erick Andy

A. RESULTADOS

B. DISCUCIÓN
 Hay 2 tipos de siembra para hongos.

C. CONCLUSIÓN

 Se debe de mantener húmedos los medios en el que están los hongos porque
si o ya no se podrán sacar muestras.
 Todo el medio debe de estar esterilizado para hacer los medios.

D. REFERENCIAS
 Guía de microbiología
 Ames de Icochea, T. (2004). Manual de laboratorio para el manejo de
hongos entomopatógenos. International Potato Center
  Colquehuanca, E. 2013. Identificación de hongos medio ambientales y
cultivo en cámara húmeda. Universidad Agraria la Molina

E. TRABAJO ENCARGADO:

CUESTIONARIO
 Fundamento teórico para cada medio de cultivo para hongos.
1. AGAR SABOURAUD-GLUCOSA (ASG)
- Peptona………………………………. 10gr
- Glucosa………………………….…… 40gr
- Agar-agar……………………….……. 15gr
- Agua destilada………………………. 1000ml

Para mejorar el medio se puede agregar de 3 a 5gr de extracto de levadura (para

1000ml de agua destilada)
Preparación: Disolver al agar en agua por ebullición luego agregar los demás
ingredientes; ajustar el pH a 5.6 – 6.5. Repartir en recipientes adecuados y
esterilizar a 121º C, 15 lb. De presión por 15 minutos.

2. AGAR PAPA DEXTROSA (APD)

- Papa………………………………… 300gr
- Glucosa…………………………….. 20gr
- Agar-agar…………………………… 20gr
- Agua destilada……………………… 1000ml

Preparación: Las papas se cortan en cuadritos, se hierven en un litro de agua hasta

reblandecimiento y desprendimiento de almidón; luego se filtra a través de varias
capas de gasa. Al filtrado añadir a agar y la dextrosa, hervir para disolver el agar,
enfriar y ajustar el pH a 5.6 – 6.5. Esterilizar a 121º C, 15 lb. de presión por 15
minutos.
3. AGAR ALMIDÓN DE ARROZ (AAA)
- Arroz……………………………….. 40gr
- Agar-agar…………………………... 15gr
- Agar destilada……………………… 1000ml

Preparación: Hervir al arroz 45 a 60 minutos, luego filtrar en un tamiz de algodón

o gasa. Al filtrado agregar el agar, hervir y completar el volumen. Ajustar el pH a
5.6 – 6.5
4. AGAR PAPA-ZANAHORIA (APZ)
- Papa……………………………….. 150gr
- Zanahoria…………………………. 150gr
- Glucosa…………………………… 20gr
- Agar-agar…………………………. 15gr
- Agua destilada……………………. 1000ml

Preparación: La papa y la zanahorias se cortan en cuadraditos, se hierven en un

litro de agua hasta su establecimiento, luego se filtra a través de varias capas de
gasa. Añadir al agar y la dextrosa, hervir para disolver el agar, enfriar y ajustar el
pH a 5.6 – 6.5. Esterilizar a 121º C, 15 lb. Depresión por 15 minutos.

5. AGAR CZPEK
- Sacarosa………………………………….. 30.00gr
- Nitrato sódico……………………………. 3.00gr
- Fosfato dipotasico……………………….. 1.00gr
- Sulfato de magnesio…………………….. 0.50gr
- Cloruro potásico…………………………. 0.50gr
- Sulfato ferroso…………………………... 0.01gr
- Agar……………………………………… 15.00gr
- Agua destilada…………………………... 1000.00gr
Preparación: Disolver en el agua destilada de Agar con ayuda del calor; agregar
luego la sacarosa y las demás sales y ajustar el pH a 6.8; posteriormente distribuir el
medio en frascos de 100ml esterilizar al autoclave a 121º C, 15 lb. De presión por
15 minutos.
6. AGAR SABOURAUD-ACEITE DE OLIVA (ASO)
- Dextrosa………………………………. 20gr
- Peptona……………………………….. 10gr
- Agar…………………………………... 15gr
- Billis de buey…………………………. 30gr
- Aceite de oliva………………………… 10ml
- Agua destilada………………………... 1000ml
Se le puede agregar Cloranfenicol cápsula 500 mg/litro (luego de disolver las sales
solo para diagnostico).

Preparación: Disolver los ingredientes en baño maría, ajustar el pH a 6.5; repartir

en frascos de 100ml correctamente rotulados y fechados. Esterilizar a la autoclave a
121ºC, 15 lb. De presión por 15 minutos.
 ¿Cuáles son los medios más usados para hongos ambientales?
AGAR AGUA
Es un medio pobre en el cual el micelio crece en forma muy rala. Es
especialmente usado para hacer aislamientos de punta de hifa. De acuerdo a
la consistencia que se quiera dar al medio, se puede hacer con mayor o
menor cantidad de agar.
Agar 10 g
Agua destilada 1 litro
PAPA DEXTROSA AGAR (PDA)
Es un medio muy usado que sirve para aislar todo tipo de hongos.
Beauveria, Paecilomyces, Lecanicillium (Verticillium) y Metarhizium, los
más importantes hongos parásitos de insectos, al igual que los parásitos de
plantas y los hongos saprofitos crecen muy bien y esporulan en este medio.
Cuando se aíslan hongos a partir de insectos colectados del suelo, es
 recomendable acidificar el medio con ácido láctico al 25%. Se agregan 3 ó 4
gotas sobre el agar solidificado de la placa con el objeto de evitar el
desarrollo de bacterias.
Con los mismos ingredientes, excluyendo el agar, se obtiene el medio
líquido de Papa Dextrosa (PD), muy utilizado para la preparación del
inóculo en forma masiva.
Papa sin pelar 200 g
Dextrosa 10 g
Agar 18 g
Agua destilada 1 litro
FITOLEVADURA
Este medio se usa para aislar hongos a partir de animales. Los hongos
aislados de insectos crecen exuberantemente con micelio bien algodonoso y
buena producción de esporas.
Dextrosa 20 g
Extracto de levadura 5 g
Peptona 5 g
Agar 18 g
Agua destilada 1 litro
 ¿Qué importancia tiene la temperatura y ph en el crecimiento de hongos?
TEMPERATURA
La reducción del metabolismo, incluye la conservación mediante bajas
temperaturas, uso del aceite mineral, agua estéril, suelo estéril, etc. En la
inducción de la dormancia, se incluye el secado sobre sílica gel, la
liofilización y el uso de nitrógeno líquido (la criogenia, o sea el
mantenimiento a temperaturas por debajo del punto de congelación). Estos
últimos métodos requieren de aparatos especiales y de insumos costosos, por
ello hemos considerado en esta publicación sólo los que pueden estar al
alcance de la mayoría de los investigadores en regiones en vías de
desarrollo. Hay otros métodos más económicos, como el uso de aceite
 mineral, pero no es seguro, porque el hongo puede seguir creciendo en
condiciones de desventaja, además, no está garantizada su pureza.
PH
Los hongos toleran un gran intervalo de pH (2,5 - 7,5), de un modo general
soportan mejor el medio ácido que el alcalino. Es de destacar que ellos
mismos son capaces de alterar el pH, utilizando como fuente de energía los
ácidos orgánicos del alimento o los excretados por bacterias acidificantes
que pueden aparecer durante el periodo de deterioro del alimento.
 Describir tipos de siembra de hongos y metodología.
Inoculación directa: Del moho presente en la fruta hacia el agar.
Técnica de diluciones: Sembrar por diseminación 0.1 ml de cada dilución
en una placa de APD e incubar a temperatura ambiente. Observar el
desarrollo de colonias a partir de 2-3 días.
Técnicas de exposición de la placa al medio ambiente: Destapar las placas
de APD o ASG y exponer a medio ambiente durante 15 minutos luego
taparlas e incubar al medio ambiente. Observar el desarrollo de colonias a
los 2-3 días.

 ¿Cuáles son los hongos ambientales más comunes?

Alternaria, Cladosporium(Hormodendrum), Aspergillus, Penicillium,
Helminthosporium, Epicoccum, Fusarium, Mucor, Rhizopus y
Aureobasidium(Pullularia).
 Describir la estructura macroscópica y microscópica de los siguientes
hongos; Aspergillus, Penisullum, Fusarium, Rhizopus, Mucor.
Aspergillus:
a. Macroscópica: Hongo saprofito, parasito, filamentoso con colonias de 2cm de
diámetro, opaco con bordes irregulares.

b. Microscópica:Conidias radiales que tienden a separarse en columnas, sus

conidióforos tienen paredes suaves, las fialides, nacen de las metulas que están
separadas
Rhizopus:
a. Macroscópica
De aspecto algodonoso, color de blanco o negro o a veces verde.

b. Microscópica
Esporangios sin ramificar, presencia de rizoides, hifas aceptadas de color pardo
oscuro.

Penicillium
a. Macroscópica
Las colonias de Penicillium (diferentes de P. marneffei) son de crecimiento
rápido, filamentosas y vellosas, lanosas o de textura algodonosa. Son
inicialmente blancas y luego se convierten en verde azuladas, gris verdosas, gris
oliva, amarillentas o rosadas con el tiempo. El reverso de la colonia es pálido o
amarillento. Pueden presentar exudados en la superficie.

b. Microscópica
Las especies de Penicillium (excepto P. marneffei), hifas septadas hialinas (1.5-
5 µ de diámetro), con conidióforos simples o ramificadas, métulas, fialides y
conidias. Las métulas son ramificaciones secundarias que se forman sobre los
conidióforos. Las métulas acarrean fialides en forma de frasco. La organización
de las fialides en la punta de los conidioforos es típica (llamadas "penicilli" o
pincel). Las conidias (2.5-5µ de diámetro) son redondas, unicelulares y
observadas como cadenas no ramificadas en el extremo de las fialides.