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POLIACRILAMIDA
A. Padilla y H. Gray
INTRODUCCION
Cualquier ion o grupo cargado migrará cuando sometido a un campo
eléctrico. Las proteínas llevan una carga neta a cualquier pH que sea
diferente al de su punto isoeléctrico, por lo tanto estas migrarán y su tasa
de migración dependerá de la densidad de carga (la razón de carga a
masa). Mientras más alta sea la razón de carga a masa, más rápida
será la migración de la molécula. La aplicación de un campo eléctrico a
una mezcla de proteínas en solución, resultará en diferentes migraciones
para diferentes proteínas hacia uno de los electrodos. Sin embargo, ya
que todas las proteínas estuvieron originalmente presentes en toda la
solución, la separación obtenida es mínima. La electroforesis zonal es
una modificación de este procedimiento en donde, la mezcla de
moléculas a ser separadas se coloca como una zona o banda delgada a
una distancia apropiada de los electrodos de tal manera que las proteínas
con diferentes movilidades migren como zonas discretas, que
gradualmente se separan una de otras en el transcurso de la
electroforesis. En la práctica, existen desventajas asociadas a la
electroforesis zonal en solución libre. Primeramente, cualquier efecto de
calentamiento que se de, resulta en una disturbación convectiva de la
columna líquida e interferencia de las zonas protéicas que se estan
separando. Segundo, el efecto de difusión constantemente ensancha
las zonas protéicas y esto continúa hasta después de que ha terminado la
electroforesis. Para minimizar estos efectos, la electroforesis zonal
raramente se lleva a cabo en solución libre, si no que, se ejecuta en una
solución estabilizada con un medio de soporte. Además de reducir los
efectos de convección y difusión durante la electroforesis, el medido de
soporte hace posible que el investigador pueda fijar las posiciones finales
de las proteínas inmediatamente después de la electroforesis, asi
obviando la pérdida de resolución que resulta de la difusión
post-electroforética. El proceso de difusión empleado depende del
medio de soporte que se escoja.
Muchos medios de soporte son de uso común, siendo los más populares
el papel o el acetato de celulosa, materiales tales como gel de sílica,
alumina, o celulosa, que son esparcidos como capas finas en vidrio o
plástico, y geles de agarosa, almidón, o poliacrilamida. Estos medios
estan divididos en dos clases. Papel, acetato de celulosa, y materiales
en capa fina, son relativamente inertes y sirven primordialmente como
soporte y para minimizar convección. Por lo tanto la separación de
proteínas utilizando estos materiales se basa mayormente en la densidad
de carga de las proteínas a un pH escogido, como con electroforesis en
Padilla, A. y Gray, H. SDS-PAGE - Página 2
Estructura Química
CH2 = CH
CH2 = CH
I
I
C = O
C=O
I
I
NH2
NH
CH2
NH
C=O
CH2 = CH
I
-CH2-CH-[CH2-CH]n CH2-CH-[CH2CH-]nCH2-
I I I
CO CO CO
I I I
NH2 NH
NH2
I
CH2
I
NH
I
CO
I
-CH2-CH-[CH2CH-]n CH2-CH-[CH2-CH]n CH2-
I I I
CO CO
CO
I I I
NH NH2
NH2
I
CH2
I
NH
I
CO
I
-CH2-CH-[CH2-CH]n CH2-CH-[CH2-CH-]n CH2-
I I I
CO CO
CO
I I I
NH2 NH
NH2
I
ESTRUCRURA DE UN GEL DE
POLIACRILAMIDA
Catalizadores de la Polimerización
GEL DE APILAMIENTO
GEL DE RESOLUCION
Selección del pH
debe obtener.
PROCEDIMIENTOS
Acrilamida y bisacrilamida son agentes neurotóxicos. Tome las
precauciones del caso y no pipetee éstas sustancias directamente con la
boca. La corrida electroforética en este experimento será del tipo
vertical, discontínuo y con un sistema de tampón disociante.
BIBLIOGRAFIA
APENDICE
Tampón de Muestra