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Facultad de Ciencias Farmacéuticas y Alimentarias

Laboratorio de Farmacognosia I
W 6-9
2019-1

María Isabel Fuentes Díaz C.C 1214743436


Sara Juliana Carrillo Vásquez C.C 1032505350

METABOLITOS PRIMARIOS & SECUNDARIOS

1. Introducción

Los metabolitos primarios son indispensables para la vida tanto de animales,


plantas, hongos y microorganismos; se producen en todo momento y se relacionan
con el metabolismo esencial. Confieren las capacidades necesarias para mantener
la homeostasis pues se encargan de la producción de energía, de brindar soporte
estructural a órganos y tejidos y a nivel funcional de intervenir en procesos de
señalización, transporte o metabólicos.

Esta clase de metabolitos no está influenciada por factores externos. Se divide en


tres clases principales: carbohidratos, lípidos y proteínas. Cada uno de estas clases
conformada por sus respectivas subclases que cumple funciones específicas en el
organismo según la necesidad del mismo.

En el caso de los carbohidratos, cumplen funciones de reserva energética,


estructural y metabólica. Se dividen de acuerdo al número unidades de carbono que
los conforman:

 Monosacáridos: 5-6 átomos de carbono


 Disacáridos: 2 unidades de monosacáridos
 Oligosacáridos: 3-10 unidades de monosacáridos
 Polisacáridos: >10 unidades de monosacáridos

Los lípidos se subdividen en saponificables e insaponificables y estos a su vez en


lípidos simples y lípidos complejos, en el caso de los primeros y terpenos y
prostaglandinas en el caso de los segundos. Tienen función de reserva energética,
estructural como en el caso de las membranas; brindan protección mecánica (tejido
adiposo) y a su vez funcionan como biocatalizadores y precursores de las vitaminas
liposolubles (A, D, E, K).

Por último, las proteínas están formadas por un grupo amino y un ácido carboxílico,
se subdividen en péptidos cuando tienen >100 aminoácidos y proteínas cuando
tienen <100 aminoácidos. Cada proteína posee una estructura única que determina
su función debido a que están compuestas por una secuencia específica de
aminoácidos codificada por medio de información biológica. Son muy importantes en
el área farmacéutica y alimenticia por sus diversos tipos de aplicación.

Las plantas también destinan una cantidad significativa del carbono asimilado y de
la energía a la síntesis de una amplia variedad de moléculas orgánicas que, a
diferencia de los metabolitos primarios, no parecen tener una función directa en
procesos fotosintéticos, respiratorios, asimilación de nutrientes, transporte de
solutos o síntesis de proteínas, carbohidratos o lípidos, y que se denominan
metabolitos secundarios.

Difieren también de los metabolitos primarios en que ciertos grupos presentan una
distribución restringida en el reino vegetal, es decir, no todos los metabolitos
secundarios se encuentran en todos los grupos de plantas. Se sintetizan en
pequeñas cantidades y no de forma generalizada, estando a menudo su producción
restringida a un determinado género de plantas, a una familia, o incluso a
algunas especies.

Algunos productos del metabolismo secundario tienen funciones ecológicas


específicas como atrayentes o repelentes de animales. Muchos son pigmentos que
proporcionan color a flores y frutos, jugando un papel esencial en la reproducción
atrayendo a insectos polinizadores, o atrayendo a animales que van a utilizar los
frutos como fuente de alimento, contribuyendo de esta forma a la dispersión de
semillas. Otros compuestos tienen función protectora frente a predadores,
actuando como repelentes, proporcionando a la planta sabores amargos,
haciéndolas indigestas o venenosas. También intervienen en los mecanismos de
defensa de las plantas frente a diferentes patógenos, actuando como pesticidas
naturales.

Se agrupan en cuatro clases principales.


Terpenos. Entre los que se encuentran hormonas, pigmentos o aceites
esenciales.
Compuestos fenólicos. Cumarinas, flavonoides, lignina y taninos.
Glicósidos. Saponinas, glicósidos cardiacos, glicósidos cianogénicos y
glucosinolatos.
Alcaloides.

2. Objetivos
● Aprender a identificar microscópicamente sustancias características de
plantas, formadas por moléculas pertenecientes al metabolismo primario.
● Identificar la presencia de almidón en diferentes fuentes vegetales mediante
reacciones químicas y pruebas microscópicas.
● Identificar microscópicamente la presencia de gránulos de aleuronas en
diferentes fuentes vegetales.
● Identificar microscópicamente la presencia de gránulos de aceites fijos en
diferentes fuentes vegetales.

● Identificar metabolitos secundarios tales como compuestos fenólicos,


terpénicos y nitrogenados a partir de los resultados obtenidos en las pruebas
químicas rápidas de coloración y precipitación en muestras vegetales
conocidas.
● Reconocer cual prueba corresponde a la determinación de cada metabolito
secundario, así como el resultado positivo esperado.

3. Resultados y análisis de metabolitos primarios

3.1. Reconocimiento de almidón con lugol

Reconocimiento Carbohidratos - Almidón

Planta Sin Lugol Con Lugol

Papa –
Solanum
Tuberosu
m

Maíz – Zea
Mays

Yuca –
Manihot
esculenta

En los tres casos podemos evidenciar la presencia de almidón (en distinta


medida de acuerdo al extracto seleccionado) pues tras aplicar la prueba, se
forma el complejo de coordinación yodo-amilosa y se destaca la tinción azul
en las gotitas de almidón presentes en la muestra.

3.2. Detección de celulosa


Reconocimiento Carbohidratos - Celulosa

Planta Con Cloruro de Zinc – 10 X Con Cloruro de Zinc – 40 X

Canela –
Cinnamomu
m verum

En esta prueba se buscaba observar la ruptura de las cadenas de celulosa


pues el cloruro de zinc rompe la superestructura y el ácido sulfúrico, rompe
las cadenas. Al tratarse de un homo-polisacárido de glucosa, la ruptura de
dichas cadenas, es una forma de evidenciar que dichos monómeros sí están
presentes en la formación de celulosa.

3.3. Detección de granos de aleurona

Reconocimiento de Proteínas – Aleurona

Planta Con Reactivo de Sanger

Lino - Linum
usitatissimum

La aleurona es una sustancia proteica de reserva existente en las semillas de


ciertas plantas, en forma granos microscópicos formando una capa en las
semillas, especialmente en los cereales: lino, nuez moscada, anís estrellado.
En la reacción de Sanger, la basicidad de los grupos nitro hacen que se
disocie el H del OH por tanto el nombre acido. Se utiliza DNFB o Trinitrofenol
en medio acido que reacciona con el aminoácido terminal del péptido
formando derivados amarillos 2,4 dinitro-fenilaminoacidos.

3.4. Detección de lípidos y aceites esenciales


Reconocimiento de Lípidos

Planta Con Sudán 3

Lino - Linum
usitatissimum

En esta prueba, las gotitas de grasa que se observan en primera instancia,


alrededor de la estructura primaria, serán teñidas con Sudán III que es un
colorante diazo del tipo lisocromo (tinte soluble en grasa) por lo que se
solubiliza en grasas por interacciones puente de hidrogeno y de London
dando como resultado la coloración roja en la gotita de grasa previamente
observada.

4. Resultados y análisis metabolitos secundarios

4.1. Reconocimiento de alcaloides en flores de borrachero (Brugmansia


arborea)
Antes Después

Se aplicó la prueba de Dragendorff (izquierda) y Mayer (derecha) en ambos


casos se determina positivo para alcaloides.

Los alcaloides son bases nitrogenadas, las cuales pueden convertirse en sus
respectivas sales mediante la adición de un ácido diluido y formar
precipitados al reaccionar con los reactivos específicos para alcaloides.

El reactivo Meyer se une a los alcaloides a través de enlaces de coordinación


entre los átomos de nitrógeno de los alcaloides y los átomos de mercurio del
reactivo resultando en compuestos complejos de mercurio. La reacción es:
El reactivo Dragendorff por su parte reacciona de la siguiente manera:

4.2. Reconocimiento de esteroides y/o triterpenoides en semillas de


soya (Glycine max)

Antes Después

En el ensayo de Lieberman-Buchard coloraciones verdes, azules, rojas o


violeta es prueba positiva para esteroides y/o triterpenoides, por lo tanto es
positiva.
La adición de ácido acético anhidro se convertirá en ácido acético antes de la
reacción y para que no forme un derivado de acetilo. Los compuestos
triterpenoides se deshidratarán mediante la adición de un ácido fuerte y
formarán la sal que dará una reacción de color. La reacción es la siguiente:

4.3. Reconocimiento de saponinas en epicarpio de semillas de


chumbimbo (Sapindus Saponara)

Antes Después

La prueba fue positiva pues la espuma se mantuvo estable por más de 5


minutos. La reacción es de este estilo:
4.4. Reconocimiento de flavonoides y compuestos fenólicos en pétalos
de rosa roja (Rosa)

Antes Después

Se aplicó el ensayo de Shinoda (izquierda) donde la aparición de colores:


naranja, rojo, violeta o rosado indica presencia de Flavonoides, se obtuvo un
color rosado intenso por lo que fue positiva. En la prueba con cloruro férrico
(derecha) la aparición de un color verde, azul o negro es prueba positiva para
compuestos fenólicos, se obtuvo una coloración púrpura oscuro que nos
indica presencia de compuestos fenólicos.

En el ensayo de Shinoda el cambio de coloración ocurre porque la absorción


de luz de los flavonoides experimenta cambios hacia longitudes de onda más
grandes debido a la reacción de reducción por HCl. La reacción es la
siguiente:
La reacción base de los compuestos fenólicos con el tricloruro férrico es la
siguiente:

4.5. Reconocimiento de Leucoantocianidinas y Antocianinas en hojas de


repollo morado (Brassica oleracea var. capitata f. Rubra)

Antes Después
Se aplicó la prueba de Rosenheim donde la coloración en la fase amílica
indica presencia de leucoantocianidinas
La prueba de Richard Willstatter indica un cambio en la coloración de
acuerdo al pH en caso de presencia de Antocianinas. En pH básicos
(izquierda) se presenta una coloración verde que luego se torna naranja
mientras que en pH ácido (derecha) se evidencia un color rojizo intenso.

Prueba cualitativa para leucoantocianidinas (Prueba de Rosenheim): la


aparición de coloraciones rojas es prueba presuntiva de la presencia de
leucoantocianidinas en la muestra.

Prueba cualitativa para reconocimiento de antocianinas (Prueba de Richard


Willstatter, cambio de color a diferente PH):

4.6. Reconocimiento de Cardiotónicos o lactonas α-β insaturadas en


semillas de catapis (Thevetia peruviana)
Prueba cualitativa para cardiotónicos y lactonas α, β insaturadas (prueba
de kedde): La aparición
de coloraciones violetas o púrpuras es prueba presuntiva de la existencia de
cardiotónicos en la muestra.

4.7. Reconocimiento de taninos en hojas de guayaba (Psidium guajava)

Prueba cualitativa de reconocimiento de taninos (prueba de precipitación


de proteínas): si se presenta turbidez o formación de precipitado es prueba
presuntiva de la presencia de taninos en la muestra.
4.8. Reconocimiento de antraquinonas en extracto de hojas de sen
(Senna)

(prueba Bortranger-kraus): La aparición de un color rojo cereza en la capa


acuosa (fase
inferior) indica presencia de quinonas en la muestra.

4.9. Reconocimiento de cumarinas en cáscaras de limon (Citrus × limon)

prueba de fluorescencia bajo luz ultravioleta en medio básico

Observar el papel bajo luz ultravioleta a 365 nm, la aparición de una


coloración
fluorescente que puede ser: verde, amarilla o roja.

Prueba Cardiotónicos (Semillas de Catapiz -


Thevetia peruviana)
Antes
Después

Se aplicó la prueba de Kedde, el color violeta indica presencia de cardiotónicos.


Prueba Taninos Prueba Prueba Cumarinas
(Hojas de Guayaba - Antraquinonas (Cáscara de Limón -
Psidium guajava) (Hojas de Sen – Citrus × limon)
Senna)
Antes Antes

Después Después
La prueba de La prueba de La prueba de
precipitación de Bortranger-Kraus flourescencia bajo UV
proteínas indica la indica la en medio básico indica
presencia de taninos presencia de la presencia de
cuando se evidencia antraquinonas cumarinas en la
turbidez. por la separación muestra.
de las dos fases
y el cambio de
coloración.

5. Preguntas

5.1. Funciones biológicas en la célula vegetal de los carbohidratos, lípidos y


proteínas.

R/: Carbohidratos: Funciones: Reserva energética, estructurales y


metabólicas.
Presentan entre 3-9 Carbonos unidades mas pequeñas (monósacaridos).
Se almacenan como reserva en hígado para producir glucosa y almacenarla
como glucógeno.

Responsables de:

 Rigidez de la pared celular vegetales superiores


 Protección contra la deshidratación.
 Retiener líquidos en sus redes tridimensionales.
 Propiedades gelificantes

Lípidos:

Reserva energética: 1 gr grasa produce 9.4 calorías,

1 gr azúcar 4 calorías, humano dia 2500 cal

1. Estructurales: bicapas lipídicas de las membranas. Recubren órganos


y le dan consistencia, o protegen mecánicamente como el tejido
adiposo de piés y manos.

2. Biocatalizadores. facilitan las reacciones químicas en los seres vivos:


Preccursores de vitaminas A,D, E, K lipídicas y hormonas esteroideas .

3. Transportadores. desde el intestino hasta su lugar de destino por


emulsión gracias a los ácidos biliares y lipoproteinas.

Proteínas: Las proteinas determinan la forma y la estructura de las células y


dirigen casi todos los procesos vitales. Las funciones de las proteinas son
específicas de cada una de ellas y permiten a las células mantener su
integridad, defenderse de agentes externos, reparar daños, controlar y
regular funciones.
Todas las proteinas realizan su función de la misma manera: por unión
selectiva a moléculas.
Las proteinas estructurales se agregan a otras moléculas de la misma
proteina para originar una estructura mayor. Sin embargo, otras proteinas se
unen a moléculas distintas: los anticuerpos a los antígenos específicos, la
hemoglobina al oxígeno, las enzimas a sus sustratos, los reguladores de la
expresión génica al ADN, las hormonas a sus receptores específicos, etc...(1)

5.2. Aplicaciones en Farmacognosia de los carbohidratos, lípidos y proteínas.

R/: Carbohidratos: Como azúcares y endulzantes para enmascarar el sabor


de comprimidos y mejorar deslizamiento. Transportar principios activos a su
lugar de acción (cliclodextrinas).
Vehículo de dilución: fármacos compatibles.

10% Regímenes de nutrición parenteral


Soluciones de rehidratación oral.

Lípidos: Uso de lípidos saponificables en la industria del jabón, como ceras


en la industria cosmética y en la industria alimenticia como mantequillas y
aceites.

Proteínas: Algunos ejemplos son el colágeno y la gelatina. El colágeno tiene


fibras flexibles que ofrecen gran resistencia a la tracción. Es abundante piel y
huesos y representa el 25 % de la masa total de proteínas en los mamíferos.

Se desnaturaliza por ebullición y se convierte en gelatina. Además, se obtiene


a partir del tejido conectivo bovino, porcino, peces.

En el caso de la gelatina se obtiene a partir del colágeno procedente del


tejido conectivo. 1 molecula de colageno produce 2 moleculas de gelatina. Se
derrite en agua caliente se incha y se gelifica en agua fria. Es de gran utilidad
en la industrial alimentaria como emulsificante mientras que en la
farmacéutica se utiliza como recubrimiento de cápsulas.

5.3. Esquema de las reacciones realizadas en el laboratorio

R/:
 Amilosa + Lugol (2)

 Celulosa + Cloruro de Zinc (3)

 Lípidos + Sudán III (4)

 Proteínas + Reactivo de Sanger (5)


6. Conclusiones

 Se pudieron observar los diferentes metabolitos tanto primarios como


secundarios presentes en muestras vegetales conocidas
 Se logró diferenciar entre metabolitos primarios y secundarios, cuando es
producido cada uno y sus clasificaciones

7. Bibliografía

1. Funciones de las proteínas [Internet]. Aula Virtual de Biología. [cited 16


September 2019]. Available from: https://www.um.es/molecula/prot07.htm

2. Starch - Iodine [Internet]. Chemistry.elmhurst.edu. [cited 16 September 2019].


Available from: http://chemistry.elmhurst.edu/vchembook/548starchiodine.html

3. Amarasekara A, Ebede C. Zinc chloride mediated degradation of cellulose at


200°C and identification of the products. Bioresource Technology [Internet]. 2009
[cited 16 September 2019];100(21):5301-5304. Available from:
https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S096085240900594X
4. Sudan stain [Internet]. En.wikipedia.org. [cited 16 September 2019]. Available
from: https://en.wikipedia.org/wiki/Sudan_stain

5. How does Sanger's reagent work? [Internet]. Quora. 2017 [cited 16 September
2019]. Available from: https://www.quora.com/How-does-Sangers-reagent-work

https://www.academia.edu/29568222/Phitochemistry_Testing_on_Javanese_Ginger