CONCEPTOS Y PRACTICAS DE MICROBIOLOGIA GENERAL

JAIRO PERALES LLERENA

MICROBIOLOGO UNIVERSIDAD DE PAMPLONA
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TALLER 4

Molina Martínez Katherine, kt_3089@hotmail.com, Montero Prent Arinda,

armo2418@hotmail.com, Rumbo Ustariz Juan, juancarum_07@hotmail.com,
Torres Machuca Yarcelis, yarcelistorres8@gmail.com, Nelson David Batista Díaz,
batistanelson12@gmail.com. Control de calidad de alimentos

TALLER 1 BIOSEGURIDAD Y ESTERILIZACIÓN

1. Cuál es el objetivo o finalidad de una siembra por agotamiento?

El objetivo de una siembra por agotamiento es obtener colonias aisladas o

separadas a partir de un inoculo, logrando así el crecimiento de colonias
microbianas de interés.

2. Mencione brevemente el proceso de purificación de un aislamiento

bacteriano obtenido en agares.

 Para ello se toma una pequeña cantidad de muestra con un asa redonda y
se introduce en solución salina al 0.85, y hacer diluciones (10-1 hasta 10-3).
 Luego llevar el tubo de 10-3 a la incubadora durante 24 horas a una
temperatura de 37 °c con el objeto de acondicionar el medio para favorecer
la multiplicación microbiana y su aislamiento o en su defecto omitir este paso
y hacerlo directo.
 Posteriormente sacar el tubo de la incubadoras, destaparlo con la ayuda del
mechero, esterilizar el asa y tomar una pequeña cantidad de la muestra y
llevarla a un medio de cultivo selectivo (dependiendo el microorganismo), con
el fin de hacer el repique y lograr el crecimiento del microorganismo.
Logrando así un aislamiento bacteriano puro.
Nota: es recomendable hacer una tinción de Gram para verificar la morfología del
microorganismo y que sea el de interés. En caso de no estar pura de la caja de Petri
se toma una porción de la colonia y volver a repetir el procedimiento anterior hasta
lograr un cultivo axenico.

OBTENCIÓN DE CULTIVOS PUROS

Se trata de obtener el cultivo de un solo tipo microbiano en un medio de cultivo, por
ejemplo en un tubo inclinado de agar nutritivo. Para ello, se obtiene una pequeña
cantidad de masa bacteriana de una colonia separada en el aislamiento. Con ella
se inocula un nuevo medio de cultivo haciendo estrías muy juntas. La incubación en
condiciones adecuadas proporcionará un cultivo puro. Puede repetirse el proceso

Nota importante: Entregar este taller junto con el Informe de la Practica 4. Entregar el
taller lo más completo posible.
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con cada tipo de colonia. Se obtendrá una colección de cultivos puros, separados,
de los microorganismos que coexistían en la muestra original.

Es aconsejable hacer un segundo aislamiento antes de proceder a la obtención del

cultivo puro. Si todas las colonias de la segunda placa resultan idénticas, puede
usarse una de ellas para establecer el cultivo puro. Obtenido el cultivo puro es
conveniente comprobar su pureza mediante una tinción de Gram. Los cultivos puros
de microorganismos son mantenidos en el laboratorio por resiembras (pase de un
medio de cultivo a otro) sucesivas. Una de las copias puede ser liofilizada para su
conservación

3. Explique brevemente la metodología para realizar siembras en placa

profunda y placa en superficie.

Metodología de siembra en superficie

Se vierte sobre una caja de Petri el medio de cultivo fundido, se deja
solidificar y se coloca sobre la superficie el inóculo, que está contenida en 1
ml con pipeta estéril de la dilución a sembrar. Con ayuda de una asa de
hockey se extiende el inóculo hasta su absorción total por el medio de cultivo
y se lleva a incubación a la temperatura indicada dependiendo el
microorganismo de interés. Transcurrido el periodo de incubación, efectuar
la lectura.

Metodología de siembra en profundidad

Se mide 1 ml con pipeta estéril de la dilución a sembrar, se vierte la misma

en una placa de Petri, levantando lo menos posible la tapa. Agregar 20 a 25
ml de medio de cultivo fundido y a una temperatura no mayor de 45º. Tapar
rápidamente e imprimir a la placa movimientos circulares suave en un sentido
y otro (aproximadamente 5 veces cada sentido).
Dejar solidificar, invertir la placa de manera que la tapa quede en la base, y
llevarla a la incubadora a la temperatura indicada. Transcurrido el periodo
de incubación, efectuar la lectura.

Nota importante: Entregar este taller junto con el Informe de la Practica 4. Entregar el
taller lo más completo posible.