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¿Qué es bioseguridad?

Bioseguridad es un conjunto de normas preventivas destinadas a


proteger la salud de los funcionarios frente a riesgos por agentes
biológicos, físicos o químicos en el laboratorio. La protección del
personal y ambiente del laboratorio se logra mediante la aplicación de
técnicas y normativas de seguridad establecidas.

¿Cuáles son las normas básicas de bioseguridad en el laboratorio de


microbiología?
 Extremar las precauciones cuando se utilicen agujas y jeringas para evitar la inoculación
accidental y la generación de aerosoles durante su manipulación y desecho.
 Emplear técnicas asépticas para el manejo de cultivos de microorganismos
¿Qué es un medio de cultivo; de qué están compuestos principalmente?;

Uno de los sistemas más importantes para la identificación de microorganismos es


observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el
laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio
de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Se han preparado
más de 10.000 medios de cultivo diferentes.

Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe
reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presión
de oxígeno adecuadas, así como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio
de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe
estar exento de todo microorganismo contaminante

Condiciones generales para el cultivo de


microorganismos
El desarrollo adecuado de los microorganismos en un medio de cultivo se ve afectado
por una serie de factores de gran importancia y que, en algunos casos, son ajenos por
completo al propio medio.

1- disponibilidad de nutrientes adecuados

Un medio de cultivo adecuado para la investigación microbiológica ha de contener,


como mínimo, carbono, nitrógeno, azufre, fósforo y sales inorgánicas. En muchos
casos serán necesarias ciertas vitaminas y otras sustancia inductoras del crecimiento.
Siempre han de estar presentes las sustancias adecuadas para ejercer de donantes o
captadores de electrones para las reacciones químicas que tengan lugar.

Todas estas sustancias se suministraban originalmente en forma de infusiones de


carne, extractos de carne o extractos de levadura. Sin embargo, la preparación de
estas sustancias para su aplicación a los medios de cultivo provocaban la pérdida de
los factores nutritivos lábiles.
Actualmente, la forma más extendida de aportar estas sustancias a los medios es
utilizar peptona que, además, representa una fuente fácilmente asequible de nitrógeno
y carbón ya que la mayoría de los microorganismos, que no suelen utilizar
directamente las proteínas naturales, tienen capacidad de atacar los aminoácidos y
otros compuestos más simples de nitrógeno presentes en la peptona.

Ciertas bacterias tienen necesidades nutritivas específicas por lo que se añade a


muchos medios sustancias como suero, sangre, líquido ascítico, etc. Igualmente
pueden ser necesarios ciertos carbohidratos y sales minerales como las de calcio,
magnesio, manganeso, sodio o potasio y sustancias promotoras del crecimiento,
generalmente de naturaleza vitamínica.

Muy a menudo se añaden al medio de cultivo ciertos colorantes, bien como indicadores
de ciertas actividades metabólicas o bien por sus capacidades de ejercer de inhibidores
selectivos de ciertos microorganismos.

2- consistencia adecuada del medio

Partiendo de un medio líquido podemos modificar su consistencia añadiendo productos


como albúmina, gelatina o agar, con lo que obtendríamos medios en estado semisólido
o sólido.

Los medios solidificados con gelatina tienen el gran inconveniente de que muchos
microorganismos no se desarrollan adecuadamente a temperaturas inferiores al punto
de fusión de este solidificante y de que otros tienen la capacidad de licuarla.

Actualmente los medios sólidos son de uso universal, por su versatilidad y comodidad,
pero hay también gran cantidad de medios líquidos cuyo uso está ampliamente
extendido en el laboratorio.

3- presencia (o ausencia) de oxígeno y otros gases

Gran cantidad de bacterias pueden crecer en una atmósfera con tensión de oxígeno
normal. Algunas pueden obtener el oxígeno directamente de variados sustratos. Pero
los microorganismos anaerobios estrictos sólo se desarrollarán adecuadamente en una
atmósfera sin oxígeno ambiental. En un punto intermedio, los microorganismos
microaerófilos crecen mejor en condiciones atmosféricas parcialmente anaerobias
(tensión de oxígeno muy reducida), mientras los anaerobios facultativos tienen un
metabolismo capaz de adaptarse a cualquiera de las citadas condiciones.
4- condiciones adecuadas de humedad

Un nivel mínimo de humedad, tanto en el medio como en la atmósfera, es


imprescindible para un buen desarrollo de las células vegetativas microbianas en los
cultivos. Hay que prever el mantenimiento de estas condiciones mínimas en las estufas
de cultivo a 35-37ºC proporcionando una fuente adecuada de agua que mantenga la
humedad necesaria para el crecimiento de los cultivos y evitar así que se deseque el
medio.

5- Luz ambiental

La mayoría de los microorganismos crecen mucho mejor en la oscuridad que en


presencia de luz solar. Hay excepciones evidentes como sería el caso de los
microorganismos fotosintéticos.

6- pH

La concentración de iones hidrógeno es muy importante para el crecimiento de los


microorganismos. La mayoría de ellos se desarrollan mejor en medios con un pH
neutro, aunque los hay que requieren medios más o menos ácidos. No se debe olvidar
que la presencia de ácidos o bases en cantidades que no impiden el crecimiento
bacteriano pueden sin embargo inhibirlo o incluso alterar sus procesos metabólicos
normales.

7- Temperatura

Los microorganismos mesófilos crecen de forma óptima a temperaturas entre 15 y


43ºC. Otros como los psicrófilos crecen a 0ºC y los temófilos a 80ºC o incluso a
temperaturas superiores (hipertemófilos). En líneas generales, los patógenos humanos
crecen en rangos de temperatura mucho más cortos, alrededor de 37ºC, y los
saprofítos tienen rangos más amplios.

8- Esterilidad del medio

Todos los medios de cultivo han de estar perfectamente estériles para evitar la
aparición de formas de vida que puedan alterar, enmascarar o incluso impedir el
crecimiento microbiano normal del o de los especimenes inoculados en dichos medios.
El sistema clásico para esterilizar los medios de cultivo es el autoclave (que utiliza
vapor de agua a presión como agente esterilizante)
¿cómo se clasifican según su proporción de Agar y según su suministro
de nutrientes?

2.3 Medios Indicadores o Diferenciales: son medios comunes o mejorados, con adicción de
ciertas sustancias que ponen de manifiesto determinadas propiedades bioquímicas,
inherentes a algunas especies bacterianas, como por ejemplo: producción de gas, H2S, de
ácidos, de sustancias alcalinas, acción proteolítica, acción lipolítica, etc.
Estas sustancias o indicadores permiten diferenciar rápidamente una especie microbiana de
otra semejante; por este motivo se denominan medios indicadores o diferenciales. Ejemplo:
Agar Baird Parker, Agar Rambach, etc.
a) El agar Mac Conckey se utiliza para el aislamiento e identificación de Escherichiacoli. Es un
medio mejorado ya que tiene Cristal Violeta y Sales Biliares que inhiben el desarrollo bacterias
Gram positivas.

¿Cuál es la utilidad de los medios de cultivo y qué diferencia un caldo de


un medio sólido?
UTILIDAD DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
1. Aislamiento de bacterias desde una muestra o material patógeno (secreción purulenta,
orina, órgano, fecas, etc.) o de un alimento (leche, carne, etc.)
2. Estudio morfológico de las colonias.
3. Conservación de cepas identificadas (colección de cepas microbianas o cepario).
4. Clasificación y tipificación de bacterias por estudio de sus propiedades bioquímicas en
medios diferenciales.
5. Obtención de toxinas o investigación de sus características.
6. Cultivo y cosecha de bacterias para la elaboración de productos biológicos (vacunas,
antígenos, bacterinas, toxoides, etc.).
MEDIOS DE CULTIVO
Los microorganismos por lo general pueden vivir y multiplicarse sobre substratos nutritivos
preparados en el laboratorio, denominados medios de cultivo. Los Medios de Cultivo son
preparados estériles que contienen sustancias necesarias para el desarrollo de los
microorganismos.
Todos los microorganismos requieren agua, carbono, nitrógeno, hidrógeno, calcio, fósforo y
hierro como elementos vitales. Los microorganismos exigentes requieren además factores de
crecimiento como aminoácidos, vitaminas, purinas y otras sustancias que no son capaces de
sintetizar.
CONDICIONES DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
1. Contener sustancias nutritivas necesarias para el desarrollo de los microorganismos (tales
como aminoácidos, carbohidratos, polialcoholes, vitaminas, minerales).
2. Tener un pH que permita un desarrollo óptimo, por lo general las bacterias patógenos
necesitan un pH neutro o ligeramente alcalino (7.0 – 7.4), en cambio las levaduras y hongos
requieren un pH ácido (5.0).
3. Estar previamente esterilizados o preparados en condiciones asépticas.
4. Estar protegidos de la contaminación ambiental por tapones de algodón cardé, tapones de
goma, tapas metálicas o roscas.

¿En qué momento se esteriliza un medio de cultivo y por qué?


1. ¿Para que se necesita esterilizar el material? Aquí una sencilla respuesta, es
imprescindible trabajar con material y soluciones estériles con objeto de que los
resultados que se obtengan correspondan al microorganismo o microorganismos que
están presentes en la muestra que se estudia y no a contaminantes procedentes del
medio o materiales que puedan desarrollarse y falsear las pruebas. Para ella, antes de
empezar el trabajo práctico se esterilizará, junto con los medios de cultivo, el material
que posteriormente se utilizará.
2. 3. Desde hace mucho tiempo… Es un reto el control de enfermedades infecciosas por
destrucción, disminución de su número o inhibición de microorganismos. Se puede
llevar a cabo con diferentes métodos en función del lugar a aplicar y el grado de
erradicación microbiana que se pretende conseguir.
3. 4. Es por eso que veremos algunos conceptos básicos.  Esterilización, este es un
proceso físico o químico que destruye toda forma de vida microbiana incluidas las
esporas.  Desinfección tiene por objetivo la destrucción de microorganismos
mediante agentes de la naturaleza química, con el fin de disminuir el número de
formas vegetativas a niveles mínimos.
¿Qué es un medio de cultivo selectivo y un medio de cultivo no
selectivo?

 Medio general: medio en donde crecen todo tipo de microorganismos, excepto los que
necesitan condiciones especiales (por ejemplo, agar CLED).
 Medio selectivo: permite seleccionar el crecimiento de una especie o grupo determinado
(hongos, bacterias entéricas, protozoos...).
 Medio diferencial: permite identificar una especie con otra, ambas en el mismo medio.
Puede ser por su crecimiento, su metabolismo,su respiración, etc. (por ejemplo, medio
de McConkey).
 Medio de enriquecimiento: contiene los nutrientes necesarios para apoyar el crecimiento
de una amplia variedad de microorganismos, se utiliza para la cosecha de diferentes tipos
de microorganismos en un mismo medio.
 Medio mínimo: contiene la mínima cantidad de nutrientes posible que permite el
crecimiento de una especie.
 Medio de transporte: preparado para servir como almacenamiento temporal a
especímenes transportados o en transferencia; mantienen su viabilidad y su concentración
simple.

En ciertos procesos industriales se requiere de áreas blancas. ¿Qué


significa el término anterior?
La biotecnología blanca o biotecnología industrial, es la biotecnología aplicada a
procesos industriales.

Un ejemplo de ello es el diseño de microorganismos para producir productos o el uso


de enzimas como catalizadores industriales, ya sea para producir productos químicos
valiosos o destruir contaminantes químicos peligrosos. También se aplica a los usos de
la biotecnología en la industria textil, en la creación de nuevos materiales, como
plásticos biodegradables y en la producción de biocombustibles.

Su principal objetivo es la creación de productos fácilmente degradables, que


consuman menos energía y generen menos desechos durante su producción[.] La
biotecnología blanca tiende a consumir menos recursos que los procesos tradicionales
utilizados para producir bienes industriales.

¿Qué es una unidad formado de colonia?

Unidad formadora de colonias


la unidad formadora de colonias es una unidad de medida que se emplea para la
cuantificación de microorganismos, es decir, para contabilizar el número de bacterias o
células fúngicas viables en una muestra líquida o sólida.
¿Qué técnicas existen para hacer una cuantificación del crecimiento de
los microorganismos?

Técnicas para medir el crecimiento


bacteriano
12 de febrero de 2013 Publicado por Victoria González

Cuando un microorganismo está en un medio adecuado para su crecimiento se va a


reproducir. Si el medio no es adecuado, permanece en fase de latencia, muere o esporula.
Cuando un microorganismo crece, lo hace de forma equilibrada: sintetiza todos sus
componentes cuando los necesita. El tiempo de generación es el tiempo que tarda una célula
madre en proporcionar dos células hijas, y depende del medio de cultivo.

La medición en laboratorio del crecimiento microbiano, se puede llevar a cabo de distintas


formas:
– Contaje de unidades: también llamado contaje en placa. Es un buen método, ya que
permite contar tan solo las células viables, es decir, aquellas capaces de dividirse para dar
descendencia. Teóricamente, cada célula viable puede dar lugar a una colonia. Hay dos
formas de llevar a cabo este conteo: por siembra en superficie o por vertido en placa. En la
siembra en superficie se coloca menos de 0,1 mililitro en la superficie del medio, usando una
barra de vidrio doblada y estéril. En el vertido en placa, el medio estéril se mezcla con el
inoculo y se incuba. En este caso, el inoculo puede ser de 0,1 a 1 mililitro. Además, por medio
de ultrasonidos se pueden separar un poco las colonias para contarlas mejor. En cuanto al
número de diluciones que debe tener el inoculo, se hacen diluciones seriadas, generalmente
en base diez. El número de colonias multiplicado por el factor de dilución nos da el número de
colonias reales.
Cámara de contaje: se emplea para medios líquidos. Su mayor inconveniente es que no
distingue las células vivas de las células muertas o de las partículas en suspensión. En estas
cámaras la superficie del porta lleva marcada una rejilla que facilita el conteo.
– Medidas de masa celular y turbidez: las células pueden dispersas la luz. Cuantas más
células haya en una suspensión, más luz se dispersa. Esta dispersión se puede medir con un
espectrofotómetro o con un fotómetro. Para los organismos unicelulares, la densidad óptica –
unidad de medida del espectrofotómetro-, es proporcional, dentro de unos límites, a la masa
celular y al número de células, por lo que se puede usar como medida de contaje indirecta.
Para evitar cometer mucho error, hay que realizar una curva estándar que relacione las
medidas directas con las medidas indirectas de turbidez. Además, también se puede
relacionar el peso seco con el número de células: se filtra un volumen conocido y se dejan
secar las muestras. La masa seca de las células bacterianas es aproximadamente un diez o
veinte por ciento de la masa húmeda.
– Contaje de colonias: otras veces, no se parte de células sino de un número conocido de
esporas. Los contadores de colonias miden el paso de las partículas por una solución salina
por unidad de volumen. Se pueden fijar límites para que solo se midan las partículas de un
determinado tamaño, por ejemplo de entre 0,2 y 1 nanómetro. El problema de este método es
que solo cuenta partículas, y no diferencia las células vivas de las muertas.

¿Los microorganismos pueden vivir de forma indefinida en un medio de


cultivo? Sustente su respuesta

Los microorganismos por lo general pueden vivir y multiplicarse sobre substratos nutritivos
preparados en el laboratorio, denominados medios de cultivo. Los Medios de Cultivo son
preparados estériles que contienen sustancias necesarias para el desarrollo de los
microorganismos.
Todos los microorganismos requieren agua, carbono, nitrógeno, hidrógeno, calcio, fósforo y
hierro como elementos vitales. Los microorganismos exigentes requieren además factores de
crecimiento como aminoácidos, vitaminas, purinas y otras sustancias que no son capaces de
sintetizar.
1. Los microorganismos pueden vivir de forma indefinida en un medio de cultivo?
Sustente su respuesta.
2. 13. Existen algunos de los microorganismos que no son cultivables o se reproducen en
un caldo nutritivo pues algunos necesitan energía solar para sobrevivir. Aunque
también existen otros medios que les permite multiplicarse en grandes cantidades
gracias a poseer las condiciones ambientales adecuadas.

Establezca las diferencias entre una coloración simple y una coloración


de gram
Establezca las diferencias entre una coloración simple y una coloración de Gram. Coloración
simple: Se utiliza para estudiar compuestos de levaduras, para el cual se utiliza el azul de
metileno, para identificar que las levaduras tienen cocos. Estas células bacterianas difieren
desde el punto de vista químico de su medio exterior y por eso se tiñen contrastando con su
alrededor. Coloración de Gram: es la coloración que más se utiliza en la bacteriología, ya que
esta permite individualizar a las bacterias en 2 grupos como las Gram-positivas y las Gram-
negativas.

Investigue que coloración se debe utilizar para observar las endoporas o


esporas bacterianas, y para observar la cápsula.

En todo caso la coloración Gram requiere de un colorante, solución mordiente, agente


colorante y color que haga un contraste. Investigue que coloración se debe utilizar para
observar las Endoesporas o esporas bacterianas, y para observar la cápsula Coloración de
esporas: Se emplea el color verde de malaquita para que haga contraste con la safranina.
Endoesporas: Son cuerpos resistentes que se reproducen en el interior de las células los
cuales poseen las sustancias necesarias para seguir vivas, pero estas esporas por lo que se
ubican en el centro de la células o extremos de la misma, dependiendo de su ubicación logran
adaptarse para sobrevivir.

Para el informe deben entregar un documento donde se especifique el


procedimiento desarrollado en el laboratorio, los resultados obtenidos y
la discusión y análisis de los resultados.
1. VI. PRACTICA 6 FACTORES QUE AFECTAN EL CRESIMIENTO DE LOS
ORGANISMOS
2. 15. Dentro de los factores que afectan al crecimiento bacteriano, define: El efecto de la
temperatura en bacterias Psicrófilas, Mesófilas, termófilas. Psicrófilas: La temperatura
adecuada para que surja un buen desarrollo oscila entre los 12 a 15 ºC. Mesófilas: La
temperatura adecuada para los Mesófilas oscila entre los 24 a 40 ºC. La gran mayoría
de los microorganismos en lugares con ambientes templados y tropicales como los
simbiontes y parásitos pertenecen a esta categoría. Termófilos: Estas son las únicas
formas de vida con la capacidad de sobrevivir en temperaturas superiores a los 65 ºC,
las cuales son las procariotas. Estos presentan una optimación de entre los 50 a 75 ºC
y un máximo entre 80 a 113 ºC. Dentro de esta categoría se suele distinguir las
termófilas extremas hipertermófilas, que pueden llegar a presentar óptimos cercanos a
los 100ºC, y que taxonómicamente pertenecen al dominio de las Archaea. Efecto del
PH: Cuando las reacciones enzimáticas son realizadas, estas presentan una gráfica
de efectividad a diferentes particularidades del PH (bifásica). La actividad enzimática
se mide por distintos colores y valores del PH. Disponibilidad de agua: Se debe utilizar
la mejor calidad de agua en los procesos de misión crítica y de los análisis para que de
esta forma se logren los mejores resultados confiables y precisos. Halófilos: Esto es un
adjetivo que se emplea para los microorganismos que subsisten en medios con la
presencia de grandes cantidades de sales. Oxigeno: Este es un elemento gaseoso de
inodoro que se encentra en el ambiente libre, como aire, agua, en seres vivos y en
otros compuestos tanto orgánicos como inorgánicos.

Deben llevar al laboratorio un pre informe donde resuelvan las


siguientes preguntas:
1. Dentro de los factores que afectan al crecimiento bacteriano, define:
a. El efecto de la temperatura en bacterias psicrófilas, mesófilas,
termófilas.
b. Efecto del pH.
c. Disponibilidad del agua.
d. Halófilos.
e. Oxígeno.
PRACTICA 7 PRUEBAS BIOQUIMICAS A ALGUNAS BACTERIAS. ¿Cuáles son las bacterias
autótrofas, heterótrofas, quimio autótrofas, organótrofos, litótropos, organótrofos, fotótrofos?
Heterótrofos: Son los seres vivos que requieren conseguir alimentos de otro medio para
obtener su energía. Litótropos: Son dos combinaciones entre los quimiotrofos y los autótrofos.
Estos se encuentran en la biomasa litótrofa que se encuentra dentro de los micro hábitats que
nos rodean, pero alejados de la luz solar y el oxígeno como el rumen del ganado, termitas.
Organótrofos: Es un término empleado dentro de la microbióloga para clasificar y describir los
organismos según como estos obtienen los electrones en sus procesos de respiración, pero
estos pueden ser aeróbicos o anaeróbicos. Fotótrofos: Estos son los que poseen la capacidad
de tomar fotones de la luz del sol como si fuese fuente de energía. Dichos fotones pueden ser
utilizados como agentes fijadores de carbono inorgánico en forma de carbono orgánicos, los
cuales se les llaman foto autótrofos.

https://es.slideshare.net/andresmendoza20/preinformess-micro-biologia