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EN EDUCACIÓN EN CIENCIAS
ISSN 1850-6666
Sofía Bocanegra Orozco1, Luisa Beatriz León Díaz2 , Maria Paula Arévalo .3
123
Departamento de Biología, Facultad de Ciencias, Sede Bogotá, Universidad Nacional de Colombia.
Carrera 45 N° 26-85 , Bogotá, Colombia.
Resumen
El presente artículo tiene como objetivo analizar la variación de la absorbancia de azul de metileno en relación
con su concentración con el fin de proveer una base de referencia para estudios de dicho colorante como
contaminante acuático. Para esto se realizaron seis diluciones de una solución stock de 20,7 ppm a las cuales
se les midió su absorbancia con un espectrofotómetro visible V1200 Mapada utilizando una longitud de onda
óptima de 650 nm, además se determinó la concentración desconocida en una muestra problema. La ecuación
de la recta fue y = 0, 188x + 2, 08 * 10 −3 y el coeficiente R2 = 0, 997 lo que indica que el instrumento
utilizado es de gran exactitud. Adicionalmente se concluye que el método de colorimetría para este compuesto
resulta poco fiable para concentraciones cercanas a 20,7 ppm por lo que se sugiere la utilización de éste
método para concentraciones inferiores a 0,01M.
Abstract
The objective of this article is to analyze the variation of the absorbance of methylene blue in relation to its
concentration in order to provide a reference for studies of this dye as an aquatic contaminant. For this, six
dilutions of a 20.7 ppm solution were made and then its absorption was determined with a visible
spectrophotometer V1200 Mapada using an optimal wavelength of 650 nm, in addition to determining the
unknown concentration in a test sample. The equation of the line was y = 0.188x + 2.08 * 10-3 and the
coefficient R2 = 0.997 which indicates that the instrument has great accuracy.In addition, it is concluded that
the colorimetric method for this compound is unreliable for concentrations close to 20.7 ppm, so the use of
this method is suggested for concentrations lower than 0.01M.
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1.INTRODUCCIÓN incidente (P0) denominada Transmitancia, calculada
En los últimos años ha ido en aumento la preocupación así: T= P/P0 , y b) un decrecimiento de la energía
de distintos sectores de la sociedad respecto al impacto transmitida a medida que el camino óptico (espesor o
ambiental de los distintos desechos químicos (también concentración de la muestra) aumenta, denominando a
llamados contaminantes emergentes) arrojados a los la energía resultante Absorbancia; La segunda expone
cuerpos de agua ya sean de origen doméstico, urbano o el mismo principio b) de la ley de Bouguer pero en
industrial (MSc Gil et al., 2012). términos de que Absorbancia A se calcula como:
Dentro de éstos múltiples residuos se encuentra el Azul A=log(1/T) (Ayres, 1970).
de metileno ( C 16 H 18 Cl N 3 S ), un compuesto Retomando la importancia de la confiabilidad de los
aromático, heterocíclico y catiónico con varios usos datos, es pertinente considerar las limitaciones de la
comunes como; antiséptico de uso tópico , tinte básico colorimetría en base a sus fundamentos físicos de la ley
para hongos, análisis químicos, algunos tratamientos de Lambert-Beer éstas son: 1) carencia de
médicos y como colorante a nivel industrial. monocromatismo de la luz incidente, y, 2) Cambios
(Castro-Acuña, 2016); sin embargo este compuesto químicos en el sistema, de tal forma que las especies
tiene un arsenal de efectos adversos en la naturaleza y absorbentes no representan la totalidad de la
para las comunidades aledañas a las fuentes hídricas concentración. Las desviaciones causadas por estas
contaminadas con este colorante, dado su potencial limitaciones son muy poco significativas en
carcinógeno (Castro-Acuña 2016) junto a algunas concentraciones menores a 0,01M (Ayres, 1970)
sintomatologías negativas vistas en los humanos y Así, a modo de contribución a estudios futuros sobre
efectos mortales en las ratas a cierta concentración este tema, en este artículo se pretende brindar un marco
(Avila, 2011) referencial para la utilización de colorimetría para
Teniendo en cuenta tales perjuicios, la amplitud de uso hallar la concentración de Azul de Metileno de manera
de este compuesto y la poca regulación frente a su óptima.
destinación final en el pasado se ha hecho urgente
encontrar medios eficientes para su separación en el 2.METODOLOGÍA
ambiente lo que lo ha hecho objetivo de varios estudios A partir de una disolución madre de 20,7 ppm de azul
como el de L. Lara (2017) que pretende extraer este de metileno se tomaron alícuotas de 0,5;1;1,5;2,0 y 2,5
colorante mediante fitorremediación con Eichhornia ml, con el fin de llevar cuantitativamente su volumen a
crassipes, el de G. Acuña (2016) para su nano 10 ml, obteniéndose así, 5 nuevas muestras con un
degradación con cristales y otros como el de J factor de dilución de 20, 10, 6,67, 5 y 4,
Iannacone (2007) respecto a la ecotoxicidad de este tipo respectivamente. Posteriormente se realizó una muestra
de colorantes. más diluida con un factor de dilución de 200 con
Para que los resultados como los que se presentan en respecto a la solución stock.
los artículos mencionados anteriormente tengan validez Para hallar la concentración de las diluciones se utilizó
experimental y científica deben poseer un grado de la fórmula C f = V Vi *fCi , siendo Ci la concentración de la
medición muy acertado que refieran a una alta disolución de partida, Vi el volumen de la alícuota, Vf
confiabilidad en los datos.(Henríquez, 2003). Por tal el volumen final (10,00 ml para todos los casos) y Cf la
motivo es importante utilizar métodos acertados, en este concentración final.
caso, para obtener una medición de la concentración de Para conocer la longitud de onda de trabajo (λmáx) se
azul de metileno en un medio acuoso; por estas razones midió la absorbancia de la solución stock en un
uno de los métodos ampliamente usados es la Espectrofotómetro Visible V1200 en un rango de
colorimetría que permite la toma de datos de manera longitudes de onda 350-700 nm. Con estos datos se
rápida, eficaz, no destructiva y a bajo costo pudo hacer una gráfica de absorbancia como función de
(Ayres,1970). longitud de onda, y la curva obtenida se conoce como el
La colorimetría consiste en atravesar, con un haz de luz espectro de absorción o curva espectral.
monocromática, una muestra coloreada diluida de modo Con el valor de λmáx se midió la absorbancia de las 6
que al comparar su absorbancia respecto a otras de diluciones y se hizo una gráfica de absorbancia en
concentración conocida, en una curva de calibración, función de la concentración (curva de calibración)
sea posible hallar de manera aproximada el valor de basándose en el modelo de ajuste por una línea recta
concentración de analito en la muestra de interés. definido por la ecuación y = mx + b
(Palomeque, et al 2018) Finalmente se determinó la concentración de un analito
Los principios físicos de esta técnica se basan en la en una muestra problema m1 midiendo su absorbancia
interacción de las distintas longitudes de onda del y reemplazandola en la ecuación de la recta.
espectro visible con la materia aplicando los principios Para el análisis estadístico de los resultados obtenidos y
de la ley de Bouguer y la ley Lambert-Beer. La primera la generación de gráficas se utilizó Excel 2013.
ley describe: a) una proporción entre la luz
monocromática transmitida (P) y la energía radiante
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3.RESULTADOS Y ANÁLISIS Tabla 1. Datos de absorbancia de la solución stock a
diferentes longitudes de onda.
3.1. Análisis de la curva espectral de una disolución
de azul de metileno de concentración 20,7 mg/L.
ya que la longitud de onda absorbida en nm para un
color transmitido azul verdoso está en el rango de 620-
750 (Christian, 2009).
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Beer-Lambert es aplicable en este sistema (Ramette, cubetas, por sustancias extrañas en el o los reactivos, o
1983). los reactivos tienen color propio.
Según Ramette (1983), una absorbancia diferente de Al describir sólo la absorción de las soluciones diluidas,
cero para el agua destilada, (que es el “blanco” o la Ley de Beer, en este sentido es una ley límite. En
concentración 0) como en este caso, sea quizá porque altas concentraciones, la distancia media entre las
podría haber una ligera discrepancia entre ambas
especies que causan absorción disminuye hasta el punto que ocurren cuando cambia la concentración
en que cada una afecta a la distribución de carga de sus (desviaciones químicas). (Skoog, 2015)
vecinas. Esta interacción , a su vez, puede alterar su
capacidad para absorber una longitud de onda de La concentración obtenida de 0,781 ppm es coherente
radiación dada. Puesto que el grado de interacción con la curva de calibración ya que al ver las
depende de la concentración, esto causa desviaciones de coordenadas de la gráfica se puede determinar que la
la relación lineal entre absorbancia y concentración. concentración desconocida está en el intervalo de 0,4 a
1 ppm.
Por lo general, el efecto de las interacciones
moleculares no es significativo a concentraciones por CONCLUSIONES
debajo de 0.01M, aunque se encuentran algunas
excepciones entre ciertos iones o moléculas de gran - El método de colorimetría para este compuesto
tamaño, lo es así con la absortividad molar del catión resulta poco fiable para concentraciones
del azul de metileno a 436 nm, aumenta 88% a medida cercanas a 20,7 ppm por lo que se sugiere la
que la concentración del colorante aumenta de 10^-5 a dilucion y utilización de éste método para
10^-2 M; aún por debajo concentraciones inferiores a 0,01M, pues las
de 10^-6 M , no se observa un estricto cumplimiento de moléculas de azul de metileno son de gran
la ley de Beer (Skoog, 1986). Las concentraciones de tamaño.
las diluciones medidas están en un rango de 10^-5 a - La absorbancia de las diluciones están
10^-7 M a 650 nm, cuando la absorbancia es mayor, directamente relacionadas con la
ubicándose dentro del rango. concentración, y se debe tener especial
atención al evitar una mayor concentración de
Una medida de linealidad es el coeficiente de la muestra para que la Ley de Beer sea
correlación al cuadrado R 2 ,que se determinó con la aplicable, por tal se realizan diluciones que
función de estimación lineal en Excel. Obteniéndose un puedan ser aplicadas.
resultado de 0,997 que al ser mayor que 0,995 (Harris, - En el medio se puede calcular la concentración
2003) indica un buen ajuste de los datos experimentales de una sustancia encontrada, como por
respecto a la línea recta obtenida por mínimos ejemplo azul de metileno en cuerpos de agua,
cuadrados. cuantitativamente por su absorción.
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