TRABAJO PRÁCTICO N°5

AGENTES FÍSICOS Y QUÍMICOS PARA EL

CONTROL MICROBIOLÓGICO

MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA
Carrera: ENFERMERÍA
FACULTAD Cs de la SALUD - UNSa
AGENTES FÍSICOS Y QUÍMICOS PARA EL CONTROL
MICROBIOLÓGICO

Procedimientos, técnicas o productos que disminuyen o

suprimen el crecimiento de los microorganismos

Pueden aplicarse en distintos ámbitos:

• Salud
• Laboratorio microbiológico
• Alimentos
• Espacios físicos
• Personas, etc.
SEPSIS: Contaminación bacteriana

ASEPSIA: Término aplicado a los procedimientos

utilizados para prevenir que los microorganismos
progresen en un ambiente determinado, por ejemplo:
quirófanos.

HIGIENE: Disminución de los recuentos microbianos a

niveles de seguridad aptos para la salud pública
 CONTROL DE CRECIMIENTO MICROBIANO
ESTERILIZACIÓN Destrucción o eliminación de todas las
formas de vida microbiana, incluidas
endosporas
Tratamiento con calor suficiente para
ESTERILIZACIÓN destruir endosporas de Clostridium
COMERCIAL botulinum en alimentos enlatados
Destrucción de formas vegetativas de
DESINFECCIÓN patógenos. Al destruir éstos se eliminan
también gran cantidad de
microorganismos saprófitos
ANTISEPSIA Destrucción de formas vegetativas de
patógenos sobre tejidos vivos
Eliminación de microbios de un área
DESGERMINACIÓN limitada como la piel alrededor de un
sitio de inyección
Tratamiento destinado a disminuir los
SANEAMIENTO recuentos microbianos en utensilios
hasta niveles de seguridad de salud
pública
Por lo general mediante vapor a
presión o con gas esterilizante como el
oxido de etileno
Sobreviven endosporas resistentes de
bacterias termófilas, pero no
germinarán ni crecerán en las
condiciones de almacenamiento
Puede lograrse por métodos físicos o
químicos. Lisoform, Lavandina
Empleo de antimicrobianos químicos.
Alcohol 70 %, merthiolate, pervinox.
Eliminación mecánica con un algodón
embebido en alcohol
Puede realizarse con lavados a alta
temperatura o inmersión en sustancia
química desinfectante
RESISTENCIA A LA ELIMINACIÓN
DESINFECTANTES
Alto Nivel
ESTERLIZIACIÓN

DESINFECTANTES
Nivel Medio

DESINFECTANTES
Bajo Nivel
 CLASIFICACIÓN DE LOS AGENTES SEGÚN
LA INTENSIDAD DE ACCIÓN
• Bactericida, fungicida o viricida: Efecto mortal o
irreversible.

• Bacteriostático, fungistático o virustático: Impide

su multiplicación. Cuando cesa la acción, el
microorganismo puede multiplicarse de nuevo.
 CLASIFICACIÓN DE LOS AGENTES SEGÚN SU
MECANISMO DE ACCIÓN

ALTERACIÓN DE LA PERMEABILIDAD DE LA MEMBRANA

El daño de lípidos o proteínas de membrana afectan la regulación del pasaje
de nutrientes e interfieren en el crecimiento celular (Ej. Ácidos, álcalis,
detergentes, etc

DAÑO DE PROTEÍNAS
Coagulación y desnaturalización (sales de metales pesados, calor, fenol,
alcohol)
Efecto tóxico sobre enzimas (cloro, agua oxigenada, permanganato, óxido de
etileno)

DAÑO DE ÁCIDOS NUCLEICOS

El daño del ADN y ARN celular (portadores de la información genética) impide
que la célula pueda replicarse o llevar a cabo funcione metabólicas normales
(Ej. Calor, radiación, formol, etc)
 CLASIFICACIÓN DE LOS AGENTES SEGÚN SU NATURALEZA

AGENTES FÍSICOS
• Temperatura
Flameado
• Humedad
• Radiaciones Autoclave
• Agentes mecánicos

AGENTES QUÍMICOS
• Compuestos inorgánicos Óxido de etileno
Lavandina
• Compuestos orgánicos

jabones
Peróxido de hidrógeno
CLASIFICACIÓN DE LOS AGENTES SEGÚN SU NATURALEZA

AGENTES FÍSICOS

Filtración
Pasteurización de leche
Autoclave

Liofilización en bandejas Irradiación UV de

Flameado alimentos
 Métodos Mecanismo de Comentario Uso preferido
acción
Ebullición o Desnaturalización de Elimina formas vegetativas de Platos, jarros,
vapor fluente proteínas patógenos bacterianos y micóticos equipamiento diverso
y casi todos los virus, poco eficaz
para endosporas (15-30 min a
Calor húmedo

96°C)
Autoclave Desnaturalización de Método de esterilización muy Medios de cultivo,
proteínas eficaz. A 121°C por 15 min mueren soluciones, utensilios,
todas las células vegetativas y equipamiento que resista
endosporas presión y temperatura
Pasteurización Desnaturalización de Tratamiento por calor para la Leche, crema, bebidas
CALOR

proteínas leche (72°C x 15 seg) que elimina (cerveza, vino, jugos de

todos los patógenos y mayoría de frutas), etc.
no patógenos
Flameado Combustión y Método de esterilización muy Ansas y agujas de
producción de eficaz y rápido inoculación (de
cenizas laboratorio)
Calor seco

Incineración Combustión y Método de esterilización muy Apósitos contaminados,

producción de eficaz de destrucción total cadáveres de animales,
cenizas bolsas, toallas, etc
Aire caliente Oxidación Método de esterilización muy Material de vidrio y
(estufa) eficaz. Requiere una temperatura acero en gral.
de 180°C durante 2 h
Separación de Elimina los m.o. por pasaje de un Útil para esterilizar
bacterias en el líquido o un gas a través de una líquidos con ingredientes
FILTRACIÓN líquido en que están membrana filtrante. Gralmente. termosensibles.
suspendidas filtros de acetato o nitrato de Purificación agua
celulosa potable. Cabinas de
siembre
 Mecanismo de
Métodos Comentario Uso preferido
acción
Refrigeración Tiene efecto bacteriostático

Eficaz para conservar cultivos

Congelación Disminución de las microbianos. Se aplica un congelamiento Conservación de
FRÍO

intensa reacciones químicas y rápido entre -50°C y -95°C alimentos, fármacos y

algunos cambios en
Eficaz para conservar cultivos cultivos
proteínas
microbianos por períodos prolongados. El
Liofilización
agua se elimina por alto vacío a baja
temperatura
Alteración de la
ALTA estructura molecular Permite preservar colores, olores y
Jugos de fruta
PRESIÓN de proteínas e sabores
hidratos de carbono
Implica la eliminación del agua, privando
Alteración del Conservación de
DESECACIÓN metabolismo
a la célula de la humedad necesaria para
alimentos
su desarrollo. Efecto bacterostático.
Produce la pérdida de agua de células Conservación de
PRESIÓN microbianas. Relacionado con la alimentos (salazón de
Plasmólisis
OSMÓTICA concentración de sales/azúcares (Medio carnes, mermeladas,
hipotónico o hipertónico) etc)
Radiaciones IR, G. Permite esterilización
RADIACIÓN

Destrucción ADN por Esterilización de prod.

en frío, pero no se aplica habitualmente.
Ionizante los radicales libre farmacéuticos, insumos
Produce inactivación del genoma y
formados médicos y dentales
enzimas bacterianas, muerte celular
Radiaciones UV. No muy penetrantes, Vacunas, cabinas de
No Daño del ADN que
esterilización en frío. Efecto germicida siembra, quirófanos,
Ionizante afecta su replicación
Microondas (no muy eficiente) potabilización de agua
 AGENTES FÍSICOS
Calor húmedo: Autoclave

Vapor de agua

121°C por 15 min – 1 atm

Desnaturalización de proteínas

Esterilización: mueren todas las

células vegetativas y
endosporas

USOS: Medios de cultivo, soluciones, utensilios, equipamiento que resista presión y

temperatura
 AUTOCLAVE
(9) manómetro para (8) válvula de seguridad
controlar la presión (5) tapa que cierra herméticamente

(7) espita
(6) tornillos mariposas
que se ajustan en cruz

(1) caldera metálica (2) cámara de esterilización

(3) soporte o rejilla en la

(4) fuente de calor parte interna donde se coloca
(hornalla tipo corona) el material a esterilizar
 AUTOCLAVE
Funcionamiento del autoclave
1. Retirar la tapa
2. Controlar el nivel de agua
3. Colocar el material
4. Encender la llama
5. Controlar la espita (abierta)
6. Cerrar la tapa (ajustar tornillos en forma de
cruz)
7. Purgar el autoclave
8. Cerrar la espita
9. Controlar la presión (debe llegar a 1 atm)
10. Regular la fuente calórica para estabilizar la
presión
11. Controlar el tiempo de esterilización (15-30
min)
12. Apagar la fuente de calor
13. Esperar a que el manómetro llegue a 0
14. Abrir la espita (equipara presiones)
15. Abrir tapa
16. Sacar material y secarlo
AUTOCLAVE AUTOMÁTICA
 AGENTES FÍSICOS
Calor seco: Horno de esterilización

CALOR

180° durante 2 horas

Oxidación de proteínas microbianas

Esterilización: mueren todas las

células vegetativas

USOS: Material de vidrio y acero en general

 AGENTES FÍSICOS:
Calor seco: Flameado

Exposición directa al fuego

Combustión

ESTERILIZACIÓN

USOS: Ansas y agujas de inoculación (de laboratorio)

 AGENTES FÍSICOS
Agentes mecánicos: Filtración
Microorganismos en un
medio de cultivo líquido

Membrana filtrante

Solución “estéril” (dependiendo

del tamaño de poros del filtro)

Pasaje de líquidos por una membrana (ej. acetato de

celulosa) con poros uniformes más pequeños que las Equipos de Filtración
bacterias y virus Esterilizante

USOS: esterilización de líquidos con ingredientes termosensibles, purificación agua

potable, cabinas de flujo laminar
 Agentes físicos
RADIACIONES no Ionizantes: Rayos UV

• Altera proteínas, bases púricas y pirimídicas

• Produce ozono en contacto con el aire
• Transforma en agua oxigenada parte del agua

Tiempo de aplicación: si este no es

suficiente, no se produce la muerte
sino mutaciones

USOS: cabinas de siembra en laboratorios, envasado de antibióticos, salas de prematuros y

quirófanos, potabilización de aguas de mesa, etc.
Efecto de la Luz UV sobre un fragmento normal de ADN
 AGENTES FÍSICOS
Radiaciones Ionizantes: Rayos X y Rayos Gamma

– Tienen mayor energía que las radiaciones UV y por lo tanto son de mayor
poder de penetración
– Penetran la bacteria y producen ionización de los átomos
– Efectos: inactivación del genoma y de las enzimas bacterianas, por lo
tanto su muerte

USOS: Permiten la esterilización en frío o radioesterilización de jeringas de plástico y catéteres

de uso intravenoso, medicamentos, hormonas, vitaminas y antibióticos, válvulas cardíacas para
trasplantes.
ESTERILIZACIÓN por RADIACIÓN UV y FILTRACIÓN
CABINA DE CULTIVO
CLASIFICACIÓN DE LOS AGENTES SEGÚN SU NATURALEZA

AGENTES QUÍMICOS

Lavandina
(hipoclorito de sodio)

Peróxido de
Alcohol
Hidrógeno

Oxido de etileno
Jabones y
Ácidos orgánicos
detergentes
 Agentes químicos

• Pocos logran ESTERILIDAD

• En general, reducción de poblaciones microbianas a niveles
seguros o eliminación de formas vegetativas de patógenos
• Selección: no existe un desinfectante que sea apropiado para
todas las circunstancias
• La concentración influye sobre la actividad
• Interferentes químicos? (otras sustancias químicas, pH, etc.)
• Proceso gradual
• Asociación de desinfectantes: permite obtener desinfectantes
más enérgicos y rápidos en su acción, pero es importante saber
qué mezclas son adecuadas
 AGENTE MECANISMO DE USO PREFERIDO OBSERVACIONES
QUÍMICO ACCIÓN
No muy usado Desinfectante o antiséptico.
Rotura de membrana Superficies ambientales, Irritante y olor desagradable.
Fenol y
Desnaturalización de instrumentos, piel y mucosas. Muy activo frente a bacterias,
derivados proteínas Jabones de manos y lociones menos frente a esporos, hongos y
cutáneas. virus
Desinfección cutánea, en Bactericidas contra bacterias
Biguanidinas
Rotura de membrana especial para el lavado Gram positivas y Gram negativas;
(clorhexidina) quirúrgico no tóxico, persistente.
Inhibe función de proteínas Antiséptico eficaz
IODO Fuerte oxidante (Iodopovidona, Pervinox) Actúan contra bacterias y muchas
HALÓGENOS

Desinfección agua (cloro esporas, diversos hongos y algunos

gaseoso) virus.
Agente oxidante que altera
CLORO Desinfección equipamientos Ambos pueden actuar solos o como
componentes celulares
de la industria láctea; componentes de compuestos
artículos caseros y material orgánicos e inorgánicos
de vidrio
Deshidratación. Termómetros y otros Bactericidas y fungicidas pero no
Desnaturalización de instrumentos eficaces contra endosporas o virus
Alcoholes proteínas y disolución de Desgerminación (frotado sin envoltura. Etanol e isopropanol
lípidos piel) (70%)
Nitrato de plata evita
Metales oftalmia gonococcica
Desnaturalización de neonatal; Sulfadiazina
pesados y sus Plata y Mercurio son Biocidas
enzimas y proteínas argéntica: crema tópica en
compuestos quemaduras.
Sulfato de cobre: alguicida
 AGENTE MECANISMO DE
USO PREFERIDO OBSERVACIONES
QUÍMICO ACCIÓN
Eliminación mecánica de
Muchos jabones
Jabones y microorganismos a través del Desgerminación de la piel y
antibacterianos contienen
Detergentes lavado. Escaso o nulo poder eliminación de detritos
TENSIOACTIVOS

antimicrobianos.
bacteriostático
AGENTES

Higienizantes Incierto. Inactivación o Higienizantes en industria. Amplio espectro. No tóxicos,

ac.-aniónicos alteración de enzimas? láctea y alimentos. no corrosivos, acción rápida.

Bactericidas/
Compuestos de Inhibición de enzimas,
Antiséptico para la piel, bacteriostáticos, fungicidas,
desnaturalización de
amonio proteínas y alteración de
instrumentos, utensilios, viricidas (virus con envoltura).
cuaternario elementos de goma. Penetran superficies. Son
membranas.
desodorantes.
Glutaraldehído menos
Esterilizante (pero 3 a 10 hs)
irritante que el
Desnaturalización de Antimicrobianos muy eficaces
Aldehídos proteínas
Formaldehido 40%.
destruyen bacterias, esporos
Esterilización de
y virus
instrumentos médicos.
Esterilizantes Desnaturalización de Excelente esterilizante en Óxido de etileno más
proteínas frio de objetos utilizado. Gas tóxico y
químicos gaseosos
termosensibles. (mantas, explosivo. Muy penetrante y
colchones, plásticos, etc.) activo frente a bacterias,
hongos y virus. Fuerte efecto
esterilizante (4-18 h)
Peróxidos (agentes Oxidación Superficies contaminadas, H2O2: es un mal antiséptico
en heridas profundas son pero buen desinfectante. Ac.
oxidantes)
eficaces contra anaerobios peracético es eficaz. Ozono
 AGENTES QUÍMICOS
Fenoles

• Rotura de membrana
• Desnaturalización de proteínas

DESINFECTANTE O ANTISÉPTICO.
Irritante y olor desagradable:
Bactericida. Menos eficaz frente a
esporos, hongos y virus.
Potente desinfectante (2-5 ‰)

USOS: Superficies ambientales, instrumentos, piel y mucosas. Jabones de manos,

lociones cutáneas y enjuagues bucales.
 AGENTES QUÍMICOS
Biguanidinas

• Rotura de membrana

DESINFECTANTE
Clorohexidina: solución alcohólica
1%, acción rápida y persistente. No
tóxico
Bactericidas vs Gram (+) y Gram (-)

USOS: Prevención de infecciones hospitalarias, Desinfección cutánea, en especial para el

lavado quirúrgico. Antitusivos, enjuagues bucales.
 AGENTES QUÍMICOS
Alcoholes

Deshidratación, desnaturalización
de proteínas y disolución de lípidos

DESINFECTANTE: Bactericidas y
fungicidas pero no eficaces contra
endosporas o virus sin envoltura.
Etanol e isopropanol (70%)

USOS: Termómetros y otros instrumentos, Desgerminación (frotado piel)

 AGENTES QUÍMICOS
Halógenos

• Fuerte poder oxidante

DESINFECTANTE. Actúan contra

bacterias y muchas esporas, diversos
hongos y algunos virus.
Ambos pueden actuar solos o como
componentes de compuestos orgánicos
e inorgánicos

USOS: Antiséptico eficaz (Iodopovidona, Pervinox). Desinfección equipamiento agua

(cloro)
 AGENTES QUÍMICOS
Agentes tensioactivos: Jabones y detergentes

Eliminación MECÁNICA de
microorganismos a través del lavado.
Escaso o nulo poder bacteriostático

USOS: Desgerminación de la piel y eliminación de detritos

 AGENTES QUÍMICOS
Aldehídos

• Desnaturalización de proteínas

DESINFECTANTE. destruyen bacterias,

esporos y virus
- Glutaraldehído, Formaldehido (formol
40% - formalina)
- Mejor acción (3-10 hs contacto)

USOS: Desinfección de material y superficies del ambiente hospitalario

 AGENTES QUÍMICOS
Peróxidos

• Oxidación

Agua oxigenada: es un mal antiséptico pero

Equipo esterilización por
inmersión con ácido peracético
buen desinfectante.
Acido peracético es mas eficaz, no deja
residuos tóxicos. Puede emplearse líquido y
en estado plasma.
Ozono complemento de la cloración

USOS: Superficies contaminadas, en heridas profundas son eficaces contra

anaerobios sensibles al oxígeno. Ac. Peracetico, endoscopios y material microcirugía
 AGENTES QUÍMICOS
Gaseosos: Óxido de etileno
El óxido de etileno es un gas inflamable de aroma fuerte. Gas tóxico y
explosivo
.
Desnaturaliza proteínas mediante un efecto alquilante sobre distintos
radicales químicos

Muy penetrante y activo frente a bacterias, hongos y virus

No se debe usar con líquidos debido a que es soluble

Fuerte efecto esterilizante (4-18 h)

Permite esterilización en frío

USOS: Excelente esterilizante sobretodo en objetos termosensibles. (mantas,

colchones, plásticos, catéteres, accesorios de anestesiología, aparatos termolábiles y
ópticos, etc.) PERMITE ESTERILIZACIÓN EN FRÍO
 AGENTES QUÍMICOS
Gaseosos: Óxido de etileno
Se debe usar guantes y EFECTOS TÓXICOS
máscara para protección
-Mutagénicos, cancerígenos y teratogénicos
-Irritación de ojos, piel, vías respiratorias
-Trastornos digestivos y neumológicos

DESVENTAJAS
-Efectos tóxicos
-Proceso largo
-Toxicidad residual (precisa sistema
de monitoreo ambiental y
personal)
 CONTROLES DE ESTERILIZACIÓN
Monitorización calidad del proceso
• CONTROLES FÍSICOS: permiten observan los parámetros de cada
aparato: termómetros, manómetros, etc.

• CONTROLES QUÍMICOS internos y externos

cambio de color

• CONTROLES BIOLÓGICOS

Endosporas termoresistentes
(crecimiento (+) ---> esterilización deficiente)
MATERIAL MAL ESTERILIZADO O DE ESTERILIZACIÓN DUDOSA NO DEBE SER UTILIZADO
 ESTERILIZACIÓN
PROCESO

PREPARACIÓN CONTROL DE
DE MATERIAL: ESTERILIZACIÓN
MÉTODO DE
-Lavado y ESTERILIZACIÓN -Control
EMPAQUE
secado (físico , químico
-Inspección del químico) -Control
material biológico
Sistema de Esterilización
Relación Orientativa del Método de Esterilización apropiado para cada material
 Relación Orientativa del Método de Esterilización apropiado para cada material

Horno Autoclave Oxido Formol Ácido Plasma

Pasteur (calor Etileno Peracético
(calor seco) húmedo)

Compatible •Metales • Instrumental • Instrumental • Instrumental • Artículos • Endoscopio

•Vidrios •Algodón •Plásticos •Plásticos sumergi- • Fibra Óptica
•Aceites •Líquidos •Artículos bles • Materiales
•Vaselina •Algunos Eléctricos uso médico
•Polvos Plásticos •Gomas
•Petrolatos •Goma

No •Plástico •Aceites •Líquidos •Celulosa •Art. no • Celulosa

compatible •Gomas •Petrolatos •Polvos sumergi- • Líquidos
•Líquidos •Polvos •Vaselina bles • Polvos
•Papel •Vaselina •Aceites •Aluminio • Bandejas
ionizado metálicas
(bloquean
radiofrecuenc
ias)
Ventajas y Limitaciones de algunos Métodos de Esterilización
Características generales de algunos métodos de esterilización
 Organización del Material Estéril
TIPO DE MATERIAL
FECHA DE
VENCIMIENTO Criterio
Criterio Todos los materiales
del mimso tipo juntos
Lo más antiguo debe
estar mas a la visa Lo más liviano arriba y
(Arriba, adelante, parte lo más pesado abajo
derecha)

Paquetes holgados

Etiquetas a la Vista
Situación Problemática
Situación Problemática
MÉTODOS DE INACTIVACIÓN DE PRIONES
Oxido de Etileno
INEFICACES Formaldehído
H2O2
Ebullición
Radiaciones Ionizantes

Ac. Peracético
EFICACIA PARCIAL Autoclave 121ºC-30min
Lavandina (0,5% 15 min)

ALTA EFICACIA Lavandina (2% , 1h)

Autoclave 134-136ºC 18 min

DESTRUCCIÓN Incineración a Tº >800ºC

 ENDOSCOPIOS
LIMPIEZA EXTERNA: inmersión en
agua y detergente.
LIMPIEZA INTERNA: insuflación de
agua y cepillado con detergente
enzimático de todos los canales.

DESINFECCIÓN MANUAL: inmersión

en detergente de alto nivel.
DESINFECCIÓN MECÁNICA: lavadoras
automáticas.

ESTERILIZACIÓN: luego del secado

en óxido de etileno o gas plasma.