“Año de la Inversión para el Desarrollo Rural y la Seguridad Alimentaria”

UNIVERSIDAD NACIONAL JORGE BASADRE

GROHMANN
Facultad de Ciencias Agropecuarias

Escuela de Ingeniería en Industrias Alimentarias

DETERMINACION DE PROTEINAS – METODO DE BIURET

(PRACTICA 03)

Alumna : Tito Osco, Eva Martha Cód. 2013-38995

Curso : Laboratorio de Análisis Instrumental

Año : tercero

Sección : A

Docente : Prof. Dr. Miguel A. Larrea céspedes

Tacna – Perú

2016
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INTRODUCCION

Las proteínas son principios inmediatos orgánicos constituidos por largas cadenas de

aminoácidos, los cuales se unen entre sí mediante enlaces peptídico. La existencia del

enlace peptídico, de aminoácidos azufrados, puede ponerse de manifiesto en el

laboratorio mediante una serie de reacciones coloreadas específicas, que sirve para la

identificación de proteínas.

En este presente trabajo desarrollamos el tema de Reconocimiento de proteínas y para

esto hemos realizado un trabajo de investigación mediante el cual estamos exponiendo

las diferentes formas de reconocer la presencia delas proteínas en una sustancia (clara

de huevo), las reacciones a utilizar, etc. Este informe en completo también contiene la

experiencia en el laboratorio, imágenes de ella y algunos resultados que se pedía en la

realización de informe y que se requería saber en cada experimentación.

Los anticuerpos (moléculas que sirven para como protección inmunológica) son

proteínas al igual que las enzimas (catalizadores biológicos) y algunas hormonas.

Las proteínas pueden llevar a cabo funciones tan diversas por la enorme posibilidad de

Combinaciones en la composición y secuencia de aminoácidos.

Las proteínas también se clasifican según su composición, las que se forman solo de

residuos de aminoácidos y no tienen otras biomoleculas son PROTEÍNAS SIMPLES; no

odas las proteínas son solubles en agua, de hecho las proteínas insolubles son

esenciales para dar soporte y mantener la integridad estructural de las células y

organismos.

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I. OBJETIVOS:

Reconocer la presencia de algunos aminoácidos en las proteínas.

Conocer algunas propiedades de las proteínas.
Conocer reacción xantoproteica y de biuret.

II. FUNDAMENTO TEORICO :

El nombre de la reacción procede del compuesto coloreado formado por la condensación

de dos moléculas de urea con eliminación de amoniaco.

Si una solución fuertemente alcalina de sulfato cúprico (𝑐𝑢 𝑠𝑜4 ) se añade a una solución

de proteína se forma un complejo entre el ion cúprico y los enlaces peptídicos, con la

aparición de una coloración de violeta purpura, que presenta un máximo de absorción a

540 nm.

 CARACTERISTICAS MAS IMPORTANTES DE LA REACCION

La reacción del biuret se aplica, a partir de los tetra péptidos, a todos los péptidos y

Proteínas; su rango de determinación es de 1 a 6 mg/ml.

No depende de la composición de aminoácidos. compuestos con enlaces peptídicos

producen un cambio del color del azul al purpura cuando reacción con ( 𝑐𝑢 ) (II) en medio

alcalino.

El compuesto más sencillo que da la fracción es el biuret, un dinero de la urea que da

el nombre al ensayo, de estructura 𝐶𝑂𝑁𝐻2 - 𝑁𝐻 - 𝐶𝑂𝑁𝐻2 .

El ensayo es bastante específico para proteínas pero poco sensible, requiriendo de 1 a 10

mg. De proteína.

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Se ha empleado la reacción de biuret que da una coloración purpura cuando los

enlaces peptídicos reaccionan con los iones cúpricos a un pH alcalino y se ha informado

que no interfieran pequeñas cantidades de azucares reductores (mitsuda y mitsunaga,

1974). El método ha sido mejorado considerablemente mediante el uso de plano -2-ol. Y

la aplicación de calor (noll y cols, 1974.)

III. MATERIALES Y METODOS :

a). MATERIALES:

tamiz
mortero
espectrofotómetro
agitadores
barras magnéticas
centrifuga
tubos de ensayo y pipetas

b). MUESTRAS:

NaCL 0.15 M
Na OH
Sulfato de cobre
Reactivo de biuret
Albumina de suero bovina

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 PREPARACION DE LA MUESTRA :

Tomar 10.0648 de frijol y moler hasta una granulometría < de 60 mesh. Reservar
una porción para determinación de nitrógeno total.

Preparar suspensiones en 10 % en solución de NaCL 0.15 M y agitar por 1 hora

(una por grupo).

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Centrifugar y medir el volumen de sobrenadante. Reservar una alícuota para

determinación de nitrógeno total.

Determinar el contenido de proteínas por el método de biuret.

IV. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL :

A partir del extracto salino obtenido se timan alícuotas de 0.1 ml (muestra 1) y

0.8 ml. (muestra 2).

Seguidamente completar a 0.7 ml. Con agua destilada; adicionar 4,0 del reactivo
de biuret y realizar la lectura después de 30 min. A 540nm.

Del mismo modo se prepara una curva padrón a partir del suero de albumina
bovina en la concentración de 0.1 g / 10 ml.

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 Solución padrón de albumina bovina

 Pesar 1000 mg. De suero albumina bovina y 0.1 ml. De Na OH 1N.
 Disolver con agua destilada y completar para 100 ml. (sin mucha agitación )
 Esta concentración equivale a 0.1 g. / 10 ml. O 1.0 g. / 100ml.

CURVA PADRON DE ALBUMINA DE SUERO BOVINO

NUMERO PADRON SAB CONCENT. H2O R. BIURET ABSORB.

TUBOS (ml.)
(mg.) (ml.) (ml.) (540 nm.)

1 0.1 1.0 0.9 4,0 0,0283

2 0.2 2.0 0.8 4,0 0,0894

3 0.3 3.0 0.7 4,0 0,1279

4 0.4 4.0 0.6 4,0 0,1787

5 0.5 5.0 0.5 4,0 0,2351

6 0.6 6.0 0.4 4,0 0,2747

7 0.7 7.0 0.3 4,0 0,3215

8 0.8 8.0 0.2 4,0 0,3215

9 0.9 9.0 0.1 4,0 0,3663

10 1.0 10.0 ……….. 4,0 0,4128

blanco ……….. ……….. 1,0 4,0 0,4518

 Esperar 30 min. Y leer la absorbancia.

 PREPARAR DEL RECTIVO BIURET :

a) SOLUCION A :

 Pesar 1.5 g. de sulfato de cobre (CuSO4 . 5 H2O)

 6.0 g. de tartrato de sodio y potasio
 500ml. De agua destilada

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b) SOLUCION B :

 300 ml. De Na OH al 10% (30g.NaOH / 300 ML. De agua)

 Agregar 1,0 g. kl.

c) MEZCLA :

 Mezclar ambas soluciones

 Completar para un litro en balón volumétrico.

V. RESULTADOS :
CONCENTRACIÓN MG ABSORBANCIA (540 NM)

4.0 0.1787

5.0 0.2351

6.0 0.2747

7.0 0.3215

8.0 0.3663

9.0 0.4128

10.0 0.4518

 Gráfico de dispersión de la curva de calibración:

ABSORBANCIA VS CONCENTRACIÓN
0.5
0.45
0.4
0.35
ABSORBANCIA

0.3
0.25
0.2
0.15
0.1
y = 0.0452x + 0.0036
0.05
R² = 0.9985
0
0 2 4 6 8 10 12
CONCENTRACIÓN

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 Determinación del porcentaje de proteínas en una muestra de frijol canario:

A. 𝐒𝐞 𝐭𝐨𝐦𝐚𝐫á𝐧 𝐝𝐨𝐬 𝐦𝐮𝐞𝐬𝐭𝐫𝐚𝐬:

𝑀1 = 0.6𝑚𝑙
𝑀2 = 1 𝑚𝑙

B. 𝐀𝐛𝐬𝐨𝐫𝐛𝐚𝐧𝐜𝐢𝐚 𝐝𝐞 𝐥𝐚𝐬 𝐦𝐮𝐞𝐬𝐭𝐫𝐚𝐬:

𝐴𝑀1 = 0.2448
𝐴𝑀2 = 0.4115

 Para la obtención de los resultados se considera en el presente trabajo las dos

muestras que finalmente serán promediadas.

1. Determinación de coeficientes por mínimos cuadrados:

 a = 0.0036
 b = 0.0423
 r = 0.9993

 Ecuación de la recta:

Y = a + bx

𝑀1 :
𝑌 = 𝑎 + 𝑏𝑋
0.2448 = 0.0036 + 0.0423X
0.2448 − 0.0036
X =
0.0423
X = 5.7021 m𝑔
𝑀2 :
𝑌 = 𝑎 + 𝑏𝑋
0.4115 = 0.0036 + 0.0423X
0.4115 − 0.0036
X =
0.0423
X = 9.6430 m𝑔

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 Dilución de las muestras:

A. Muestra 1:

5.7021mg__________ 0.6 ml
X___________65ml
617.7275 mg__________ 65ml
X__________ 100 ml
950.35 __________10.0653g
X__________100g
X = 9441.84 mg⁄100g
X = 9.44 g⁄100g = 9.44% globulinas

B. 𝑴𝒖𝒆𝒔𝒕𝒓𝒂 𝟐:

9.6430mg__________ 1 ml
X__________65ml
626.745 mg___________ 65ml
X__________ 100 ml
964.3 __________10.0653g
X__________100g
X = 9580.44 = 9.58% globulinas

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VI. CONCLUSIONES :

Las proteínas están constituidas por aminoácidos, por los cuales los métodos se
basan en el reconocimiento de aminoácidos.
Este proceso nos sirve para reconocer si existe proteínas o no en ciertos tipos de
sustancias en una solución.
Las proteínas son sensibles con las sales metálicas pesadas, formando
precipitados.

VII. RECOMENDACIONES:

Se recomienda tener gran cuidado y precaución con el manejo de los materiales

de laboratorio, con ello estaremos colaborando con nuestra propia seguridad y a
la vez estaríamos evitando que se produzca algún accidente.
Se debe utilizar siempre el utensilio en la función para la que fue diseñado.
No se debe jugar con los utensilios, especialmente con los de vidrio por el riesgo
de quebrarse y producirse heridas u otro accidente.
Empleemos los materiales correctos de acuerdo a la práctica.

VIII. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS :

WIKIPEDIA la enciclopedia libre (sitio en internet). Ley de beer-lambert.

Disponible en: http:/ es. Wikipedia. Org. / wiki / ley_de _ beer – Lambert.
Wikipedia la enciclopedia libre (sitio en internet). Ecuación de Henderson –
hasselbaldch. En: http: // es. Wikipedia. Org. /wiki/ ecuación% B3N de
Henderson-hasselbech.
WWW. Ehu.es (sitio en internet). Ecuación de Henderson – hasselbalch.
Disponible en: http: // www. Ehu. Es / biomoleculas / buffer/ hh. Htm.
WWW. Biología Arizona. Edu. educación de Henderson – hasselbech. disponible
en: http: // www. Biología. Arizona. edu / biochemistry / proble_ sets/ pH/ HH.
HTML.
Scrib método de biuret. Disp. en http: //es. Scribd.com / doc /42854211/43/
método-de-biuret.
Trudy mc. Kee, james r. (2003), bioquímica la base molecular de la vida, 3ª
edición, mc. Graw-hill, México.

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