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Capítulo 1

Información General

Justificación

Las reacciones que permiten identificar estos y otros grupos de aminoácidos, no son

suficientes para identificar inequívoca de unos aminoácidos, por tanto cuando se analiza un

hidrolizado proteico o una mezcla de aminoácidos de otro origen, debe verificarse con

aminoácidos patrones. Las reacciones de desnaturalización y precipitación de proteínas son de

importancia en métodos de separación y se explican por efecto de calor o de ácidos sobre la

actividad enzimática. Recuerde que los residuos de αaminoácidos tienen la presencia de un grupo

carboxílico y un grupo amino, más un radical por la cadena. (Lobo, 2018b, p.2)
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Objetivos

Reconocimiento por reacciones de color, típicas del enlace peptídico (biuret).

Probar la solubilidad de las proteínas variando las características del medio en que se hallan

disueltas.
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Capítulo 2

Marco Teórico

Las proteínas están constituidas por una veintena de aminoácidos unidos covalentemente en

una ordenación de cabeza cola mediante enlaces peptídicos (conocidas también como uniones

amídicas), o uniones peptídicas producidos por la eliminación de los elementos del agua entre el

grupo carbonilo del carboxílico del primer aminoácido y el grupo amino del otro aminoácido

formando macromolécula designadas como oligopéptidos o polipéptidos (proteínas).

(Lobo, 2018c, p.2)

El comportamiento de las sustancias proteicas frente a diversos solventes, como agua, no

pueden tomarse como único criterio de solubilidad, eficiencia y suficiente para agrupar, clasificar

y caracterizar a las proteínas y es así como en medio acuoso, variación de temperatura, presencia

de sales, efecto de acidez, pH permite, separar, caracterizar y clasificar a proteínas. (Lobo,

2018d, p.3)

(Diaz, 2016)
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Materiales y reactivos

Tubos de ensayo

Gradilla

Pipeta

Pinzas

Mechero

Vaso precipitado

Glicina

Tirosina

Leche

Huevo

Ninhidrina

Biuret

NaOH

Sulfato de cobre

HNO3
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Desarrollo del laboratorio

Cada reacción se hará con 2 ml de solución de prueba y problema, en forma simultánea para

comparación.

Reacción de Ninhidrina

En un tubo de ensayo, ponga 1 ml de solución proteica diluida. Agregue 0.5 ml de disolución

de ninhidrina y caliente suavemente hasta que se observe un cambio de color. La producción de

un color azul o rojizo-violeta indica que sí tiene aminoácido, recuerde que hay tonos de color

particulares para cada aminoácido.

Reacción de Biuret

A 3 ml de solución proteica y de problema adicione 1 ml de NaOH al 50% y dos gotas de

sulfato de cobre al 5%. Aprecie el color sin agitar. Positivo desde un azul intenso a violeta o

rosado.

Reacción Xantoproteica

A 1 ml de solución proteica diluida, agregue lentamente y agitando 1 ml de HNO3

concentrado. Caliente con precaución hasta que hierva suavemente. El color rojo amarillo o

precipitado blanco obtenido se convierte en naranja cuando se alcalinice. Deje enfriar y añada
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gota a gota, solución de NaOH al 40% hasta lograr alcalinizar. Anote el cambio de color. Si su

problema da igual al color que la clara de huevo, contiene tirosina o una proteína que contiene

éste aminoácido.

Reacción con acetato de plomo

A 2 ml de clara de huevo sin diluir, agregue 5 gotas de NaOH al 40% y haga hervir durante

dos minutos, agitando. Agregue 5 gotas de disolución de acetato de plomo. Anote el color del

precipitado que se forma. Repita el procedimiento con las otras y su problema, si obtiene el

mismo color, tiene algún aminoácido azufrado.

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Datos y resultados

Reacción de Ninhidrina

Tabla1. Reacción de Ninhidrina.

Reacción de Ninhidrina

Leche pura Se colocó de color morado al calentar suavemente

leche diluida Se colocó de color morados claro al ser calentado suavemente

Clara de huevo Quedo líquido en la parte superior con color morado indicando que tiene
pura aminoácido y en la parte inferior del tubo hubo una coagulación total.

Clara de huevo Se tornó de color violeta con un precipitado blanco al ser calentado y
diluida empezó a ebullir

Quedo de color morado en la parte superior y con un precipitado

Glicina transparente sin ser calentado; cuando lo calentamos suavemente tomo un
color azul oscuro

Tirosina Sin calentar su color era transparente, luego de calentarlo empezó a ebullir
y se colocó morado
Fuente: Autores.

Reacción de Biuret

Tabla 2. Reacción de Biuret.

Reacción de Biuret

Leche pura Hubo una interfase y en la parte superior quedo de color azul claro con un
toque morado

leche diluida Hubo una interfase, quedo de color azul claro con un toque de morado en
la parte superior
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Clara de huevo Quedo morado oscuro en la parte superior, en medio de la muestra dio un
pura tono azul oscuro y en la parte inferior quedo amarillo claro y presento 3
fases

Clara de huevo Quedo morado en la parte superior, en el medio dio un color azul oscuro y
diluida en la parte inferior quedo transparente, se presentaron 3 fases

Glicina Quedo de color azul claro en la parte inferior de la muestra y en la parte

superior quedo un poco más transparente

Tirosina Quedo de color azul claro

Fuente: Autores.

Reacción Xantoproteica.

Tabla 3. Reacción Xantoproteica.

Reacción Xantoproteica

Leche pura al agregar NHO3 empezó a ebullecer al ser calentado y desprendió gases
de color amarillo. Al agregar NaOH no reacciono

leche diluida Al agregar NHO3 se colocó amarillo claro, al calentar empezó a ebullecer
y desprender gases. Al agregar NaOH no cambio

Clara de huevo Al agregarle NHO3 la muestra se torno en dos fases, el precipitado se

pura coagulo totalmente y el color con el que quedo fue amarillo con blanco, en
la parte superior quedo una fase liquida transparente. Al calentar empezó a
ebullecer y a aumentar de longitud quedando vacío en la parte inferior del
tubo. Donde iban cayendo las gotas de NaOH se colocó naranja, es decir
se alcalinizo

Clara de huevo Quedo una coagulación total al agregarle NHO3 y se torno amarillo, hubo
diluida una fase liquida totalmente. En la parte del medio de la muestra quedaron
burbujas acumuladas y en la parte superior quedo coagulado. Se colocó
naranja al agregarle NaOH quedo liquido en la parte inferior y en la parte
superior una coagulación.

Glicina Era transparente. Al agregar NHO3 y empezar a calentar empezó a

ebullecer y desprender gases, pero no cambio de color, las paredes del
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tubo se empañaron y tomo un color naranja. Al agregar NaOH no cambio

Tirosina Era de color blanco y se colocó amarillo sin calentar. Al agregar NHO3 y
empezar a calentar comenzó a ebullecer y desprender un gas color naranja.
Al agregar NaOH no cambio
Fuente: Autores.

Reacción con acetato de plomo.

Tabla 4. Reacción con acetato de plomo.

Reacción con acetato de plomo

Leche pura El color que se obtuvo fue un amarillo opaco

leche diluida Quedo de color amarillo opaco

Clara de huevo Hubo una coagulación, en la parte superior quedo de color marrón y en la
pura parte inferior color blanco

Clara de huevo El color que tomo fue un café oscuro con precipitado café
diluida

Glicina Se colocó de color morado claro y quedo con precipitado blanco

Tirosina Se colocó de color rosado claro con precipitado rosado

Fuente: Autores.

Tabla 5. Resúmenes de las reacciones.

Reacción Observación Presencia
Coloración Aminoácido/proteína
Ninhidrina Se forma un color Todos los aminoácidos y proteínas que
púrpura contienen -NH2, a excepción de la
prolina e hidroxiprolina.

Biuret Se forma un color violeta Todas las proteínas (no A.A.) ya que
necesita al menos 2 enlaces peptídicos.
Aminoácidos y proteínas que
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Xantoproteica Formación de un color contienen grupos aromáticos o

amarillo. derivados del benceno

Con acetato de Formación de precipitado Aminoácidos con azufre

plomo color gris o negro
Fuente: Autores.
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Cuestionario

¿Cuál es el posible aminoácido que contiene su muestra?

El posible aminoácido de la muestra es la albumina con el agua y la lactoalbúmina con el

agua puesto que la solubilidad de las proteínas es sensible a la composición y al PH del medio,

así mismo las proteínas presentan comportamiento de electrolitos simples en solución por lo que

son susceptibles a la concentración iónica del medio. Encontramos alfa-aminoácidos el cual es

un grupo amino que está unido al carbón adyacente al carboxílico.

¿A qué se debe el nombre reactivo de Biuret?

La reacción debe su nombre al Biuret, una molécula formada a partir de dos de urea

(H2N-CO-NH-CO-NH2), que es la más sencilla que da positiva esta reacción. La presencia de

proteínas en una mezcla se puede determinar mediante la reacción del Biuret.

Da positiva esta reacción en todos los compuestos que tengan dos o más enlaces peptídicos

consecutivos en sus moléculas. (Barragan,2014)

¿Cuáles factores causan una proteína desnaturalizada?

Temperatura- temperatura optima

PH- concepto PH optimo

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Sustancias químicas

Anote las estructuras de los aminoácidos identificados en la muestra problema

Figura 5. Estructura de la albumina Figura 6. Estructura de la lacto albumina

(Hernández, 2016) (Ramos, 2017)

Figura 7. Estructura de la alanina Figura 8. Estructura de la treonina

(Fernández, 2006) (Fernández, 2006)

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Figura 9. Estructura de la metionina figura 10. Estructura del triptófano

(Fernández, 2006) (Fernández, 2006)

Figura 11. Estructura de fenilalanina figura 12. Estructura de la tirosina

(Fernández, 2006) (Fernández, 2006)

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Figura 13. Estructura de la leucina Figura 14. Estructura de la lisina

(Fernández, 2006) (Fernández, 2006)

Figura 15. Estructura de la histidina Figura 16. Estructura de isoleucina

(Fernández, 2006) (Fernández, 2006)

Figura 17. Estructura de la glicina Figura 18. Estructura de la valina

(Fernández, 2006) (Fernández, 2006)

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Conclusiones

En este laboratorio hicimos cinco experiencias en las cuales utilizamos como muestra clara de

huevo, leche, glicina y tirosina, en donde pudimos reconocer el enlace peptídico o uniones

amidicas, por reacciones de color en las muestras. Además, se comprobó la solubilidad de las

proteínas variando las características del medio en que se hallan disueltas. En la reacción de

ninhidrina reconocimos la presencia en las muestras del grupo alfa-amino de los aminoácidos,

porque al calentarse las muestras se tornaron color morado. En la reacción de Biuret

identificamos en las muestras péptidos y proteínas, porque al agregarle a las muestras hidróxido

de sodio y sulfato de cobre, cambiaron su color desde un azul intenso, hasta morado (la

intensidad de este color depende de la concentración de proteínas). En la reacción Xantoproteica

comprobamos la presencia de tirosina.

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Apéndices

Imagen 1: Reacción de Ninhidrina

Fuente: Autores

Imagen 2: Reacción de Biuret

Fuente: Autores
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Imagen 3: Reacción de Xantoproteica

Fuente: Autores

Imagen 4: Reaccion con acetato de plomo

Fuente : Autores
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Bibliografía

Diaz, D. O. (11 de 05 de 2016). aprende en linea. Recuperado el 02 de 2019, de compuestos

organicos:
http://aprendeenlinea.udea.edu.co/lms/ocw/mod/page/view.php?id=251&inpopup=1
Lobo, R. J. (2019a, p.1). Univirtual ufpso. Recuperado el 24 de 2019, de
https://uvirtual.ufpso.edu.co/pluginfile.php/27806/mod_resource/content/6/Lab.%20Bioq
ca%20reconocimiento%20de%20grupos%20funcionales.pdf
Lobo, R. J. (2019b, p.2). Univirtual ufpso. Recuperado el 24 de 2019, de
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https://uvirtual.ufpso.edu.co/pluginfile.php/27806/mod_resource/content/6/Lab.%20Bioq
ca%20reconocimiento%20de%20grupos%20funcionales.pd