TP N° 2

2019
Detección de antígenos de 8 virus
respiratorios mediante IFD

Dra. Victoria B. ayala P.

 La confirmación etiológica de la IRA, no es necesaria
en la mayoría de los pacientes que se tratan en forma
ambulatoria y evolucionan favorablemente.

 Es necesaria cuando:

el paciente que requieren internación.

el paciente recibió terapia antibiótica y no mejora.
al comienzo de un brote, alerta epidemiológica.
a todo niño menor de 5 años obstruido.
 Paciente  de 5 años:
 Con hasta 7 días de evolución: IF/PCR
 Con más de 7 días de evolución: PCR

 Paciente  de 5 años:
 Con hasta 3 días de evolución: IF/PCR
 Con más de 3 días de evolución: PCR
1) Verificar de tener el material de protección
individual (barbijo, antiparras, guantes,
guardapolvo)
2) Tener todo el material necesario para la
extracción
3) Solicitarle al paciente que se sople la nariz
con la servilleta o pañuelo. Descartar en bolsa
roja

Respiradores aprobados por la FDA: N95

por ej los 3MTM Nº 8612F, 8670F
 aluminio flexible

plástico

Torunda

Dacrón: poliester
Nylon: poliamida
Rayon: policelulosa
Hisopado orofaríngeo
 Colocar los hisopos en un tubo conteniendo
PBS 1X pH 7,2 o bien medio de transporte en
el caso de intentar aislamiento viral.

Procesamiento inmediato

Derivación: enviar refrigerado en

triple envase dentro de las 24 hs.
 Procesamiento de la muestra
Guardar para
1 min biología
molecular o
aislamiento

1200 rpm
10 min
Lavar con PBS
1X
descartar
 Dejar secar (30
min aprox)
 Acetona 4 °C 20
min
 Corroborar si la
cantidad de
células es la
adecuada
 Inmunofluorescencia
Respiratory Virus Panel I DFA

a-RSV a-FluA a-FluB a-PIV1 a-PIV2 a-PIV3 a-ADV a-hMPV

Azul de Azul de Azul de Azul de Azul de Azul de Azul de Azul de
Evans Evans Evans Evans Evans Evans Evans Evans

*Cámara húmeda
En paralelo
37°C 30 min
procesar
*Lavar con PBS
controles
*Montar
• La nasofaringe se halla parcialmente recubierta por un epitelio escamoso
estratificado, que cambia a un epitelio columnar ciliado cerca de las cavidades
nasales.
• La cavidad nasal se encuentra cubierta por epitelio cilíndrico ciliado
pseudoestratificado
• La orofaringe se encuentra cubierta por epitelio escamoso estratificado.
 Células escamosas

Linfocito

Células cilíndricas (columnar)

Improntas obtenidas por alumnos de Virología Clínica 2016
 muestra

8 cél/campo 40x
20 células en el pocillo Adecuada inadecuada

Volver a
procesar o
positiva negativa
pedir nueva
muestra

2 cél con fluorescencia Ausencia de

específica en ese pocillo fluorescencia
específica
La fluorescencia se observa
en el citoplasma asociado a
los sincitios. Es de tipo
puntiforme con inclusiones
pequeñas.

Control positivo RSV

Niña de 4
2014 meses
Laboratorio 2009
IACA Hospital
Interzonal Dr.
José Penna
hMPV y RSV pertenecen a la familia: paramixovirus y subfamilia pneumovirinae

Control positivo, conteniendo células

LLC-MK2 infectadas con hMPV,
mostrando caraterísticas de
fluorescencia verde granular y
citoplasmática (× 400).
 Control positivo PIV 1 Control positivo PIV 2 Control positivo PIV 3

La fluorescencia es citoplasmática con inclusiones irregulares puntiformes

Niño 2014
Hosp. Interzonal Dr. J.
Penna
 Control Control
positivo positivo
Flu A Flu B

Influenza A y B
La fluorescencia es nuclear,
Adulto
citoplasmática o ambas.
Hospital
La marcación nuclear es
Interzonal
uniformemente brillante.
Dr. J. Penna
La marcación citoplasmática es
2010
puntiforme con inclusiones grandes.
 Control positivo
Adenovirus

La fluorescencia es nuclear, citoplasmática o ambas.

La marcación nuclear es uniformemente brillante.
La marcación citoplasmática es generalmente puntiforme.
 Examinarlos controles positivos para
reconocer la fluorescencia específica

 Laobservación de los controles

negativos ayuda a reconocer la
fluorescencia inespecífica
 Adenovirus
Influenza B
Influenza A
RSV
negativo

metapneumovirus

Parainfluenza 3

Parainfluenza 2

Parainfluenza 1
 Adenovirus
Influenza B
Influenza A
RSV
negativo

Metapneumovirus

Parainfluenza 3

Parainfluenza 2

Parainfluenza 1
Paciente: Laura Perez
Médico: Dr. José Gonzalez
Fecha:10 de julio 2009

Material examinado: Hisopado nasofaríngeo

Método: Inmunofluorescencia directa Respiratory Panel DFA Kit de 8 virus

Resultado: positivo para RSV

Observaciones:

firma