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Radicación: LQF-1818-19

VALIDACIÓN DEL MÉTODO ANALÍTICO PARA

VALORACIÓN DE CLOTRIMAZOL POR HPLC EN
CLOTRIMAZOL 1% (PITOXSKIN CREMA TÓPICA)

CLIENTE: BIOQUÍMICO PHARMA

ETAPA NOMBRE / CARGO FIRMA FECHA

Cindy Palacio
ELABORADO POR:
Analista de laboratorio

Carlos Contreras
REVISADO POR:
Jefe de Laboratorio

Carlos Contreras
APROBADO POR:
Jefe de Laboratorio

Cra. 60 # 94 B - 23. Tel: 6910852 – 6910853-2569310 Cel: 313 2611280

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1. OBJETIVO

Obtener el soporte documental de la validación del método analítico para la identificación y

valoración del principio activo Clotrimazol por HPLC en el producto Clotrimazol 1% crema
tópica (PITOXSKIN), para demostrar que es adecuado para el uso previsto.

2. ALCANCE

La validación aplica para la identificación, valoración del principio activo Clotrimazol por
HPLC en el producto Clotrimazol 1% crema tópica (PITOXSKIN).

3. DEFINICIONES

GR: grado reactivo

4. RESPONSABILIDADES

 Los analistas de laboratorio quienes se encargan de la elaboración del protocolo y de

llevar a cabo los análisis, digitar los resultados en las hojas de cálculos y evaluar los
resultados de cada prueba de la validación y/o verificación del método analítico.
 El jefe de laboratorio quien se encarga de la revisión y aprobación del protocolo,
supervisión de los análisis de validación y/o verificación del método analítico,
evaluación y aprobación de los resultados obtenidos.
 El asistente de transcripción quien se encarga de verificar la digitación de los datos
en las hojas de cálculo y la elaboración del informe de la validación y/o verificación.
 El coordinador de transcripción quien se encarga de la revisión de la transcripción de
los datos e informe de la validación y/o verificación, junto con la validación de las
hojas de cálculo.
 El director técnico quien se encarga de la aprobación de la validación y/o verificación
del método analítico.

5. EQUIPOS, MATERIALES, REACTIVOS Y ESTÁNDARES

5.1. EQUIPOS
Informe de calificación y/o
Equipo Código
calibración
Cromatógrafo Líquido VWR Hitachi Elite EL-031 18-HPLC-484
Cromatógrafo Líquido Merck/Hitachi Lachrom EL-038 18-HPLC-473
Potenciómetro OHAUS EL-083 LMP-2694/TER-0289
Balanza Analítica Semi-micro Precisa EL-056 ALB-1373-18
Balanza Analítica OHAUS Adventurer AR2140 EL-032 13667LM
Balanza Analítica OHAUS PIONEER PA-214 EL-043 13668LM
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Ultrasonido EL-012 16-05-18

Plancha de agitación EL-007 15-05-18

5.2 MATERIAL NECESARIO:

 Balones aforados de 20, 25, 50, 100, 200 y 1000 mL

 Vasos de precipitado de 250 mL
 Pipetas aforadas de 2, 3, 4, 5, 6 Y 7 mL
 Probetas graduadas de 250, 500 y 1000 mL

5.3 REACTIVOS:

 Agua grado HPLC

 Acetonitrilo HPLC
 Ácido Clorhídrico 37% G.R
 Hidróxido de Sodio 1N G.R
 Peróxido de Hidrógeno 30 % G.R
 Fosfato bibásico de potasio G.R

5.5 ESTÁNDARES

NOMBRE LOTE POTENCIA F.V

Clotrimazol LRAB9112 99,7% 12-2020

Clotrimazol CRA R02240 100% OK

5.6. MATERIAS PRIMAS

NOMBRE LOTE POTENCIA F.V

Clotrimazol M161205 99,4% 11-2019

5.7. PRODUCTOS Y/O PLACEBO

NOMBRE LOTE F.V

Placebo de PITOXSKIN (Clotrimazol 1% Crema Tópica) No aplica No aplica

PITOXSKIN (Clotrimazol 1% Crema Tópica) M01019 01-2022

6. PRECAUCIONES

 Para la ejecución de las actividades aquí descritas, el personal debe utilizar

elementos y equipos de protección personal y general requeridos.
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 El personal debe realizar el manejo de los residuos generados durante los análisis
realizados según el procedimiento LA-011 vigente: Manejo de Residuos en el
laboratorio.

7. ESPECIFICACIONES PARA LOS PARÁMETROS EVALUADOS

PARÁMETRO CRITERIO DE ACEPTACIÓN

Platos teóricos (N): Mínimo 1000
Resolución (R) si aplica ≥ 2,0
Aptitud del Sistema
Asimetría (T) Máximo 2,0
%DER ≤ 2,0
El placebo no presenta interferencia en la respuesta del analito
Ni la fase móvil, ni el blanco presentan interferencia en la respuesta
Selectividad del analito
El porcentaje de recuperación del analito + placebo está muy próximo
al 100% y en ningún caso fuera del 97% y 103%

Especificidad para la Si se producen compuestos de degradación éstos no interfieren en la

Estabilidad respuesta del analito

Coeficiente de Correlación (r) > 0,99

Coeficiente de Determinación (r²) > 0,98
%DER del Factor de Respuesta < 5%
Test para la pendiente: (verifica que m≠0) Tc>>Tt, Tt (0,05;n-2)
Linealidad del Sistema y
Método Test para el intercepto (verifica que Ci≈0) Tc<Tt ,Tt (0,05;n-2)
Test para el coeficiente de correlación (verifica que r≠0),Tc>>Tt, Tt
(0,05;n-2)
Análisis de varianza (verifica que la regresión es representativa)
Fc>>Ft, Ft (0,05;1,n-k)
Análisis de varianza (verifica que falta de ajuste no es representativo)
Fc<Ft, Ft (0,05;1,n-k)
*Test de Cochran: G exp < G tablas
Exactitud
(*debe cumplir una de las *Test de Student: t exp < t tablas
dos pruebas)
Porcentaje de recuperación (97,0 % - 103,0%)
Precisión del Sistema Desviación Estándar Relativa (%DER) ≤ 2%
Repetibilidad Desviación Estándar Relativa (%DER) ≤ 2%
Precisión Intermedia Desviación Estándar Relativa (%DER) ≤ 2%
Estabilidad de la Solución Desviación Estándar Relativa (%DER) ≤ 2%

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8. DESCRIPCIÓN DEL MÉTODO A UTILIZAR

 CONDICIONES CROMATOGRÁFICAS. (Basadas la monografía para Clotrimazol

Crema USP 41)

Cromatógrafo Líquido VWR Hitachi Elite (EL-031)

Equipo:
Cromatógrafo Líquido Merck/Hitachi Lachrom (EL-038)
Columna: Agilent ZORBAX Eclipse C18, 250 x 4,6 mm 5 um Nº (112)
Longitud de onda: 254 nm
Flujo: 1,5 mL/min
Volumen de inyección: 25 µL
Temperatura de la Columna: Ambiente
Temperatura de las muestras: Ambiente
4,5 minutos +/- 1 minuto Clotrimazol
Tiempo de retención:
6,5 minutos +/- 1 minuto Clotrimazol CRA
Solución Aptitud del Sistema
R: Mínimo 2,0 entre Clotrimazol y Clotrimazol CRA
Solución Estándar
Aptitud del sistema:
N: Mínimo 1000
T: Máximo 2,0
%DER: Máximo 2,0
.
DILUYENTE:

Etanol

FASE MÓVIL

1. Acetonitrilo 750
2. Solución amortiguadora 250

PREPARACIÓN DE LA SOLUCIÓN AMORTIGUADORA

Pesar 4,35 g de fosfato bibásico de potasio (K2HPO4), transferir aun balón aforado de 1 L,
adicionar 800 mL de agua, una vez disuelto completar a volumen con agua. Filtrar por
membrana de 0,45 micras

PREPARACIÓN DE LA FASE MÓVIL

Medir por separado 750 mL de Acetonitrilo y 250 mL de solución amortiguadora,

homogeneizar, filtrar por membrana de 0,45 micras y desgasificar.

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PREPARACIÓN DE LA SOLUCIÓN ESTÁNDAR

Pesar aproximadamente 10,0 mg de estándar de Clotrimazol, transferir cuantitativamente a

un balón aforado de 20 mL, adicionar 10 mL de diluyente y someter a ultrasonido por 15
minutos o hasta disolver, enfriar, completar a volumen con diluyente y homogeneizar. Filtrar
a través de membrana 0,45 µm.

Concentración final del estándar: 0,5 mg/mL de Clotrimazol.

PREPARACIÓN DE LA SOLUCIÓN DE CLOTRIMAZOL COMPUESTO RELACIONADO A

(CRA)

Pesar aproximadamente 5 mg de estándar de Clotrimazol CRA, transferir cuantitativamente

a un balón aforado de 25 mL, adicionar 15 mL de diluyente y someter a ultrasonido por 15
minutos o hasta disolver, enfriar, completar a volumen con diluyente y homogeneizar.

PREPARACIÓN DE LA SOLUCIÓN DE APTITUD DEL SISTEMA

Transferir 5 mL de la solución de Clotrimazol CRA y 2 mL de la solución estándar a un balón

aforado de 10 mL, completar a volumen con diluyente y homogeneizar.

Concentración final: 0,1 mg/mL de Clotrimazol CRA y 0,1 mg/mL de Clotrimazol.

PREPARACIÓN DE LAS MUESTRAS PARA VALORACIÓN

Mezclar no menos de 5 tubos de Clotrimazol Crema Tópica y pesar aproximadamente 2,5 g

(equivalente a 25 mg de Clotrimazol), transferir a un balón aforado de 50 mL, adicionar 25
mL de diluyente y someter a ultrasonido con calentamiento (50 ºC) por 50 minutos, enfriar,
completar a volumen con diluyente y homogeneizar. Centrifugar y filtrar a través de
membrana 0,45 µm.

Concentración final: 0,5 mg/mL de Clotrimazol.

9. METODOLOGÍA

Para el desarrollo de las pruebas de la verificación se sigue lo descrito en el numeral 6.2.3

“Metodología General para la validación” del procedimiento LA-013 “Validación,
revalidación y verificación de métodos analíticos”. A continuación, se aclara la prueba
de precisión intermedia, estabilidad de la solución y desafió del método.

Precisión intermedia

Cada analista en el día correspondiente (día 1 y día 2) debe preparar dos muestras
independientes del producto terminado y realizar 3 inyecciones por cada muestra.

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Estabilidad de la solución

Evaluar la estabilidad de una solución de analito y una solución de analito mas placebo
realizando 2 inyecciones de cada muestra en los tiempos 0, 12 y 24 h.

Desafió del método

Preparar una solución de aptitud del sistema, una solución estándar al 100% de la
concentración especificada y dos muestras independientes de producto; realizar el análisis
de valoración de las muestras en dos equipos y con dos columnas diferentes, haciendo 1
lectura de aptitud, 5 lecturas de estándar y dos de cada muestra, además de las respectivas
lecturas de control.

Nota: Preparar las soluciones de acuerdo a los cálculos establecidos en la hoja de trabajo
de la validación. El analista al terminar la corrida de cada una de las pruebas ingresa los
datos en la hoja de cálculo para verificar que se cumple con los criterios de aceptación.

10. VIGENCIA

La metodología analítica se mantendrá vigente siempre y cuando no exista modificación de

la fórmula cualicuantitativa del producto y se mantengan las condiciones cromatográficas en
la USP Vigente.
.
11. BIBLIOGRAFÍA

 Monografía para Clotrimazol Crema USP 41.

 Procedimiento LA-013 “Validación, revalidación y verificación de métodos analíticos”
 Validación de métodos analíticos. Asociación Española de Farmacéuticos de la
Industria. AEFI 2001.
 The fitness for purpose of analitycal methods, Eurachem. Second edition 2014
 USP Capítulos <621> y <1225>

 ICH Q2(R1) Step4, Validation of analytical Procedures-Text and Methodology

 GALENO, TECNYCA LTDA., Colombia, software, manual del usuario.

 Resolución 3619 de 2013. Capítulo 16.

 NTC ISO-IEC 17025

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