UNIVERSIDAD TÉCNICA “LUIS VARGAS TORRES”

FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS Y AMBIENTALES

INFORME DE PRÁCTICA DE LABORATORIO

NOMBRE DE PRÁCTICA: FECHA:
Acción de la Enzima catalaza y Acción de la enzima Ejecución: 04-07-2019
amilasa salival y sacarasa
Entrega: 11 -07-2019

INTEGRANTES DE GRUPO N° 4 ASIGNATURA:

Miguel Bravo Bioquímica
Lilibeth Chila
Stefania Chila
Sara Rezabala
Yelitza González
CARRERA: Ingeniería Forestal NIVEL 3ero/ PARALELO “A”
CÓDIGO: L-001
DOCENTE: Ing. Dolores Andrade Benalcázar
LABORATORIO: Biotetecnología

RESUMEN
ACCIÓN DE LA ENZIMA CATALASA, ACCION DE LA ENZIMA AMILASA SALIVAL Y
SACARASA
1.- Hidrólisis enzimática del almidón por la saliva: Acción digestiva de la amilasa salivar.
Primero se hace un tubo patrón con 2 ml. de una disolución de almidón al 2 % y unas gotas de
disolución de yodo (lugol). Observar el resultado. Después se calienta suavemente el tubo hasta que
la mezcla pierda el color. Dejar enfriar el tubo bajo el agua del grifo y esperar unos minutos. Anotar
lo sucedido.Colocar en un segundo tubo 2 ml. de la disolución de almidón y una cierta cantidad de
saliva, mezclar bien la saliva con la disolución y calentar muy suavemente durante unos segundos.
Añadir unas gotas de lugol. Anotar los resultados y dar una explicación a lo ocurrido.
2.- Reconocimiento de la enzima catalasa
La catalasa se encuentra tanto en tejidos vegetales (patata, zanahoria, lechuga, etc.) como en tejidos
animales (carne, pescado, etc.) produciendo la siguiente reacción química:
H2O2 (agua oxigenada) ==== H2O + ½ O2 (gaseoso)
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Es decir, la enzima descompone el peróxido de hidrógeno o agua oxigenada en agua y oxígeno

gaseoso, que se desprenderá en forma de burbujas en un medio acuoso.
Se anota la temperatura ambiente, que se toma como temperatura inicial de la reacción, y después se
va anotando las variaciones de temperatura que se producen en el interior del calorímetro cada
treinta segundos durante un período de cinco minutos. Hacer la gráfica de la reacción y explicar los
resultados.
RESULTADOS DEL APRENDIZAJE
Como resultado obtuvimos reacciones con azúcar, saliva y otros ingredientes que nos permitieron
realizar este proceso de forma expontanea para nuestro desempeño en conocer las diferentes partes de
reacciones químicas ya que fue muy importante identificar este tipo de reacciones.
 Intensidad
Carne color Rojo 9 ml
Pimiento color verde 5 ml
Zanahoria color celeste 7 ml
 Tiempo
Carne color rojo 6 min
Pimiento color verde 3 min
Zanahoria color celeste 3 min
INTRODUCCIÓN
En el organismo existe un sistema de protección antioxidante formado por enzimas y compuestos de
bajo peso molecular. Una de las enzimas que intervienen en la protección y, en el mantenimiento del
balance oxidante/antioxidante es la catalasa (CAT). La catalasa se encuentra en las células de tejidos
animales y vegetales. La función en los tejidos es necesaria porque durante el metabolismo celular, se
forma una molécula tóxica que es el
PER-OXIDO DE HIDROGENO, H2O2 (agua oxigenada), la catalasa, lo descompone en agua y en
oxígeno. La reacción de la catalasa sobre el H2O2, es la siguiente.

Mediante esta experiencia, se comprueba la actividad de la enzima amilasa o ptialina, presente en la

saliva. Esta enzima actúa sobre el polisacárido almidón, hidrolizando el enlace O-glicosídico, por lo
que el almidón se terminará por transformar en unidades de glucosa. La amilasa, (más propiamente
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amilasas, dado que existen varias) es una enzima hidrolasa que tiene la función de catalizar la reacción
de hidrólisis de los enlaces 1-4 entre las unidades de glucosa al digerir el glucógeno y el almidón para
formar fragmentos de glucosa (dextrinas, maltosa) y glucosa libre. En los animales se produce
principalmente en las glándulas salivales (sobre todo en las glándulas parótidas) y en el páncreas.
Tiene actividad enzimática a un pH de 7. Cuando una de estas glándulas se inflama, como en la
pancreatitis, aumenta la producción de amilasa y aparece elevado su nivel en sangre (amilasemia). El
pH óptimo de la amilasa salival es de 6.9. Prácticamente todos los seres vivos disponen de amilasas.

La sacarasa es una enzima específica de la sacarosa. La sacarasa, conocida también como invertasa,
es una enzima que convierte la sacarosa (azúcar común) en glucosa y fructosa. Está presente en el
intestino delgado, en el borde del cepillo de las vellosidades intestinales.
MARCO TEÓRICO
Enzimas:
- ¿Qué son?

Las enzimas son proteínas “especialistas” y controlan TODAS las reacciones químicas de nuestro
cuerpo. Hay enzimas en todo lo que está vivo. Se dice que son catalizadores, porque cada reacción
química necesita una enzima para que se realice, es decir, todo lo que se transforma lo hace gracias a
una enzima. Cada enzima actúa sobre una sustancia concreta, como una llave y una cerradura.

- ¿Cómo actúan?

Actúan como catalizadores en el metabolismo de los seres vivos. Con su acción, regulan la velocidad
de muchas reacciones químicas implicadas en este proceso.
- ¿Qué factores afectan a su actividad?

• Efecto del pH
• Temperatura
• Concentración de sustrato

-¿Qué es apoenzima?
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Es la parte proteica de una holoenzíma, es decir, una enzima que no puede llevar a cabo su acción
catalítica desprovista de los cofactores necesarios, ya sean iones metálicos (Fe, Cu, Mg, etc.) u
orgánicos, que a su vez puede ser una coenzima o un grupo prostético, dependiendo de la fuerza de
sus enlaces con la apoenzima. La apoenzima, es por tanto, catalíticamente inactiva, hasta que se le
une el cofactor adecuado.

-¿Que es holoenzíma?

Es una enzima que está formada por una apoenzima y un cofactor, que puede ser un ion o una molécula
orgánica compleja unida (grupo prostético) o no (una coenzima). En resumidas cuentas, es una enzima
completa y activada catalíticamente.

- ¿Qué es zimógeno?

Es un precursor enzimático inactivo, es decir, no cataliza ninguna reacción como hacen las enzimas.
Para activarse, necesita de un cambio bioquímico en su estructura que le lleve a conformar un centro
activo donde pueda realizar la catálisis. En ese momento, el zimógeno pasa a ser una enzima activa.

Enzima catalasa:
- ¿Qué reacción cataliza?

Cataliza la reacción de descomposición del peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno

- ¿Dónde se encuentra?

Se encuentra en casi todos los organismos vivos en el planeta que están expuestos al oxígeno.

- ¿Por qué es tan importante?

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Porque puede cambiar 40 millones de moléculas de peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno en sólo
un segundo.

Amilasa salival.

- ¿Qué reacción cataliza?

Cataliza la reacción de hidrólisis de los enlaces 1-4 entre las unidades de glucosa al digerir el
glucógeno y el almidón para formar fragmentos de glucosa (dextrinas, maltosa) y glucosa libre.

- ¿Dónde se encuentra?

La enzima α-amilasa no se localiza solamente en la saliva, también se encuentra en el páncreas,

llamándose por tanto “α-amilasa pancreática”.

- ¿Por qué es tan importante?

Desempeña un papel importante en la colonización y metabolismo de las bacterias que conducen a la

formación de la placa.
¿Qué es la amilasa salival?
La amilasa salival, denominada también ptialina o tialina, es la principal enzima de la saliva, que
hidrolasa que tiene la función de digerir el glucógeno y el almidón para formar azúcares simples.
¿Dónde se forma?
La enzima α-amilasa no se localiza solamente en la saliva, también se encuentra en el páncreas,
llamándose por tanto “α-amilasa pancreática”.
¿Quiénes la producen?
En los animales se produce principalmente en las glándulas salivales (sobre todo en las glándulas
parótidas) y en el páncreas.
¿Cómo actúa?
Actúan a lo largo de cualquier punto de la cadena de los carbohidratos, descomponiéndolos en
dextrina desde la amilopectina.
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¿Cuánto de saliva se produce?

La cantidad de saliva que producimos diariamente se la debemos a nuestras glándulas salivales, las
cuales se ubican dentro de cada mejilla, en la parte inferior de la boca y en el interior de la cavidad
mandibular. Éstas pueden producir entre uno o dos litros de saliva por día.
Componentes de la saliva:
Agua: representa más del 99 %.56 Permite que los alimentos se disuelvan y se pueda percibir su sabor
a través del sentido del gusto. Anulándose este si el alimento no se disuelve correctamente.
Iones cloruro: activan la amilasa salival o ptialina.
Bicarbonato: neutralizan el pH de los alimentos ácidos y de la corrosión bacteriana.
Moco: El contenido de mucina, glicoproteína fundamental de la saliva, produce la viscosidad
necesaria para funciones lubricantes y de formación del bolo alimenticio que facilita la deglución a lo
largo del tubo digestivo, sin dañarlo.7
Lisozima: es una sustancia antimicrobiana que destruye las bacterias contenidas en los alimentos,
protegiendo en parte los dientes de la caries y de las infecciones.
Enzimas: como la ptialina, que es una amilasa que hidroliza el almidón parcialmente en la boca,
comenzando la digestión de los hidratos de carbono. La lipasa lingual inicia también la digestión de
grasas.7
Estaterina: con un extremo amino terminal muy ácido, que inhibe la precipitación de fosfato cálcico
al unirse a los cristales de hidroxiapatita. Además, también tiene función antibacteriana y antifúngica.
Otras sustancias: la saliva contiene también inmunoglobulinas específicas, transferrina y lactoferrina.
En 2006 investigadores franceses del Instituto Pasteur identificaron una sustancia en la saliva humana
que llamaron Opiorfina, similar a la encontrada en ratas y vacas, que es hasta seis veces más potente
que la morfina para calmar el dolor.89
Calcio: la saliva está saturada de Ca2+, con lo que se evita que los dientes lo pierdan y ayuda a digerir
el alimento.
Tiocianato: protege los dientes de las bacterias.
¿Qué es la sacarasa?
La sacarasa, conocida también como invertasa, es una enzima que convierte la sacarosa (azúcar
común) en glucosa y fructosa. Está presente en el intestino delgado, en el borde del cepillo de las
vellosidades intestinales.
¿Dónde se encuentra?
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Está presente en el intestino delgado, en el borde del cepillo de las vellosidades intestinales.
¿Cómo actúa?
Entre los sustratos sobre los que actúa, el más significativo es la sacarosa, de ahí que la enzima se
conozca también, como ya se ha señalado, con el nombre de sacarasa.
¿Cuáles son sus componentes?
Glucosa
Fructosa
¿Qué produce?
Productos de la reacción son conocidos como "azúcares invertidos"
¿Qué es especificidad enzimática?
Es tanto del tipo de reacción que catalizan, como del sustrato involucrado en la reacción.
Tipos de especificidad:
La Especificidad Óptica
La Especificidad del Grupo
¿Qué es Alosterismo?
Es un modo de regulación de las enzimas por el que la unión de una molécula en una ubicación (sitio
alostérico) modifica las condiciones de unión de otra molécula, en otra ubicación (sitio catalítico) de
la enzima, distante de la primera.

MATERIALES Y/O REACTIVOS

En esta práctica se requerirán los siguientes equipos, materiales y reactivos:

EQUIPOS MATERIALES REACTIVOS

 Cajas de Petri  Reactivo Fehling
 Tubos de ensayo  Solución de Lugol
 Cuchillo  Agua destilada
 Lámpara  Almidón (solución al
 Pinzas 2%)
 Gradilla  Solución de amilasa
 1 cucharadita de sal salival
 1 cucharadita de azúcar  Papel indicador de pH
 Bata blanca
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 Cuaderno del laboratorio  Trozo de carne de vaca

 Cinta para membretar de 3cm. de largo por
 Toallas desechables 3cm. de ancho.
 Trozo de hígado de vaca
de 3cm. de largo por
3cm. de ancho.
 1 papa
 1 zanahoria
 1 Cebolla
 1 Trozo de Sábila

FICHA TÉCNICA Y DE SEGURIDAD

NO INHALAR

CUIDADO AL MANIPULAR
SE PUEDE QUEBRAR
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PROCEDIMIENTO (MONTAJE Y EJECUCIÓN)

PROCESO DE LA ENZIMA CATALAZA
1. Organizar todos los tubos de ensayo con el material utilizado.
2. Colocar un trozo de carne, zanahoria, cebolla y papa en la caja de Petri.
3. Cortar una rodaja de rábano o papa o cualquier vegetal que tenga el grupo y colocar en la caja
de Petri.
4. Colocar 4 trocitos de carne en 2 tubos de ensayo. Hacer lo mismo con las demás muestras en
diferente tubo de ensayo. Colocar membrete A y B en cada tubo de una muestra.
5. Aplicarle a todas las muestras de los tubos A, 3 ml de agua oxigenada y a todos los tubos B 2
ml agua destilada y poner a ebullición.
6. Observar y anotar en la taba de reacciones, el tiempo en que empezó la reacción hasta que
termina el burbujeo, y la intensidad de burbujeo en cada muestra (hasta dónde se sube el nivel de
burbujas).
7. Elaborar esquemas de relación intensidad y tiempo
Influencia del pH en la acción de la catalasa de la papa
8. Macerar un trozo de papa en 15 ml de agua destilada y recoger el extracto
9. En el Tubo 1:
5 ml de extracto de papa + 2ml de ácido clorhídrico al 0.1N + 3ml de peróxido de hidrógeno al 3%
En el Tubo 2:
5 ml de extracto de papa + 2ml de solución de hidróxido de sodio + 3 ml de peróxido de hidrógeno al
3%
En el Tubo 3:
5 ml de Extracto de papa + 3 ml de Peróxido dehidrógeno al 3%
Realizar las anotaciones respectivas a la toma de pH con papel indicador y analizar los resultados
Influencia de la superficie de la muestra en su acción enzimática
10. Extraer una porción de hígado y macerar +3 ml de peróxido de hidrógeno.
11. Dividir en trozos un pedazo de hígado + 3 ml de peróxido de hidrógeno.
12. Comparar las reacciones de los dos montajes.
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PROCESO DE LA SACARASA
1. Poner en una gradilla cuatro tubos de ensayo, numerados del 1 al 4.
2. Añadir una pisca de azucar en la tara y pesar en la balanza 2gr .
3. A los tubos 3 y 4 añadir una pequeña cantidad de solución de amilasa salival.
Para la solución salival: Se miden 20 ml de agua destilada se embucha por 5 minutos y colectar en
erlen meyer de 50 ml. Para ayudar y formar más saliva pensar en un limón o en algo que apetezca
mucho comer. Es preferible que el donante, esté en ayunas... Así se favorece que forme más saliva.
4. Antes de la acción de la amilasa salival se harán las siguientes determinaciones:
- En el tubo 1, se realiza la Reacción de Fehling. Para comprobar la presencia de azúcares libres
(reductores).
- En el tubo 2, se realiza la Reacción de Lugol. Para comprobar la presencia de almidón.
- Los tubos 3 y 4 que contienen el almidón, al que le hemos echado la saliva, ponerlos en un
vaso de precipitados al baño María, controlando la temperatura del agua para que no hierva, ya que
lo que intentamos, es que la enzima de la saliva trabaje a unos 37° C. Dejarlo unos 15 minutos.
5. A continuación realizar las siguientes reacciones:
En el tubo número 3, realizar la Reacción de Fehling.
En el tubo número 4, realizar la Prueba del Lugol.
Sobre la sacarasa
Preparamos una solución de levadura (Shaccharomyces cereviceae) con 20ml de agua + 2.5g de
levadura + 0,1g de sulfato de amonio (se puede prescindir).
Dejar reposar por 15 minutos
Filtra el contenido (extracto de levadura)
Prepara los siguientes tubos:
Tubo 1
Preparar 1 cucharadita de sacarosa en 2 ml de agua destilada
Agitar
Tubo 2
Preparar 1 cucharadita de sacarosa en 2 ml de agua destilada + 2ml de extracto de levadura
Agitar
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Realiza una reacción Fehling en cada tubo con 2 ml

Escribe lo observado
Especificidad enzimática
Coloca tres tubos con solución de almidón, tres con solución de sacarosa y tres con agua oxigenada
Numéralos 1.2.3
A los tubos 1 coloca solución de amilasa salival
A los tubos 2 coloca extracto de levadura
A los tubos 3 coloca extracto de papa
Realiza la prueba de lugol con 1 ml de los tubos 1
Realiza la prueba de Fehling con 1 ml de los tubos 2
Y escribimos todo lo que observamos en ellos.
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RESULTADOS Y OBSERVACIONES

Muestras cortadas en trozos y una de ellas

ya cosinada.

Extracto de la papa en agua destilada.

Vegetales y carne con el reactivo Fehling.

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Observación de la reacciones de la
sacarasa, levadura y uva.

ANÁLISIS DE LOS RESULTADOS

Con esta experiencia los alumnos de 3º “A” de Ingeniería Forestal han puesto en práctica cada uno de
los pasos para una obtener la reacción de la catalaza que forman peróxidos donde se libera oxigeno
por eso ocurría el burbujeo en los tejido animales y vegetales, a la vez que nos ha permitido entender
mejor el concepto de enzima y los factores que afectan a su actividad. Nos motivo mucho y se Discutió
la búsqueda de información sobre los enzimas
En general y sobre la catalasa en particular.
Después de la puesta en común decidimos empezar estudiando la influencia de la concentración de
sustrato (peróxido de hidrógeno) sobre la velocidad enzimática de la catalasa (cantidad de oxígeno
desprendido).
Probamos la reacción del agua oxigenada con distintos vegetales e hicimos distintas variedades de
procesos para formar reacciones.
¿Qué factores creen que pueden influir en la actividad de la amilasa salival?
La influencia del pH y la influencia de los activadores e inhibidores
De acuerdo con la clasificación enzimática, ¿a qué clase pertenecen las enzimas utilizadas Amilasa
salival, Sacarasa, Catalasa?
Oxidorreductasas: catalizan reacciones de oxidorreducción o redox. Precisan la colaboración de las
coenzimas de oxidorreducción (NAD+, NADP+, FAD) que aceptan o ceden los electrones
correspondientes. Tras la acción catalítica, estas coenzimas quedan modificadas en su grado de
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oxidación, por lo que deben ser recicladas antes de volver a efectuar una nueva reacción catalítica.
Ejemplos: deshidrogenasas, peroxidasas.
¿Qué grupos químicos participan en el sitio activo de las enzimas?
El sitio activo de una enzima, también llamado centro activo, es la zona de la enzima a al cual se une
el sustrato, para que la reacción se produzca. Las enzimas son proteínas, Los enzimas poseen grupos
químicos ionizables (carboxilos -COOH; amino -NH2; tiol -SH; imidazol, etc.) en las cadenas
laterales de sus aminoácidos. Según el pH del medio, estos grupos pueden tener carga eléctrica
positiva, negativa o neutra. Como la conformación de las proteínas depende, en parte, de sus cargas
eléctricas, habrá un pH en el cual la conformación será la más adecuada para la actividad catalítica
¿Por qué se los identifica a las enzimas como catalizadores?
Las enzimas son proteínas que catalizan reacciones químicas en los seres vivos. Las enzimas son
catalizadores, es decir, sustancias que, sin consumirse en una reacción, aumentan notablemente su
velocidad. ... La sustancia sobre la que actúa la enzima se llama sustrato.
¿Pueden las enzimas actuar en diferentes tipos de sustratos?- ¿Por qué?
Si porque Cada enzima está hecha para una función específica. Las moléculas por sobre las cuales
trabaja una enzima se denominan sustratos y cada uno está ligado a una región del enzima, llamado
sitio activo. Existen dos formas o modelos en que puede actuar una enzima y la velocidad de la
reacción depende de ello. Si la zona activa de la enzima tiene la forma exacta para unirse a cierto
sustrato, la reacción es veloz.
Qué significa alta especificidad o especificidad absoluta y especificidad de grupo?
Cuando la enzima solo puede actuar sobre un tipo de substrato, se dice que la enzima muestra
especificidad absoluta para el substrato. Ese es el caso de la deshidrogenasa succinica, que es
específica para el succinato, o la L-glutamico deshidrogenasa, específica para el glutamato.
Si la enzima puede actuar sobre substratos con estructuras muy similares, se dice que la enzima
muestra especificidad relativa para el substrato. La L-aminoacido oxidasa, por ejemplo, puede
catalizar la oxidacion de diferentes aminoacidos de la serie L.
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CONCLUSIONES
ENZIMA CATALASA
• La actividad de la catalasa puede medirse por diversos procedimientos, sin embargo hay que
procurar operar con la menor concentración posible de sustrato, agua oxigenada, para evitar la
inactivación de la enzima por el sustrato.
• La catalasa se encuentra en todas las células que tienen metabolismo aerobio
• La determinación de la magnitud de la actividad catalítica presentes en las diferentes
fracciones proteicas obtenidas de la célula o tejidos: permite purificar las enzimas y obtenerlos al
final en forma homogénea.
• Entre los vegetales estudiados, la papa es la que contiene mayor cantidad de catalasa.
• La enzima es un producto delicado, por lo tanto la agitación excesiva desnaturaliza la
enzima.
• Se demostró la naturaleza proteica de la enzima catalasa en los vegetales.

ENZIMA DE LA AMILASA SALIVAL Y SACARASA

• Aprendimos a realizar experimentos con amilasa salival y sacarasa
• Realizamos diferentes procesos de reacción con cocción
• Observamos la reacciones como cambian de color
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
• Sánchez Soberón, Alicia; Bárcena Martín, Ana Isabel (2007). «El azúcar en la enseñanza
secundaria»
• Murray, R. et al. 2013. Harper Bioquímica Ilustrada. México, Mc. Graw Hill. (132-134).
• Raff, H. y Levitzky M. 2011. Fisiología Médica un enfoque por aparatos y sistemas. México:
Mc. Graw Hill. (584-586)

• Montaño, L.M. et al. 2015. Desarrollo de un detector para medir concentraciones de sustancias
biológicas.
FIRMAS DE RESPONSABILIDAD
Estudiante (s) Laboratorísta Docente
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