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investigación y Posgrado
ORQUÍDEAS. RESCATE POR GERMINACIÓN IN VITRO.
D.R. © 2016. Carmen Ruíz Bello, José Luis Moreno Martínez, Marisela Guadalupe
Salgado Mora y Aída Olivera de los Santos.
ISBN: 978-607-8459-06-3
Edición:
Dirección General de Investigación y Posgrado - Unidad de Divulgación Científica.
Diseño y composición:
Bernardo Olivio Reyes de León y Ernesto de Jesús Pérez Álvarez.
Diseño de forros:
Bernardo O. Reyes de León.
Formación editorial:
María Beatriz Arévalo Dorry.
Imagen de portada:
Carmen Ruíz Bello y José Luis Moreno Martínez.
200 ejemplares.
Página
Presentación i
1. Introducción 1
2. Importancia 3
2.1. Importancia económica en México 5
2.2. Importancia ecológica 5
3. Usos potenciales 7
3.1. Plantas de ornato 8
3.2. Usos en la industria 8
3.3. Otros usos 10
5. Clasificación taxonómica 16
6. Descripción botánica 18
6.1. Hábitat de desarrollo 20
6.1.1. Epífitas 20
6.1.2. Terrestres 21
6.1.3. Litófitas 23
6.2. Tipos de crecimiento 23
6.2.1. Simpodial 23
6.2.2. Monopodial 23
6.2.3. Trepadoras 24
6.2.4. Rastrero 25
7. Pérdida de la biodiversidad 26
8. Propagación de orquídeas 28
8.1. Propagación asexual ó vegetativa 29
8.1.1. División de plantas 30
8.1.2. Tipos de sustratos 31
8.2. Propagación sexual o por semillas 34
9. Propagación in vitro 37
Página
Figura Título
2 Orquídea epífita 13
6 Orquídeas epifitas 21
7 Orquídeas terrestres 22
19 Cápsulas de orquídeas 48
26 Trasvase de plántulas 66
31 Conservación in situ 78
32 Conservación ex situ 78
INDICE DE CUADRO
Las orquídeas tienen una gran importancia dentro de las plantas ornamentales,
muchas de ellas se encuentran en la NOM-059-SEMARNAT en alguna categoría
de riesgo, algunas ya en peligro de extinción. Por este motivo es necesario
buscar estrategias para propagarlas y con ello estamos hablando de rescatarlas;
conociendo las diferentes formas de propagación Asexual y Sexual podremos
lograrlo. En el presente libro se notifica al respecto.
Las orquídeas pueden ser epífitas (viven sobre cortezas de los árboles), terrestres
(viven sobre el suelo) y litófitas (viven sobre rocas).
Las orquídeas son más abundantes en los trópicos, pero también se les
encuentra en climas templados. Su zona preferida es la franja entre los trópicos
que es donde viven las orquídeas epífitas. Algunos países poseen más orquídeas
que otros. En México se reportan alrededor de 1.200 especies, de las cuales el
Estado de Chiapas posee alrededor de 600.
Por la belleza de sus flores, cada año cientos de orquídeas son extraídas de su
hábitat natural y son vendidas de manera ilegal. Los bosques donde crecen están
siendo altamente deforestados, aunado a los fenómenos naturales y a los
incendios provocados. Por lo anteriormente citado; las poblaciones de orquídeas
tienden a reducir su variabilidad genética con riesgos de llegar a extinguirse.
Orquídeas, rescate por germinación in vitro
Por la belleza de sus flores, las orquídeas son muy preciadas en el mundo
entero. Su principal uso es como plantas de ornato aunque las hay
industriales. En México se reporta el empleo de varias especies en usos tan
diversos como medicinales, aromatizantes de alimentos, para extracción de
gomas y mucílagos utilizados como adhesivos o aglutinantes y como
plantas ornamentales.
1. INTRODUCCION
1
1. Introducción
2
2. IMPORTANCIA
3
2. Importancia
Las orquídeas son sin duda, algunas de las flores más apreciadas en el mundo
entero. Esto se debe a que sus flores poseen las más diversas y exóticas formas.
Desde hace siglos han apasionado a reyes y nobles, así como a gente común y
siguen apasionando a la humanidad. Son plantas que cuentan con un gran
número de coleccionistas en el mundo, reunidos en sociedades, clubes y grupos
de estudio (Bastida, 2007).
En México, como en otras partes del mundo el cultivo de las orquídeas para fines
culturales constituyó la base de una creciente afición. Esto se reflejó en 1938 con
la constitución de la primera asociación cívica, formada por destacados y
prominentes personajes que se denominó “Amigos de las Orquídeas”. Hoy en día
se le conoce como “Asociación Mexicana de Orquideología”. Esta nueva
generación de orquideófilos, con verdadero espíritu de conservar nuestras joyas
vegetales, aumentó en los últimos años sus actividades e investigaciones en
bosques y selvas de México. Destacan los estudios realizados con fines
taxonómicos de los cuales se dispone de una larga lista de especies
desconocidas. Asimismo estos estudios ayudaron a resolver la problemática de
su nomenclatura y el enigma existente en la clasificación de varios de sus
géneros y múltiples híbridos naturales (Hartman, 1992).
4
El número de sociedades dedicadas a las orquídeas es impresionante e ilustra la
pasión por estas plantas. Por citar un ejemplo, en el Sur de Florida, existen 12
sociedades que se reúnen semanalmente para discutir aspectos relacionados con
el cultivo de las orquídeas, organización y programación de exhibiciones, y en
ocasiones se llevan a cabo seminarios impartidos por especialistas invitados de
diferentes áreas de la orquideología. Curiosamente, la mayoría de los miembros
participantes de una sociedad también pertenecen a otras sociedades.
Prácticamente se desarrollan actividades relacionadas con las orquídeas durante
todo el año, como subastas, exhibiciones y competencias (Vendrame y Pinares,
2009).
Los principales viveros se ubican en: Tenango de las Flores y Atlixco, Puebla, en
Fortín de las Flores, Veracruz, Cuernavaca, Morelos, Valle de Bravo, México y en
la Ciudad de México. Además existen viveros en otras partes de México, como:
Jalisco, Baja California y la Península de Yucatán, entre otros.
5
se han podido establecer en casi todos los ambientes de la tierra. Algo que
caracteriza a las orquídeas en conjunto es la complejidad de sus interacciones
con otros seres vivos, sean estos hongos micorrízicos, polinizadores, árboles
hospederos u hormigas mutualistas. Son el grupo de plantas que ha podido
colonizar con más éxito las copas de los árboles como es el caso de las
orquídeas epífitas (Hágsater et al., 2005). Las epífitas son plantas que crecen
sobre otras plantas adheridas a los troncos y ramas de árboles y arbustos
principalmente, por ello son llamadas con toda propiedad epífitas (del griego epi
que significa “sobre” y phyte “planta”). El hospedero o “forofito” sobre el que crece
una epifita es utilizado solo como soporte sin recibir más daño que el que pueda
provocar su abundancia dentro de su ramaje, por lo tanto, una epifita difiere de
una planta parásita en que esta última obtiene agua y nutrientes del hospedero.
Las epífitas despliegan mecanismos muy variados y novedosos para sobrellevar
no solo la sequía sino también la adquisición de nutrimentos del ambiente sin
tomarlo del forofito (hospedero). Tal especialización requiere en ocasiones de
interacciones mutualísticas con microorganismos artrópodos y algunos grupos de
vertebrados y de características morfoanatómicas y funcionales muy especiales;
este grupo incluye organismos no vasculares pterofitas y angiospermas que se
relacionan ecológicamente con forofitos muy diversos que se establecen en
ambientes con alta humedad atmosférica. Por ello, son responsables, en gran
parte de que los bosques húmedos tropicales contengan la diversidad biótica más
alta de todos los ecosistemas continentales (Granados et al., 2003). Todas las
orquídeas tienen una relación obligada con los simbiontes micorrízicos durante la
germinación de la semilla. Es importante entender la simbiosis micorrízica debido
a que existe una especificidad con las semillas para germinar (Taylor et al., 2003;
Otero et al., 2004). Resulta determinante la disponibilidad de hongos simbiontes
para la distribución y diversidad de las orquídeas (Otero et al., 2002).
6
3. USOS POTENCIALES
7
3. Usos potenciales
Fueron los españoles quienes le dieron el nombre de vainilla o vaina pequeña, por
su similitud con los frutos de las legumbres que se denominan vainas. Al inicio
del siglo XIX, llevaron plantas de vainilla de México a diferentes lugares de
Europa y de ahí fue la distribución mundial, siendo los franceses quienes la
8
introdujeron a Madagascar donde actualmente se produce el mayor porcentaje de
la vainilla que se consume en el mundo.
a) b)
Cuando los españoles llegaron en el Siglo XVI, los frutos de la vainilla (Vanilla
planifolia Andrews) se vendían en los mercados y de los cormos, seudobulbos y
raíces de algunas especies se extraía un mucílago utilizado como pegamento
(Hágsater et al., 2005).
10
aromatizantes y saborizantes. Algunas especies se usan de manera tradicional
para la elaboración de dulces y para curar heridas o enfermedades pero de
manera restringida (Cabrera, 1999) así como en la producción de esculturas e
imágenes religiosas en ritos y festividades religiosas. Todas ellas conforman el
abanico de usos diferentes que han tenido y continúan teniendo las orquídeas en
algunas áreas de nuestro biodiverso y pluricultural México (Moreno y Menchaca,
2006).
11
4. RECURSOS FORESTALES NO MADERABLES
12
4. Recursos forestales no maderables
14
Figura 4. “Flor de la Candelaria” (Guarianthe skinneri) Orquídea
epífita
Foto: José Luis Moreno Martínez
15
5. CLASIFICACION TAXONOMICA
16
5. Clasificación taxonómica
Reino: Plantae
División: Spermatophyta
Subdivisión: Angiospermae
Clase: Monocotyledoneae
Orden: Microspermae
Familia: Orchidaceae
17
6. DESCRIPCION BOTANICA
18
6. Descripción botánica
19
Algunas viven en las ramas de los árboles (epifitas), otras sobre rocas (litofíticas)
y algunas en el suelo (terrestres). Las raíces de las epifitas y litófitas están
adaptadas a vivir expuestas al aire o inmersas en materia orgánica, ya que tienen
un tejido acumulador de agua llamado velo.
6.1.1. Epifitas. Son plantas que se desarrollan únicamente sobre las ramas y
troncos de los árboles, sus raíces no penetran el tallo de sus hospederos, sólo
crecen sobre su corteza, el árbol cumple la función de soporte. La gran mayoría
de las orquídeas presentan este tipo de hábitat. Su alimento lo obtienen del aire,
el agua de lluvia y de algunos desechos acumulados encima de la corteza de los
árboles (Figura 6).
20
Enciclya cordigera Enciclya acenocaula
Guarianthe aurantiaca
6.1.2. Terrestres. En este caso las orquídeas crecen a nivel del suelo, de donde
toman gran parte de los nutrientes que necesitan. Por lo general para su
adaptación a este hábitat se ha modificado el pseudobulbo. Las raíces cumplen la
función de estructuras de almacenamiento para épocas de sequía o para la
floración, formación de cápsulas, semillas y para su reproducción (Figura 7).
21
Arundina graminifolia.
Foto Carmen Ruíz
Bello
Sobralia macrantha.
Fotos: Carmen Ruíz Bello
22
6.1.3. Litófitas Este tipo de orquídeas crece sobre las rocas. Estas les brindan el
soporte necesario para su desarrollo. Algunas de las especies terrestres se
pueden adaptar a esta condición, al igual que las litófitas a hábitats terrestres.
6.2.1. Simpodial. Las orquídeas con este tipo de crecimiento poseen un rizoma
que crece de manera horizontal, del cual van surgiendo los retoños nuevos que
tienen un crecimiento vertical y eventualmente forma pseudobulbos; en este tipo
de crecimiento se presenta la posibilidad de ramificaciones (Figura 8a).
6.2.2. Monopodial. Las orquídeas con este tipo de crecimiento crecen de manera
erguida, erectas con un solo tallo que no se ramifica, al cual se insertan las hojas y
no presentan pseudobulbos(Figura 8b).
23
6.2.3. Trepadoras. Este tipo de crecimiento se presenta en orquídeas como la
vainilla (género Vanilla) que va creciendo a lo largo y hacia arriba, sosteniéndose
del tronco de un árbol o tutor (Figura 9).
25
7. PERDIDA DE LA BIODIVERSIDAD
26
7. Perdida de la biodiversidad
México alberga una flora que ha sido considerada de las más ricas y variadas del
planeta, presentando aproximadamente el 10% de la biodiversidad terrestre, además
no solamente se distingue por este atributo, sino también por su elevado índice de
endemismos, es decir, especies que solamente se encuentran dentro de los límites
geográficos del país (Rzedowski, 1993, Semarnap-Ine-Conabio, 1995). No obstante,
de las especies de plantas vasculares, aproximadamente el 15% se consideran en
peligro de extinción (Vovides, 1995). La principal causa de este problema ha sido la
perturbación y la destrucción de las comunidades naturales, como producto del
creciente impacto de las actividades humanas sobre ellas.
27
8. PROPAGACION DE ORQUIDEAS
28
8. Propagación de orquídeas
Las orquídeas como todas las plantas vasculares, poseen dos tipos de
propagación: asexual o vegetativa y sexual o por semilla.
No todas las orquídeas se pueden dividir de las mismas formas. Existen algunas
que se pueden dividir simplemente utilizando las manos ó tijeras para cortar las
raíces gruesas y sembrando cada ejemplar de orquídeas en una maceta de un
tamaño apropiado para cada planta así como utilizar sustrato fresco.
Por otra parte existen plantas como Paphiopedilum a los cuales no les gusta ser
divididas, en caso de dividirse es necesario dejar al menos 2 brotes antiguos y un
nuevo crecimiento por división para asegurar el éxito.
29
8.1.1. División de plantas
30
8.1.2. Tipos de sustratos
Fibra de coco o corteza de pino: Que no sea nueva, por que posee sustancias
dañinas para las plantas, llamadas taninos, por lo que se prefiere que ya este
interperizada o vieja.
Trozos de madera: estos pueden ser de encino, Jacaranda, chalahuite (Inga sp.),
gasparito (Eritrina americana), etc. Este último resulta un buen sustrato ya que
proporciona fertilización natural por su alto contenido de Nitrógeno, además de ser
una madera porosa que retiene la humedad. Como sustrato para comercializar las
orquídeas se pueden utilizar multiples sustratos entre ellos esta el chipe, conchas
de coco seco, bambu, retazos de madera, canastas de mimbre, ixtle ó alambre
(Figuras 10 y 11).
Figura 10. Mujeres dividiendo plantas de orquídeas y
estableciéndolas en diferentes sustratos.
Foto: Aida Olivera de los Santos
31
Figura 11. Diferentes tipos de sustratos que se pueden utilizar para
establecer los fragmentos de las plantas. Foto: Aída Olivera
de los Santos
32
Malque o Chipe. Es una costumbre muy común usar pedazos de tallo y raíces de
helechos llamados comúnmente malque, maquique o Chipe, sin embargo, estos
se obtienen de un helecho en peligro de extinción, por lo que no se recomienda su
uso, ya que muchos otros materiales son buen sustrato para orquídeas (Figura 12)
y no es justo conservar una especie afectando a otra.
33
8.2. Propagación sexual o por semillas
Bajo condiciones naturales (Figura 14), las semillas de orquídeas son liberadas de
sus cápsulas cuando éstas maduran y son llevadas por el viento pudiendo
germinar y crecer si eventualmente caen en un medio adecuado para la
germinación. Sin embargo dichas semillas tienen pocas posibilidades de
sobrevivir, debido a que muchas de las especies de orquídeas sólo son capaces
de crecer en presencia de un hongo simbiótico como Rhizoctonia spp. (Serna,
1999).
34
Figura 14. Cápsulas (frutos) con semillas de Encyclia adenocaula. Planta en su
hospedero principal (Quercus sp) en condiciones naturales
Foto: José Luis Moreno Martínez
Cada semilla posee una cubierta seminal que encierra un embrión rudimentario
indiferenciado y simple, constituido por unas 100 a 200 células sin endospermo.
Debido a la falta de reservas alimenticias, el proceso germinativo y el subsiguiente
desarrollo de las orquídeas, se encuentran supeditados a la existencia de una
simbiósis con un hongo que proporcione los elementos nutritivos necesarios para su
realización. Cuando el fruto abre en forma natural y las semillas son liberadas, la
35
germinación dependerá de que al caer entren en contacto con el hongo, el cual
penetrará al embrión a través de una gran célula suspensora; el hongo crece en el
interior de las células del embrión, éste es digerido por la orquídea que comienza a
crecer rápidamente para formar un protocormo. La primera hoja se desarrolla algún
tiempo después de la germinación (Mitchell, 1989).
Lee (2008) menciona que las semillas de orquídea contienen un pequeño embrión
de solamente cerca de 0.1 mm de diámetro, sin ningún tejido de reserva asociado
y que un método de germinación ha sido plantar semillas en suelo previamente
mezclado con suelo obtenido de los alrededores de la planta madre. Sin embargo,
un método más eficiente de germinación y rápido desarrollo es por cultivo in vitro
de las semillas.
36
9. PROPAGACION IN VITRO
37
9. Propagación in vitro
El término cultivo in vitro, se utiliza para denominar a los cultivos asépticos de origen
vegetal. El cultivo in vitro ofrece ventajas adicionales a las técnicas convencionales
de propagación, como son: germinar semillas que bajo condiciones de semillero no
germinan, o bien, obtener una rápida multiplicación a partir de pequeñas fracciones
de la planta libres de patógenos.
Para lograr la propagación de plantas por cultivo in vitro, es posible utilizar cualquier
fragmento vegetal por ejemplo; tallos, parte de la flor, secciones de hojas,
meristemos, células en suspensión, entre otros; a estos materiales biológicos se les
denomina explantes (Fay, 1994). Mediante el uso de explantes es factible inducir la
morfogénesis, término que se utiliza para denominar al conjunto de procesos
relacionados con la diferenciación y desarrollo de órganos o tejidos para dar una
planta completa (Fhan, 1982).
Los métodos de cultivo de tejidos vegetales in vitro tienen una amplia aplicación
en el conocimiento y la explotación de los recursos genéticos, como son: la
propagación masiva, el intercambio de germoplasma, la inducción de la
variabilidad genética y la germinación de semillas de orquídeas fuera de su
38
ambiente natural. Mediante la germinación in vitro, se reproducen semillas en
frascos de vidrio o plástico sobre un medio de agar nutritivo que contiene los
azúcares y minerales necesarios para que las semillas germinen y crezcan
(Mckendrick, 2000).
39
10. PROPAGACION IN VITRO DE ORQUIDEAS
40
10. Propagación in vitro de orquídeas
Figura 15. Meristemo de la planta. (Se señala con el bisturí un meristemo de la planta)
Foto: José Luis Moreno Martínez
41
Figura 16. Meristemo de orquídea propagado in vitro
Foto: José Luis Moreno Martínez
Ventajas y desventajas
Ventajas: si logramos hacer que se propaguen plantas por este medio, de un solo
meristemo podremos realizar una propagación masiva (clones) de la especie que
se trate en particular.
42
10.2.1. Germinación de las semillas in vitro
El cultivo in vitro asimbiótico (sin la presencia del hongo micorrízico) surge en 1922,
cuando Lewis Knudson encontró un medio propicio para la germinación sin la
presencia del hongo (Arditti, 1990). Posteriormente Knudson C (1946) mejoró el
medio de cultivo teniendo éxito en un amplio número de especies. Desde entonces,
se han desarrollado medios para especies específicas como por ejemplo Vacin y
Went (1949), Murashige y Skoog (1962), Ichihashi y Yamashita (1977) y Dalla Rosa
y Laneri (1977), entre otros.
43
Por la dificultad que presentan las semillas de las orquídeas para germinar en
forma natural, se han desarrollado metodologías de germinación asimbiótica bajo
condiciones in vitro (Arditti y Ernst, 1993; Serna, 1999; Mckendrick, 2000;
Cavalcante et al., 2001; Damon et al., 2004; Pedroza et al., 2005; Yamazaki y
Kasumitzu, 2006; Pedroza y Mican, 2006; Haddix et al., 2006; Steele, 2007 entre
otros). Sin embargo, cada especie de orquídea requiere diferentes nutrimentos
para germinar, por lo que hay que investigar cual es el medio de germinación
adecuado para cada una de ellas.
44
La propagación sexual o por semillas, asegura un intercambio genético y ayuda a
mantener la variabilidad genética.
45
11. CAPSULAS O FRUTOS DE LAS ORQUIDEAS
46
11. Cápsulas ó frutos de las orquídeas
Las cápsulas (Figuras 18 y 19) de las orquídeas tardan meses para que sus
semillas alcancen la madurez adecuadas para que puedan germinar in vitro.
47
Cápsula de Guarianthe skinneri
Foto: Carmen Ruíz Bello
George (1993), citado por Lee (2008) reporta que la germinación de la semilla
inicia cuando el embrión se alarga para formar una pequeña estructura como un
cormo, llamado protocormo, el cual posee un brote quiescente y un meristemo
48
radical, en polos opuestos. En la naturaleza, el protocormo se torna de color
verde y acumula reservas de carbohidratos a través de la actividad fotosintética.
Solamente cuando ha crecido lo suficiente, la materia orgánica almacenada da
lugar a un brote y una raíz. El desarrollo normal continúa utilizando las reservas
de alimento almacenadas en el protocormo.
En la Figura 20 podemos observar; que una de las tres cápsulas que se presentan
en la misma planta tiene una coloración amarilla, esta es la que se considera apta
para la siembra in vitro. Cuando las cápsulas abren; las semillas son expuestas a
contaminarse y si se desea germinarlas in vitro habría que esterilizarlas con
alcohol o cloro y esto hace que pierdan su viabilidad. Es conveniente llevar las
cápsulas cerradas y esterilizar las mismas en el laboratorio para poder extraer sus
semillas que en este caso estarían completamente estériles, porque no se
expusieron al medio exterior para contaminarse.
49
Figura 20. Cápsulas de Encyclia adenocaula
Foto: José Luis Moreno Martínez
50
12. PREPARACION DEL MEDIO DE CULTIVO IN VITRO
51
12. Preparación del medio de cultivo in vitro
Existen dos vías para la adquisición de medios de cultivo in vitro: La vía más fácil,
es adquirir el medio ya preparado que para algunas especies en particular ya los
venden en algunos laboratorios, solo se adiciona agua destilada según venga la
presentación, por ejemplo si es para 1 litro, se adiciona 20 gr. de sacarosa se ajusta
el pH a 5.5 y 6.5 gr. de agar bacteriológico, pero esto resulta de costo muy elevado.
La otra vía es adquirir los químicos que se enlistan en la tabla 1 y se preparan
soluciones madre, esto es necesario ya que las cantidades a pesar son muy
pequeñas y es posible equivocarse cuando se pesa, además generalmente se
prepara mas de un litro de medio. Debe utilizarse agua destilada para diluir los
compuestos.
52
Preparación de HCl 1N. Disolver 4 ml de HCl en agua y aforar a 50 ml.
Nota: causa una reacción exotérmica por lo que se debe vaciar lentamente
por las paredes el ácido sobre el agua nunca el agua sobre el ácido.
53
Cuadro 1. Medio Murashige y Skoog (1962) (MS)
VITAMINAS MS
Inositol C6H12O6 0.1
Ac. Nicotínico C6H5NO2 0.0005
Piridoxina – HCL C8H11NO3-HCl 0.0005
Tiamina – HCL C12H17CIN4OS.HCl 0.0001
Glicina NH2CH2COOH 0.002
54
12.1. Preparación de soluciones madre
MS
Macroelementos mg/l g/l 10x-200
NH4 NO3 1650 1.61 16.5 g
KNO3 1900 1.90 19.0 g
.
MgSO4 7H2O 370 0.37 3.7 g
KH2 PO4 170 0.17 1.7 g
Pesar y disolver en 80 ml aprox. Llevar a 100 ml. Etiquetar macroelementos 10X-
200 ml. De esta solución se deberán tomar 20 ml por cada litro de medio.
MS
Calcio mg/l g/l 10x-100
.
CaCl2 2H2O 440 0.44 4.4 g
Pesar y disolver en 80 ml aprox. Aforar a 100 ml (usar agua destilada).
Etiquetar Calcio 10X100 ml. De esta solución se deberán tomar 10 ml por
cada litro de medio.
MS
SOL. DE FIERRO mg/l g/l 10x-100
55
MS
MICROS mg/l g/l g/20 (20X)
MS
VITAMINAS mg/l g/l 20x-100
Tiamina-HCl 0.1 0.0001 0.002 g
Acido nicotínico 0.5 0.0005 0.01 g
Piridoxina-HCl 0.5 0.0005 0.01 g
MS
MYO-INOSITOL mg/l g/l g/10 (10X)
100 0.1 1.0 g
Pesar y disolver en 80 ml aprox. Aforar a 100 ml (usar agua destilada). Etiquetarar
Vitaminas 20X-100 ml. De esta solución se deberán tomar 10 ml por cada litro de
medio.
56
12.2. Condiciones ambientales de los cultivos in vitro
Una vez realizada la siembra, los frascos sembrados se tapan y con papel adherente
se sella alrededor de las tapaderas, posteriormente deberán colocarse en un cuarto
de incubación con temperaturas de 20 -25 ºC. Se pueden colocar en un sitio donde
haya buena luminosidad siempre y cuando se encuentre cerca del sitio donde se
desarrolle la especie que se trate.
Ø Lámparas (Grolux, Solar, Dro-tes o Power Grove), buscar que se cubra todo el
espectro de luz
57
13. PROCEDIMIENTO PARA ESTABLECER EL CULTIVO IN VITRO
58
13. Procedimiento para establecer el cultivo in vitro
Peso de nutrientes
Selección de nutrientes
59
Se seleccionan y se pesan los nutrientes, se disuelven en agua y se mide el pH
recomendado
Añadir agar Frascos Gerber de 100 ml Depositar 20 ml en cada frasco
Figura 21B. Selección y preparación del medio de cultivo. Fotos: Carmen Ruíz Bello
60
13.2. Siembra de las semillas y germinación de las mismas
En la Figura 22 podemos observar los pasos a seguir para la siembra de las semillas
en cultivo in vitro; asi como de la germinación in vitro de las mismas.
62
Figura 23. Formación de protocormos, desarrollo de las hojas.
Fotos: José Luis Moreno Martínez
63
Figura 24. Formación de raíces, crecimiento de plántulas.
Fotos: José Luis Moreno Martínez
64
Figura 25. Plántulas de orquídeas, provenientes de semillas
germinadas in vitro. Fotos: Carmen Ruíz Bello.
Cuando las plántulas tengan competencia alimenticia, hay que trasvasar a medios
nuevos separándolas para que puedan nutrirse (Figura 26)
65
Figura 26. Trasvase de plántulas.
Fotos: Carmen Ruíz Bello
Se continúa el trasvase las veces que se considere necesario hasta que las
plántulas alcancen un tamaño adecuado para adaptarlas al medio ambiente. Una
vez que las plántulas alcancen un crecimiento considerable, son sacadas de los
medios de cultivo in vitro y se busca sembrarlas en un sustrato adecuado
66
Figura 27. Plántulas en proceso de adaptación en el
invernadero. Fotos: Carmen Ruíz Bello
Un sustrato adecuado puede ser una mezcla de tezontle triturado, cáscara de coco
molida y corteza de encino en una proporción 1:1:1. Es importante considerar que la
adaptación de las plántulas del laboratorio al invernadero deberá ser en forma
paulatina; como se indica a continuación:
68
13.7. Establecimiento de plantas en macetas
Cuando las plántulas crecen se recomienda establecer las plantas en macetas.
70
14. Polinización manual para obtener cápsulas con semillas
71
Figura 30. Fruto ó cápsula producto de la fecundación
Foto: José Luis Moreno Martínez
72
15. CONSERVACION DE ORQUIDEAS
73
15. Conservación de orquídeas
El peligro causado por las expediciones realizadas durante los siglos XIX y XX
continúa hoy en día y constituye una amenaza a la sobrevivencia de las especies de
orquídeas. Es necesario, la concientización de las personas al respecto y la
búsqueda de soluciones que satisfagan las necesidades de los productores y
coleccionistas. Además, es importante trazar estrategias para la conservación ex
situ e in situ de especies de orquídeas amenazadas, con el fin de lograr un eficiente
manejo de las mismas para un uso sustentable y la obtención de colecciones vivas
ex situ, que representen genéticamente a las poblaciones naturales (Vendrame y
Pinares, 2009).
El cambio climático global es una razón para conservar una gama de recursos
genéticos en las especies comerciales. Los modelos climáticos proyectan hasta
un aumento de 5º C en la temperatura global en los próximos 50 años como
resultado del “efecto de invernadero” (Ledig, 2004) ¿Qué pasará si los recursos
genéticos se pierden?
74
conservación y multiplicación de diversas especies amenazadas (Rodríguez,
2003).
75
enfermedades o a condiciones ecológicas adversas, como la sequía, las
inundaciones, los incendios y el viento, entre otros. Actualmente se trabaja para
perfeccionar la metodología que permita el almacenamiento in vitro como un
método alternativo complementario. Son en la actualidad muchos los países que
han indicado que es necesario mejorar y organizar tecnologías apropiadas de
conservación para las especies con semillas no ortodoxas y para las plantas de
propagación vegetativa (FAO, 1996).
La conservación in situ (Figura 31)es una vía apropiada para preservar las
especies que no pueden desarrollarse o regenerarse fuera de su hábitat natural.
Esta vía, además, permite la conservación de varias especies al mismo tiempo en
un ecosistema y facilita la investigación en su hábitat natural. Recientemente ha
surgido el interés en la conservación de poblaciones de cultivos nativos en
comunidades rurales con sistemas de agricultura tradicional, así como en el
establecimiento de programas de mejoramiento participativo. Este sistema
involucra la participación tanto de los fitomejoradores como de los agricultores
(Ramírez et al., 2000).
76
es bien sabido que el primero de ellos es el estado más biodiverso de México.
Otro problema se refiere a la permanencia de los hábitats dentro de las áreas ya
incluidas en el SINAP, pues no hay vigilancia adecuada en casi ningún área
natural protegida. La tala, la extracción de especies útiles, la invasión de terrenos,
la ganadería, la agricultura nómada y otros problemas relacionados con la
tenencia de la tierra son cuestiones cotidianas en todas ellas. Existen sin
embargo, ejemplos exitosos de conservación como las reservas de la biosfera de
Chamela-Cuixmala y Calakmul, los bosques comunitarios de la Unión Chinanteco-
Zapoteca en el norte de Oaxaca y el Monumento Natural Bonampak, manejado
por los lacandones (Hágsater et al.,2005). Si bien el cultivo de orquídeas por parte
de aficionados no necesariamente es “hacer conservación ex situ”, puede llegar a
serlo. Las especies vistosas o al menos con cierto interés hortícola tienen más
posibilidades de ser atractivas para los cultivadores; para estas especies, los
viveristas y los aficionados pueden desempeñar un papel importante en su
conservación, por ejemplo manteniendo un buen cultivo, colecciones grandes,
diversas y bien organizadas, y permitiendo que el germoplasma que resguardan
pueda ser utilizado para propagación y otras acciones cuando sea necesario
(Hágsater et al., 2005).
77
Figura 31. Conservación in situ
Foto: Carmen Ruíz Bello
78
15.2. Conservación in vitro de tejidos vegetales
79
células sino implícitamente una forma de mantener el cultivo durante períodos
prolongados (Serna, 1999).
80
16. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
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16. Referencias bibliográficas
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