PRÁCTICA N° 01

BIOSEGURIDAD

DEFINICIÓN:
La bioseguridad es el conjunto de medidas de sentido común a ser adoptadas, con el
fin de reducir o eliminar los riesgos para el personal, la comunidad y el medio
ambiente, que pueden ser producidos por agentes infecciosos, físicos, químicos y
mecánicos.

La bioseguridad se realiza en conjunto; el personal que debe cumplir las normas de

bioseguridad, las autoridades que deben hacerlas cumplir y la administración que debe
dar las facilidades para que estas se cumplan.

COMPETENCIAS

 Conoce y aplica correctamente las normas de bioseguridad para el trabajo

experimental.
 Conoce e interpreta la simbología relacionada con la bioseguridad en el laboratorio
de Microbiología.

MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO

1. Las áreas en las que exista riesgo biológico deben estar perfectamente
señalizadas y con avisos de advertencia para el ingreso exclusivo al personal
autorizado.

2. Es imprescindible el uso de guardapolvo en el laboratorio.

3. Al iniciar y finalizar las prácticas, el estudiante se lavará las manos con agua y
jabón.

4. No ingerir o guardar cualquier tipo de alimento o bebida en el local del

laboratorio, sobre todo en los refrigeradores donde se guardan muestras
infecciosas, cultivos de microorganismos, agentes químicos o soluciones.

5. No fumar ni maquillarse en los ambientes del laboratorio.

6. Manipular las muestras biológicas con guantes. No llevarse las manos a la

cara, los ojos, ni la boca durante el trabajo, para evitar la autoinoculación.

7. No llevarse objetos a la boca.

8. Prohibir el pipeteo bucal. Utilizar pipetas automáticas o emplear peras de goma

u otro dispositivo similar.

9. Cambio de guantes según lo requiera el trabajo y en caso de accidente.

10. Al finalizar cualquier tipo de actividad y durante su estancia en el laboratorio,
lavarse bien las manos de manera frecuente.

11. No extraer el vestuario del laboratorio sin antes descontaminarlo.

12. Usar equipos de protección cuando el trabajo lo requiera (careta, respirador,

gorro, gafas protectoras, etc.).

13. Desinfectar el área de trabajo antes de comenzar su labor.

14. Mantener el laboratorio limpio y retirar de este cualquier material que no tenga
relación con el trabajo.

15. Mantener las puertas cerradas durante el trabajo.

16. En caso de derramamientos accidentales se debe informar inmediatamente al

docente y se procederá a abandonar el área y esperar un lapso de tiempo antes
de limpiar con agua y detergente, y proceder posteriormente a la desinfección
de la superficie sobre la que tuvo lugar.
Niveles de Seguridad Biológica

Existen cuatro niveles establecidos según las técnicas utilizadas, los equipos de
seguridad y la estructura del laboratorio.

Nivel 1. En el nivel de bioseguridad 1 los microorganismos que pueden ser

manipulados están bien definidos y caracterizados por tener una muy baja o ninguna
virulencia para personas adultas saludables. En este nivel se incluyen bacterias como
Bacillus subtilis o ciertas cepas no patógenas de Escherichia coli como E. coli K12.
Sin embargo, estos microorganismos podrían representar algún riesgo para el público
en general, especialmente para niños e individuos con compromiso inmunológico. En
términos generales, el nivel de bioseguridad 1 no es apropiado para el trabajo con
bacterias patógenas e incluye condiciones apropiadas para la enseñanza de la
microbiología a un nivel introductorio.

Nivel 2. En laboratorios del nivel de bioseguridad 2 es donde se efectúa la mayor parte

del trabajo rutinario del laboratorio de microbiología clínica, incluyendo el manejo de
muestras clínicas de diversa índole y la manipulación de cultivos de microorganismos.
Los microorganismos que deben ser trabajados en el nivel de bioseguridad 2 incluyen
la mayor parte de las bacterias aisladas frecuentemente en muestras clínicas, como
Salmonella, Shigella, Vibrio cholerae, Campylobacter, Haemophilus, Neisseria,
Pseudomonas, Staphylococcus aureus y especies de Staphylococcus coagulasa-
negativa, Streptococcus y Enterococcus, entre otras. Bacterias que no deben ser
trabajadas en el nivel de bioseguridad 2, sino en el nivel de bioseguridad 3, incluyen
Mycobacterium tuberculosis, Brucella y Coxiella burnetii, entre otras.

Nivel 3. Este nivel es adecuado para trabajar con microorganismos de alto riesgo. El
uso de animales de laboratorio siempre implica uso de guantes. Los animales se
desinfectarán antes de desecharlos. El laboratorio debe estar aislado de la circulación
general, existiendo doble puerta de entrada, con una habitación para cambiarse y con
ducha. Debe tener, además, un sistema especial de extracción de aire. Los
microorganismos que deben ser trabajados en el nivel de bioseguridad 3 son
altamente infecciosos, pueden causar graves infecciones sistémicas en seres
humanos inmunocompetentes e incluyen a Mycobacterium tuberculosis, Coxiella
burnetii y las especies de Brucella.

Nivel 4. Este nivel solo se establece en laboratorios de experimentación y no en

laboratorios de microbiología clínica. Se suelen manejar microorganismos de altísimo
riesgo o que son exóticos del país, especialmente virus (Ébola, Hanta).

Cuestionario

1. Cuáles son los principios de la bioseguridad. Explique en qué consiste cada

uno de ellos.
2. Cuáles son las barreras de contención. Explique en que consiste cada una de
ellas
4. Establezca la diferencia entre: Limpieza, Desinfección, Esterilización y
Eliminación.

SÍMBOLOS DE SEGURIDAD EN EL LABORATORIO

 PRÁCTICA N° 2

MATERIAL Y EQUIPOS DE LABORATORIO

INTRODUCCIÓN

En el laboratorio de Microbiología, especialmente en el desarrollo de las prácticas es

esencial la utilización de instrumentos y equipos para el manejo de sustancias
químicas y biológicas para lo cual existe una serie de instrumentos diseñados para
facilitar el trabajo en el laboratorio, así como hacerlo seguro y práctico.

Por tal razón se hace necesario de que antes de la realización de un trabajo experimental
el alumno conozca tanto el material como los equipos a utilizar en el laboratorio de
Microbiología, la función y utilidad de de cada uno de ellos así como su correcta
manipulación para reducir el riesgo de accidentes en el laboratorio.

COMPETENCIAS

 Reconoce el material de uso en el laboratorio de Microbiología y adquiere

habilidad en el manejo del mismo.

 Reconoce equipos de uso en el Laboratorio de Microbiología, aprende su uso,

calibración y cuidado.

 Prepara y/o acondiciona el Material de Laboratorio de Microbiología para su

esterilización.

Material de Vidrio

 Embudo de vidrio
Es un instrumento empleado para canalizar líquidos
y materiales sólidos granulares en recipientes con
bocas estrechas. Es utilizado en el filtrado de
sustancias.

 Vaso de Precipitación
Recipiente cilíndrico de vidrio fino que se utiliza
muy comúnmente en el laboratorio, sobre todo,
para preparar o calentar sustancias y traspasar
líquidos.

 Probetas graduadas
Son recipientes cilíndricos, graduados, de vidrio
grueso, de boca ancha, abierta y con pico, y las hay
de distintos volúmenes. Es un instrumento
volumétrico, que permite medir volúmenes
considerables con un ligero grado de inexactitud.
También sirve para contener líquidos.
 Matraz de Erlenmeyer
Son recipientes de vidrio de forma cónica, base
ancha y cuello angosto. Tienen muchas
aplicaciones, por ej. En volumetría para hacer
titulaciones, facilitando una mejor agitación del
líquido y evitando pérdidas por salpicaduras.
Para preparar soluciones y medios de cultivo.

 Tubos de ensayo
Son tubos de vidrio de diferentes anchos y
longitudes. Tienen forma cilíndrica y es
utilizado para contener muestras líquidas,
realizar reacciones bioquímicas y calentar
sustancias.

 Láminas Porta objetos

Es una fina placa de cristal sobre el cual se
disponen objetos para su observación en el
microscopio, ya sea en fresco o coloreadas.
 Laminillas cubre objetos
Son finas laminillas de vidrio, de forma
cuadrada, sirven para cubrir muestras frescas
para la observación microscópica.

 Mechero de Alcohol
Los mecheros de alcohol son de uso corriente
en el laboratorio; se emplean para
temperaturas no muy elevadas. Sirve para
calentar sustancias utilizando como
combustible alcohol o ron. Se utiliza para
mantener un ambiente de esterilidad y evitar la
contaminación de los medios de cultivo.

 Placas de Petri
Es un recipiente circular, de cristal, con una
cubierta de la misma forma que pero de
mayor diámetro, para un cierre no hermético.
Son de diversos tamaños y se utilizan para
colocar medios de cultivo sólido.

 Pipetas graduadas
Son tubos cilíndricos, estrechos con un extremo
terminal cónico graduadas en ml. Se emplean
para medir cantidades variables de líquido.
Pueden ser terminales, cuando la
medición se realiza hasta la punta o no
 terminales, la medición se realiza en la última línea de graduación.

 Frascos gotero
Son frascos de vidrio, transparentes o de color
ámbar. Permite contener sustancias que se
necesitan agregar en pequeñas cantidades.

 Matraz aforado
Son recipientes de cuello estrecho y cuerpo
ancho, en el cuello presenta marcada una
señal ó “línea de aforo”, en él se indica el
volumen capaz de contener. Se utiliza para
preparar soluciones y diluir líquidos.

Material de porcelana

 Mortero y pilón
Son utensilios hechos de diferentes materiales
como: porcelana, vidrio o ágata, los morteros de
vidrio y de porcelana se utilizan para triturar
materiales de poca dureza y los de ágata para
materiales que tienen mayor dureza.

 Malla de asbesto

Son mallas de hierro más o menos finas, a

veces con un círculo de asbesto en el centro
(malla de asbesto). Son usadas cuando no se
requiere calentamiento a fuego directo, el
asbesto es buen aislante del calor.

Material de Metal

 Gradillas

Son los elementos que se utilizan para colocar

tubos de ensayo en posición vertical. Las hay
de los más diversos tamaños y construidas con
diferentes materiales (madera, metal, etc.),
aunque las más usadas son de metal.
  Trípode
Se utiliza cuando no se tiene el soporte universal
para sostener objetos con firmeza. Su principal uso
es como herramienta de sostén a fin de evitar
el movimiento. Sobre la plataforma del trípode se
coloca una malla metálica para que la llama no dé
directamente sobre el vidrio y se difunda mejor
el calor.

 Mechero Bunsen
Utilizado para esterilizar, calentar muestras y
sustancias químicas. Constituido por un tubo
vertical que va enroscado a un pie metálico con
ingreso para el flujo de gas, el cual se regula a
través de una llave. En la parte inferior del tubo
vertical existen orificios y un anillo metálico móvil
o collarín también horadado, los cuales permiten
regular el flujo de aire que aporta el oxígeno
necesario para llevar a cabo la combustión
.
 Espátulas
Es una lámina plana angosta que se encuentra
adherida a un mango de madera o metal. Se utiliza
para tomar pequeñas cantidades de sustancias o
compuestos químicos que van a ser pesados.

 Asas Bacteriológicas
Están constituidas por una base que puede estar hecha de platino,
acero, aluminio y un filamento que puede ser de nicromo, tungsteno o
platino que termina o en aro o en punta, este instrumento de laboratorio
nos ayuda transportar o trasplantar microorganismos de un medio a
otro, así como para la realización de frotis.

 Asas Micológicas
Está formada de una base que puede estar hecha de platino, acero,
aluminio y un filamento más grueso que el asa bacteriológica termina en
un ángulo de 45º o forma de “L”, este instrumento de laboratorio nos
ayuda transportar o trasplantar hongos de un medio a otro medio para
su adecuado desarrollo, así como para la realización de frotis.
Equipos de Laboratorio

 Microscopio
Es un equipo constituido básicamente por un conjunto de lentes
superpuestos que nos permite visualizar directamente, por el aumento
de la imagen, cuerpos no visibles al ojo humano.

 Balanza analítica
Son instrumentos de precisión, utilizados para pesar los medios de
cultivos y reactivos que se preparan en un laboratorio de Microbiología.
 Baño María
Equipo de laboratorio de Clínico, fabricado en acero inoxidable, utilizado
para conferir temperatura uniforme a una sustancia líquida o sólida o para
calentarla lentamente, sumergiendo el recipiente que la contiene en otro
mayor con agua llevar con el fin de mantener una muestra a una
temperatura específica. Por regla general se utilizarán 37°C para
reacciones enzimáticas.
 Incubadoras
Equipos indispensables en la sección de bacteriología, por lo general
son de acero inoxidable. Se utilizan a una temperatura de 37ºC para
realizar cultivos de bacterias, hongos a una temperatura similar a la del
cuerpo humano.
 Horno esterilizador
También llamado “Horno Pasteur” o “estufa Poupinel”; es un equipo
utilizado para esterilización a calor seco (por corrientes de aire caliente).
El vapor saturado es el método de esterilización por excelencia y la opción
de referencia para esterilizar material inerte que tolera las altas
temperaturas.
Tabla de relación Temperatura-Tiempo en el Horno Pasteur

 Autoclave
Equipo fijo de acero inoxidable, que se emplea para la esterilización de
material de laboratorio empleando calor húmedo. Es un medio en el que
se emplea vapor saturado para producir hidratación, coagulación e
 hidrólisis de las proteínas de la célula. Para la esterilización por este
método se requiere 121°C de temperatura con 15 libras de presión en
un tiempo de 20 minutos.
 Contador de colonias
Equipo utilizado para el recuento de colonias bacterianas y mohos en
placas de cultivo con agar. Se utilizan para estimar la densidad de
microorganismos en un cultivo líquido. Una dilución adecuada, o varias
diluciones en serie dentro del rango estimado apropiado, los cuales han
sido propagados mediante técnicas de siembra estériles a una placa
con medo de cultivo.

 Conservadoras y congeladoras
Equipos de refrigeración, cuya utilidad es la mantención o conservación
de los medios de cultivos a temperaturas para de entre 4 – 8 °C. La
temperatura ideal de congelación para conservación es a -20°c.

 Cabinas de bioseguridad
Equipo para manipular muestras biológicas bajo una atmósfera
microbiológicamente controlada. Gabinete de seguridad biológica con
ventana frontal deslizable y alarma que indica el nivel de apertura de la
ventana. Flujo de aire vertical y recirculación de aire filtrado. De acero
inoxidable. Con filtros absolutos de eficiencia del 99.99% (HEPA) y
retención de partículas de 0.3 micras. Con llave para toma de oxígeno.
Se utiliza para la manipulación de muestras biológicamente infecciosas,
evitando la contaminación de la misma así como de operador.

 Jarra de anaerobiosis (Jarra de Brewer)

Fabricada en policarbonato de alta transparencia que facilita el control
de las placas con soporte acero inoxidable en su interior. Recipiente
ideal para realizar incubaciones en anaerobiosis ya que en su soporte
de acero inoxidable se pueden instalar las bolsas de generación de
atmósfera libre de oxígeno.

 pH metro
Es un sensor utilizado en el método electroquímico para medir el pH de
una disolución. La determinación de pH consiste en medir el potencial que
se desarrolla a través de una fina membrana de vidrio que separa dos
soluciones con diferente concentración de protones.

 Vortex
El agitador vórtex para tubos está diseñado para mezclar de modo
intenso células de bacterias y hongos, permitiendo la homogenización
de suspensiones celulares.
  Centrífugas

Son equipos rotatorios, utilizados en los laboratorios clínicos y otros, para la

separación de los solutos y sus solventes mediante el aprovechamiento de la fuerza
centrífuga.

 Balanza analítica Baño María Incubadora

Horno Pasteur Autoclave Conservadora

Contador de colonias Jarra de Brewer pH metro

Vortex Centrífuga Cabina de Bioseguridad

Microscopio compuesto
Cuestionario
1. ¿Cuantos tipos de cabinas de Bioseguridad existen y cuál es la aplicación de
cada una de ellas?
2. Defina: Limpieza, Desinfección, Esterilización, Descontaminación, Eliminación
y establezca la importancia de cada una de ellas.
3. Realice un esquema de la adecuada distribución de los ambientes un
laboratorio de Microbiología.
4. Indique qué equipos de microbiología automatizados y semiautomatizados
existen en la actualidad en el laboratorio de microbiología y en qué consiste
su funcionamiento.

5. Mencione otros equipos de uso en el laboratorio de Microbiología