Capacitación espermática

Como se señaló anteriormente, los espermatozoides de mamíferos son incapaz de fertilizar los huevos
hasta que se completen reprogramación funcional, o capacitación, dentro del tracto reproductivo
femenino. Del mismo modo, los espermatozoides de muchas especies no mamíferas se activan por
factores que están asociados con huevos o son generados con huevos 12. La capacitación consiste en un
Número de procesos componentes, incluyendo: el acoplamiento funcional de la señal vías de
transducción que regulan la iniciación de reacciones acrosómicas por ZP3; alteraciones en la motilidad
flagelar que pueden ser requerido para penetrar la zona pelúcida; desarrollo de la capacidad de
fusionarse con huevos. Esto va acompañado de alteraciones en metabolismo, características biofísicas
de la membrana, cambios en el estado de fosforilación de proteínas, elevaciones del pH intracelular y
niveles de calcio e hiperpolarización de potencial de membrana9,13,14. Gran parte de nuestro
comprensión de la capacidad deriva de estudios in vitro, donde un solo conjunto de las condiciones de
incubación inician estos eventos13, aunque es probable que un clúster de moléculas estimuladoras
controla varios aspectos de la capacitación in vivo. Varios factores pueden impulsar la capacitación in
vitro: primero, salida de colesterol de las membranas espermáticas están mediadas por proteínas que se
unen a los esteroles e inicia muchas aspectos de la capacitación 13. La reorganización de la membrana
espermática después del agotamiento del colesterol puede ser un paso temprano en el proceso de
capacitacion; segundo, una matriz de las proteínas espermáticas están fosforiladas en tirosina a través
de un cAMP dependiente mecanismo13,15. Esperma de mamífero expresar un bicarbonato sensible,
soluble forma de adenilil ciclasa4 que puede controlar estos eventos de fosforilación 15. los implicación
de este sensible al bicarbonato adenilil ciclasa en la capacitación también puede tener en cuenta el
requisito de bicarbonato extracelular en la capacitación; tercero, las elevaciones del pH intracelular y los
niveles de bicarbonato, con la estimulación asociada de la producción de AMPc, pueden activar los
canales controlados por nucleótidos cíclicos que están presentes en los flagelos de los espermatozoides
y son vinculado al control de la motilidad flagelar16. Esto puede explicar el cambio a la motilidad
hiperactivada que es característica de los patrones de natación de esperma capacitado17; cuarto,
membrana La hiperpolarización potencial ocurre durante la capacitación, cuando el calcio tipo T los
canales se liberan de la inactivación dependiente del voltaje y, por lo tanto, pueden para participar en la
transducción de señal ZP3 (ver abajo) 18. La hiperpolarización es causado, al menos en parte, por un
aumento contribución de los canales de potasio en Ajuste del potencial de la membrana espermática 14.
In vivo, múltiples factores cooperativos son Es probable que medie la capacitación. Proteínas de unión a
esteroles, como la alta densidad lipoproteína, están presentes en el oviducto y puede acelerar la salida
de colesterol de esperma19. Además, la progesterona puede regular algunos aspectos de la
capacitación: esto el esteroide está presente en el medio oviductal, derivado tanto del fluido folicular
como de secreción por las células del cúmulo oophorus asociadas con los huevos20. Un objetivo central
para el futuro estudios es ampliar nuestra comprensión de capacitación de sistemas in vitro a la
Situación in vivo.

Esperma-zona pelúcida adhesión

La capacitación es un paso previo para esperma para unirse a la zona pelúcida en un saturable, moda
específica. Inicial La adhesión de esperma-zona pelúcida está mediada por ZP3, una glucoproteína
constituyente de la zona pelúcida que se une a los receptores en la cabeza anterior de acrosoma intacto
esperma. ZP3 aislado tiene varios de los características anticipadas de una adhesión molécula, incluida la
capacidad de unirse directamente a sperm21 y funcionar como un inhibidor competitivo de la adhesión
22. Por en contraste, las otras glucoproteínas de la zona pelúcida, ZP1 y ZP2, carecen de estas
actividades7 . La adhesión a la zona pelúcida es basado en procesos de reconocimiento de proteínas y
carbohidratos, a través de la asociación de Oligosacáridos unidos a O (es decir, cadenas de carbohidratos
unidas al polipéptido por serinilo / treoninilo: enlaces N-acetilgalactosaminilo) de ZP3 con un receptor
relacionado en el esperma23,24. Los oligosacáridos de reconocimiento de esperma se han purificado
parcialmente23 y la aplicación de métodos de espectrometría de masas sensibles puede pronto
proporcionará una definición molecular de estas secuencias25. Además, varios Las proteínas de unión a
ZP3 de alta afinidad tienen sido identificado en esperma, incluso en al menos una proteína de unión a
carbohidratos y otra proteína que muestra especies / orden selectivo de unión a la zona
pellucida11,26,27. Sin embargo, un receptor de esperma para ZP3 aún no se ha identificado
inequívocamente

Disparando el acrosoma reacción

La estimulación con ZP3 desencadena reacciones acrosómicas en los espermatozoides unidos a la zona
pelúcida. Las cadenas de oligosacáridos ZP3 representan adhesión, como se discutió anteriormente,
pero son no es suficiente para impulsar las reacciones de acrosoma. ZP3 puede ser polivalente con
respecto a cadenas de oligosacáridos de adhesión28, y la La reticulación resultante y la multimerización
de los receptores de esperma inicia la exocitosis. Este modelo está respaldado por observaciones que
adhieren cadenas de oligosacáridos están conjugados con ZP3 en múltiples sitios28; que reticula la β-
1,4-galactosiltransferasa, una proteína espermática implicada en interacción de gametos, desencadena
acrosoma reacciones29,30; y que las estructuras de oligosacáridos polivalentes también pueden
desencadenar reacciones acrosómicas en invertebrados marinos esperma31,32. Los primeros eventos
de la transducción de señales ZP3 en los espermatozoides incluyen la apertura de los canales de calcio
activados por bajo voltaje Ttype33, lo que resulta en un calcio transitorio afluencia y la activación de las
proteínas G heterotriméricas, Gi1 y Gi2 (Fig.2) 34. Estas respuestas iniciales producen una activación de
fosfolipasa C (PLC) 35–37 y la elevación del pH intracelular38,39, lo que resulta en un calcio sostenido
afluencia que impulsa directamente la exocitosis38,40. Estudios recientes se han centrado en identificar
el canal que media la fase sostenida del calcio evocado por ZP3 entrada. El gen del potencial de receptor
transitorio (TRP) de Drosophila melanogaster codifica un canal de catión activado por luz en células
fotorreceptoras41. Los siete miembros del clásico TRP de mamíferos (TRPC) familia son homólogos de
esto gen diptero y son subunidades candidatas de canales de entrada de calcio dependientes de PLC41.
Los mecanismos de activación que vinculan La acción del PLC para la apertura de canales TRPC aún no se
ha resuelto. Se han propuesto modelos alternativos, ya sea a base de productos lipídicos o PLC hidrólisis,
o en la generación de inositol-1,4,5-trisfosfato (InsP3 ) y el activación de una vía de entrada operada por
agotamiento del depósito de calcio41. Un numero de Los genes TRPC se expresan en el linaje germinal
masculino de mamíferos42–44 y TRPC2 se ha demostrado específicamente que es una subunidad del
canal de entrada de calcio sostenido en el esperma de ratón que se activa por ZP3 (ref. 43). En este
sentido, los receptores InsP3 están presentes en el acrosoma de los espermatozoides45. y puede
participar en la activación de Canales TRPC2 por ZP3. Sin embargo, TRPC2 es un pseudogen en
humanos46,47, y posiblemente también en sistemas bovinos42. Por lo tanto, este papel en la
transducción de señal ZP3 debe ser asumido por otro ion canal en el esperma de esas especies. Se
prestará especial atención al papel. de otros miembros de la familia TRPC en la mediación de la
transducción de señales ZP3 en especies que carecen de TRPC2. Una serie de proteínas solubles del
receptor de la proteína de unión al factor sensible a la netilmaleimida (SNARE) están presentes en la
región acrosómica de esperma de mamíferos y erizos de mar48–50, y estos pueden acoplar la entrada
de calcio a exocitosis En conclusión, la reacción del acrosoma es Un interruptor funcional crítico. Antes
de la exocitosis, los espermatozoides capacitados pueden penetrar cumulus oophorus y se adhieren
selectivamente a la zona pelúcida51, pero al acrosoma la reacción es un paso previo necesario para que
el esperma pueda fusionarse con el membrana plasmática de huevo

Adhesión de esperma-huevo y fusión de membrana

Después de la penetración de la zona pelúcida, los espermatozoides se adhieren y se fusionan con el

plasma membrana del huevo (Fig. 3). los implicación de esperma fertilina-α (también conocido como
desintegrina y dominio de metaloproteasa 1 (ADAM1)), fertilina-β (ADAM2) y cyritestin (ADAM3),
también como CRISP1 (proteína secretora rica en cisteína 1), en la adhesión esperma-huevo se indican
mediante estudios con anticuerpos, péptidos y proteínas nativas o recombinantes52,53. En Además, los
espermatozoides de la fertilina-β y los ratones knockout de cyritestin muestran mucho habilidades
reducidas para adherirse al huevo membrana, aunque algunos de los pocos los espermatozoides que se
adhieren pueden fusionarse con el huevo54,55. Estudios de estructura-función han identificado motivos
funcionales específicos en la desintegrina de la fertilina-β y la piritestina dominios 56–58. Se cree que las
integrinas que se encuentran en la superficie de los huevos son receptores de ADAM de
espermatozoides, aunque qué miembro (s) de la familia de la integrina sigue siendo identificado
definitivamente. Evidencia inicial sugirió que α6 β1 integrina era un huevo receptor para fertilina-β
(referencias 59-61), aunque la demostración de que los huevos de ratones knockout α6 pueden ser
fertilizados62, y otros datos63–65, sugieren que α6 La integrina β1 no es necesaria para la fertilización o
la adhesión mediada por β-fertilización. La evidencia reciente implica a α9 β1 integrina como un
compañero de unión para fertilina-β (referencias 64,65), y otras integrinas de huevo también pueden
estar involucradas63. Estas proteínas mediadoras de adhesión en Es probable que ambos gametos
funcionen dentro de El contexto de los complejos multiméricos en Las membranas plasmáticas. En el
huevo, un proteína asociada a la integrina, la tetraspanina CD9, es claramente importante para
interacciones esperma-huevo. Esperma no fusible con huevos del nocaut CD9 ratones66-68, una forma
recombinante de una porción extracelular de CD9 inhibe fusión de espermatozoides y óvulos69, y los
anticuerpos anti-CD9 inhiben la fusión de espermatozoides y óvulos y unión de esperma y ADAM de
esperma a huevos58,59,62,64,70. Otras integrinas asociadas Las proteínas también pueden facilitar la
adhesión de los espermatozoides58. Esto es consistente con los modelos en qué tetraspaninas y otros
accesorios Las proteínas de membrana y citosólicas modulan la función de las moléculas de adhesión
celular71,72. En esperma, ideas sobre el importancia de la membrana multimérica Los complejos de
proteínas provienen de análisis de perfiles de expresión de proteínas de esperma de los ratones
knockout de fertilina-β y cyritestin. Los espermatozoides de estos ratones tienen cantidades muy
reducidas de otros ADAM proteínas55 y estas deficiencias moleculares pueden contribuir a los defectos
en interacciones de membrana de gameto. Después de la adhesión, los espermatozoides se fusionan
con el óvulo. membrana de plasma. Sin embargo, la base molecular de esta fusión intercelular. El
proceso sigue siendo esquivo. Contrariamente a las hipótesis iniciales73, no se cree la fertilización α
participar en la fusión de membranas55,74. Del mismo modo, se pensaba que CRISP1 mediaba fusión de
gametos, pero ahora se cree que funcionan antes de la fusión de membrana53. CD9 está implicado en
ciertos tipos de fusión de membrana71,72, pero no se conoce si CD9 en el huevo facilita el gameto
fusión (ya sea directa o indirectamente), o en su lugar funciona aguas arriba al mejorar adhesión de
esperma o hacer que el ambiente de la membrana del huevo sea "competente para la fusión". Avances
significativos en la membrana El proceso de fusión se ha realizado a partir de estudios de fusión de virus
y células y la fusión de vesículas intracelulares Aunque menos es conocido sobre eventos de fusión
célula-célula, nuevo surgen ideas de estudios sobre el mar esperma de erizo y abulón

Activación de huevo

La activación del huevo ocurre después de la fertilización. e inicia el desarrollo embrionario77. En todos
los animales y plantas donde esto ha sido investigado, un evento temprano en la activación del huevo
implica un aumento en el citosólico concentración de calcio hasta aproximadamente 1 µM. Este
aumento tiene una distinción espacial y características temporales en cada especie. los El aumento en la
concentración de calcio citosólico parece ocurrir entre varios segundos y unos minutos después del
establecimiento de la continuidad de la membrana entre gametos, y a menudo ocurre como una "ola"
que viaja a través del huevo77,78. En mamíferos, un oscilación de baja frecuencia en la concentración
de calcio citosólico (aproximadamente 1–2 min spike duration and 1 spike per 10 min) is generated by
InsP3 , through activation of InsP3 receptors in the endoplasmic reticulum and the subsequent release
of sequestered calcium (Fig. 3). Oscillations persist for several hours preceding the time of entry into the
first embryonic mitosis79. The increase in cytosolic calcium concentration induces exit from meiotic
arrest and progression into mitosis, and the exocytosis of cortical granules, the contents of which modify
the zona pellucida to prevent fertilization by additional sperm9,80. These two responses differ in the
‘dose’ of calcium oscillations they require81. Later egg activation responses include the recruitment of
maternal mRNAs for translation, changes in protein synthesis, and zygotic genome activation9,80. In
non-mammalian species, this cytosolic calcium concentration response may be mediated by PLC-γ. This
PLC isoform is typically activated by tyrosine phosphorylation, often through an interaction of PLC-γ Src
homology 2 (SH2) domains with a tyrosine kinase or adaptor proteins. Candidate Src family tyrosine
kinases that may be involved in this pathway have been identified in echinoderm and ascidian eggs82–
86. Furthermore, injection of recombinant PLC-γ SH2 domains into these eggs inhibits calcium release
and egg activation responses86–88. However, recombinant PLC-γ SH2 domains and
phosphatidylinositol-3-OH kinase inhibitors have no effect on sperminduced egg activation in mouse
eggs89,90. The alternative hypothesis that PLC-β mediate egg activation is unlikely. This isoform is
typically stimulated through a heterotrimeric G protein-dependent pathway; however, the perturbation
of G protein function does not seem to inhibit the activation of mammalian eggs by sperm91,92.
Research in egg activation has focused on the mechanism by which sperm evoke oscillations of cytosolic
calcium concentrations in the egg, and has largely examined two models. In one case, the binding of a
sperm ligand to an egg receptor may initiate a signal transduction cascade that results in calcium
release. Sperm ADAMs and egg integrins have been considered candidate effectors. However, although
there are reports that ligandmimicking synthetic peptides can induce calcium release in bovine and frog
eggs93–95, no other purified sperm ligands that bind to eggs have been shown to evoke egg activation.
An alternative model suggests that fusion of the gametes introduces a factor(s) from the sperm into the
egg that initiates egg activation77. The injection of sperm lysate into eggs induces fertilization-like
oscillations of intracellular calcium concentrations. The use of intracytoplasmic sperm injection to
fertilize eggs also demonstrates that extracellular sperm–egg contact is not necessary to activate eggs,
and sufficient controls and analyses have been performed to demonstrate that it is not simply the act of
injection or the introduction of calcium from the media that initiates egg activation96. Egg-activating
activity seems to be associated with the nucleus of the sperm97, possibly in the perinuclear theca98,
and develops during spermatogenesis96. Several candidates have been proposed, including oscillin
(glucosamine-6-phosphate isomerase) y una forma truncada de la tirosina quinasa c-Kit100, pero
también hay datos que arrojan dudas sobre la participación de estas moléculas en la activación del
huevo 89,101,102. El óxido nítrico sintasa ha sido propuesto estar involucrado en el óxido nítrico
mediado liberación de calcio en huevos de erizo de mar103, aunque este es un modelo poco probable
para explicar cómo se inicia la liberación de calcio en huevos de ascidias y mamíferos 104. UNA El PLC
espermático puede introducirse en el huevo durante la fusión de gametos. Mamífero los lisados de
esperma tienen InsP3 –Generando actividad105; sin embargo, ninguno de los conocidos Miembros de la
familia PLC cofractionate with esta actividad106,107, y no está claro si hay es suficiente actividad de PLC
en un solo esperma para iniciar la liberación de calcio en huevos90,105. PLC-δ4 no es un candidato, ya
que esperma de ratones knockout PLC-δ4 puede activar huevos36, aunque otras isoformas están
presentes en los espermatozoides y pueden funcionar de esta manera El mecanismo general a través del
cual un esperma activa un huevo sigue siendo en gran parte desconocido y altamente polémico.

Preguntas sin respuesta y direcciones futuras

Esta revisión intenta proporcionar una sinopsis resumida de nuestra comprensión de fertilización de
mamíferos, con particular énfasis en puntos críticos y controversias actuales. En aras de la concisión,
nosotros por lo tanto, no pudieron abordar muchos Aspectos interesantes de la biología de los gametos.
En Además, hay numerosos sin respuesta preguntas y controversias no resueltas en los temas que se
revisaron aquí. Muchos de los jugadores moleculares críticos en gametos todavía necesita ser
identificado: estos incluyen el receptores de esperma para ZP3, los receptores de óvulos para ligandos
de membrana espermática, y el Factores mediadores de fusión y factores de activación espermáticos.
Los roles mecanicistas de complejos multiméricos en esperma y óvulo membranas en adhesión y
señalización son solo recién comenzando a ser examinado. Con estas preguntas biológicas
fundamentales queda por responder y con el amplias aplicaciones de la biología celular de gametos,
esta será un área de investigación fértil para algún tiempo por venir.