UNIVERSIDAD NACIONAL

“JORGE BASADRE GROHOMANN“

Facultad De Ciencias Agropecuarias
Escuela De Ingeniería
En Industrias Alimentarias

AISLAMIENTO DE
ENTEROBACTERIAS

ALUMNO:
Richard Klever Santos Alarcón

CODIGO:
2014-111003

DÍA Y HORA:
Lunes de 8:00 a 10:00am

CURSO:
Microbiología de los Alimentos 1

PROFESORA:
Ing. Amelia Castro G.
I. INTRODUCCION

Las bacterias u otros microorganismos que se

desarrollan en medios de laboratorio, se llaman
cultivos. Las diferentes especies de bacterias que se
desarrollan en la misma clase de medios de cultivo
pueden tener aspectos muy diferentes, y por lo tanto
el conocimiento de la apariencia, o de las
características del cultivo de las especies es útil
para reconocer ciertos tipos de bacterias; asimismo,
nos puede servir como un medio que haga posible
identificar las especies. Las bacterias pueden ser
obtenidas en cultivo puro para determinar las
características del cultivo o cualquier otra propiedad
de la especie.

Las enterobacterias son Gram negativas y contienen más

de 30 géneros y más de 100 especies que pueden tener
morfología de bacilos o cocos. Los miembros de esta
familia forman parte de la microbiota del intestino
(llamados coliformes) y de otros órganos del ser
humano y de otras especies animales. Algunas especies
pueden vivir en tierra, en plantas o en animales
acuáticos.
Para cultivarlas se hace sembrado en forma de estría,
se cultiva a 37º C de 18-24hrs, para posteriormente
refrigerar.

Existe una alta incidencia de procesos infecciosos

entéricos en la población en general, en países
desarrollados y en vías de desarrollo, y sus elevados
índices de morbi-mortalidad entre determinadas
subpoblaciones (niños y ancianos), hacen que este tipo
de patología siga cobrando gran interés desde el punto
de vista clínico y microbiológico.

En países en vías de desarrollo suele ser la causa más

frecuente de muerte y desnutrición en pacientes en
edad pediátrica. En países desarrollados, debido al
aumento de la calidad de vida, hay una disminución de
la frecuencia y mortalidad, siendo la mayoría de los
procesos autolimitados y resueltos con tratamiento
adecuado.
II. OBJETIVOS

 Conocer y aprender cómo realizar el aislamiento y

reconocimiento de enterobacterias en los distintos
tipos de cultivo.

III. FUNDAMENTO TEORICO

1. Estructura de la enterobacteria

Los miembros de la familia Enterobacteriaceae son

microorganismos con forma de bastón, por lo general
de 1-3 μm de largo y 0,5 μm de diámetro. Como en
otras bacterias gramnegativas, su envoltura celular
se caracteriza por una estructura multilaminar. La
membrana interna (o citoplasmática) consiste en una
doble capa de fosfolípidos que regula el paso de
nutrientes, metabolitos y macromoléculas.

La capa siguiente, o capa externa, consiste en un

peptidoglucano delgado junto con un espacio
periplásmico que contiene una elevada concentración
de proteínas. La membrana externa compleja consiste
en otra doble capa de fosfolípidos que incluyen
lipopolisacáridos (LPS) (en la parte más externa,
son un importante factor de virulencia de estas
bacterias), lipoproteínas (que están fijadas al
peptidoglucano), proteínas porinas multiméricas
(que facilitan el paso de diversas sustancias,
incluidos los antibióticos betalactámicos) y otras
proteínas de la membrana externa. Entre estas
proteínas hay algunas organelas complejas que
irradian hacia el exterior: los flagelos,
estructuras que se utilizan para la locomoción y
que provienen de una estructura basal localizada en
la membrana interna, las fimbrias (o pili comunes),
con importante función como adhesinas y los pili
sexuales, estructuras presentes en las bacterias
que contienen plásmidos conjugativos y que las
bacterias utilizan para mediar la transferencia
conjugativa de ADN del plásmido.

El LPS tiene tres dominios principales: el

esqueleto de lípido A, el oligosacárido fosforilado
central (core) y las cadenas laterales de
oligosacárido de repetición. El lípido A, también
 conocido como endotoxina, es la parte
biológicamente activa de la molécula que el huésped
reconoce. El oligosacárido de repetición unido al
LPS se conoce como antí- geno O. Este antígeno es
la base para la clasificación de los serogrupos.
Junto con otros factores, la presencia del antígeno
O media la resistencia bacteriana al efecto
bactericida del suero normal, siendo capaces por
tanto de sobrevivir más tiempo en sangre y causando
infecciones hematógenas, diseminadas y más graves.

2. Medios de cultivo:

 Agar xilosa lisina de desoxicolato

Contiene extracto de levadura como fuente de
nutrientes y vitaminas. Utiliza el desoxicolato
de sodio como agente selectivo y, por
consiguiente, inhibe los microorganismos gram
positivos. La xilosa se incorpora en el medio
dado que la fermentan prácticamente todos los
entéricos, excepto Shigella, y esta propiedad
hace posible la diferenciación de dicha especie.
La lisina se incluye para permitir la
diferenciación del grupo Salmonella de los
organismos no patógenos, dado que, sin lisina,
Salmonella fermentaría rápidamente la xilosa y
no se distinguiría de las especies no patógenas.
Cuando la Salmonella agota el suministro de
xilosa, la lisina es atacada por la enzima
lisina descarboxilasa, lo que genera un cambio a
un pH alcalino que imita la reacción de
Shigella. Para evitar el cambio similar en los
organismos coliformes positivos a la lisina, se
añaden lactosa y sacarosa para producir ácido en
exceso . Para aumentar la capacidad de
diferenciación de la fórmula, se incluye un
sistema indicador de H2S, formado por tiosulfato
sódico y citrato férrico amónico, para la
visualización del ácido sulfhídrico producido,
lo que origina la formación de colonias con
centros de color negro. Los organismos no
patógenos no productores de H2S no descarboxilan
la lisina; por tanto, la reacción ácida
producida por dichos organismos evita el
oscurecimiento de las colonias, lo que sucede
sólo con pH alcalino o neutro.
 Agar BPLS –Agar – verde brillante-rojo de fenol-
lactosa-sacarosa
Es el medio de cultivo, donde la pluripeptona y
el extracto de levadura, constituyen la fuente
de nitrógeno, vitaminas y minerales. La lactosa
y la sacarosa son los hidratos de carbono
fermentables, el rojo fenol es el indicador de
pH, que vira al amarillo cuando hay producción
de ácido a partir de la fermentación de
azúcares, el cloruro de sodio mantiene el
balance osmótico, y el verde brillante actúa
como agente selectivo que inhibe
fundamentalmente el desarrollo de flora Gram
positiva y de algunos microorganismos Gram
negativos. El agar es el agente solidificante.
Es de un valor excepcional cuando se investiga
un gran número de muestras de heces o alimentos,
por su alta capacidad de diferenciación de las
colonias sospechosas.

 EBM agar-eosina-azul de metileno-lactosa –

sacarosa
Es un medio selectivo que permite el crecimiento
de bacilos gramnegativos, principalmente de la
Familia Enterobacteriaceae, inhibiendo el
crecimiento de las bacterias grampositivas.
También es un medio diferencial ya que nos
permite saber por la coloración de las colonias
si los microorganismos que crecen fermentan
lactosa o sacarosa. Si las bacterias fermentan
lactosa o sacarosa, acidifican el medio y la
eosina vira dando lugar a la aparición de
colonias oscuras, de color rosado a verde
brillante (Ej: Escherichia, Klebsiella,
Enterobacter). Las bacterias que no fermentan ni
lactosa ni sacarosa originan colonias claras o
transparentes (Ej: Salmonella, Proteus,
Pseudomonas).

 VRBG- Agar-violeta cristal-rojo neutra-bilis

Agar bilis glucosa que contienen cristal violeta
y rojo neutro (Agar VRBG) fue utilizado por
Mossel para ladetección y recuento de
enterobacterias en los productos lácteos, la
carne, los productos de carne decerdo y otros
productos alimenticios.La presencia simultánea
de cristal violeta y sales biliares inhiben
 Gram- bacterias gram positivas. La degradación
de la glucosa a ácido se muestra por el color
rojo del indicador de pH, rojo neutro.

 SS- agar salmonella shigella

Medio de cultivo utilizado para el aislamiento
de Salmonella spp. y de algunas especies de
Shigella spp. A partir deheces, alimentos y
otros materiales en los cuales se sospeche su
presencia.

3. Pruebas bioquímicas:

 Prueba de indol:
Esta prueba se realiza en el medio de SIM que
significa Indol, ácido sulfhídrico y motilidad.

 Prueba de citrato
 Prueba de rojo de metilo
 Prueba de IMVIC : prueba de Voges Proskauer

4. E. Colli

Escherichia coli es el microorganismo de vida libre

que mejor se ha estudiado. Estas bacterias pueden
ser móviles (la mayoría) o inmóviles, la mayor
parte de ellas fermentan la lactosa y son capaces
de producir indol a partir de triptófano.

E. coli es el patógeno causante de las tres cuartas

partes de las bacteriemias por gramnegativos de la
comunidad. Es posible que la característica
distintiva de la bacteriemia por gramnegativos sea
la reacción sistémica a la endotoxina o a los LPS
que a veces conducen a respuestas potencialmente
fatales como el shock, la coagulación intravascular
diseminada (CID) y el consumo de factores del
complemento. También se han recuperado cepas de E.
coli en casos de artritis séptica, endoftalmitis,
tiroiditis supurada, abscesos intraabdominales,
peritonitis bacteriana espontánea, abscesos
hepáticos, abscesos cerebrales, endocarditis,
osteomielitis, prostatitis, sinusitis,
tromboflebitis séptica y otras enfermedades.
5. Shigella

Shigella spp. Es responsable de la disentería

bacilar. Se trata de un cuadro muy similar al
producido por las cepas enterohemorrágicas o
enteroinvasivas de E. coli. El origen de la
infección se produce a través de la contaminación
de vegetales. El diagnóstico se realiza a través
del coprocultivo. El tratamiento se basa en la
rehidratación y tratamiento antibiótico, que
estaría indicado en todos los casos.

6. Enterobacter

Hasta la década de 1960 estos gérmenes estaban

agrupados en la clasificación de Klebsiella-
Aerobacter. A diferencia de Klebsiella, los
Enterobacter son móviles y su cápsula tiende a ser
menos notable. Las cepas de Enterobacter suelen
colonizar a los pacientes hospitalizados, en
particular a los tratados con antibióticos, y han
sido asociados con infecciones de quemaduras, de
heridas, de las vías respiratorias y del tracto
urinario.

7. Salmonella

Los serotipos de Salmonella se engloban dentro de

una especie, Salmonella choleraesuis16. Existen más
de 2.000 serotipos diferentes que se agrupan en
seis grupos. Grupo A: S. paratyphi A; grupo B: S.
typhimurium y S. bredeney; grupo C1: S.
choleraesuis, S. montevideo y S. oranienburg; grupo
C2: S. neuport; grupo D: S. typhi, S. enteritidis,
S. dublin y S. gallinarum; grupo E1: S. butantan,
S. anatum y S. give. La salmonelosis puede
observarse bajo cinco diferentes síndromes
clínicos, que se presentan de forma exclusiva o
superpuesta, y que corresponden a los siguientes:
portador asintomático, gastroenteritis aguda,
bacteriemia (la presencia de una bacteriemia por
Salmonella obliga a descartar la existencia de una
infección por el VIH), infecciones focales
(meningitis, osteomielitis o abscesos) y fiebre
tifoidea. Se trata de un género de enterobacterias
no formadores de esporas, anaerobias facultativas y
 móviles. Son oxidasa negativas y prácticamente
todas lactosa negativas.

8. Alimentos que se infectan con lactosa+ y lactosa-

 Leche
 Leche materna
 Carne molida
 Lechuga
 Pescado
 Huevos
 Aves de corral
 Alimentos de venta ambulatoria

9. Como prevenir el contagio:

 Lavarse las manos cada vez que se contaminan o

ensucian las manos, puesto que el contagio se
debe principalmente a esto.
 Mantener una buena higiene de los baños, y
mantener una constante higiene cuando se usan
los baños públicos.

IV. PROCEDIMIENTO

Primera sesión:
Se procede a preparar los medios que se van a utilizar
para la identificación de posibles microorganismos.Una
vez preparados los mediosSe siembra en:

 Mac Conkey cepa 1 sembrar estria

cruzada E.coli

 Mac Conkey cepa 2 sembrar estria

cruzada Salmonella

 Muller Hinton mezcla de los dos

anteriores por estria cruzada

Se incuban a 35ºC por 24 horas.

Segunda sesión:
Observación de las características macroscópicas en
cada medio sembrado Realización de frotis al Gram de 2
colonias. Observación a inmersiónSiembra de la colonia
 pura Preparación de las pruebas bioquímicas: urea,
LIA, TSI, MIO, rojo fenol.Se inoculan las pruebas
bioquímicas realizadas y se incuban a 35ºC por 24
horas.

Tercera sesión:
Observación de las características macroscópicas en
cada medio sembrado Interpretación de las bioquímicas
realizadas, identificación de los microorganismos que
presentan estas características Siembra de colonia
pura por estría cerrada, para poder hacer antibiograma
con alguno de los siguientes antibióticos:

1. AM amopicilina
2. CF cefalotina
3. CTX cefotaxima
4. CAZ ceftazidima
5. CXM cefuroxima
6. DC dicloxacilina
7. E eritromicina
8. GE gentamicina
9. PEF pefloxacina
10. PE penicilina
11. TE tetraciclina
12. SXT trimetiopin con sulfametoxazol

Cuarta sesión:
Observación de las características macroscópicas en
la prueba de sensibilidad.Medir el halo de inhibición
se presentó) con un regla y determinar posible
tratamiento.Realización de frotis de Gram del cultivo
obtenido. Observación a inmersión.Identificación de
microorganismo a partir de los resultados obtenidos.

V. RESULTADOS

En esta práctica se identificaron algunas de

las bacterias pertenecientes a la familia
Enterobacteriaceae como fueron en este caso:
Proteus, E.coli, Salmonella.

Determinando y afirmando
sus características microscópicas, culturales y
bioquímicas de cada una de ellas, diferenciándolas
unas de las otras.
 La familia de Enterobacteriaceae tiene como
características generales ser bacilos Gram Negativos,
sin agrupación, miden de 0.6 – 0.8 µ de ancho por 2 a
4 µ largo, son móviles o inmóviles, no esporulados,
catalasa positivo, oxidasa negativos, reducen el
nitrato a nitrito, son fermentadores de glucosa.

Este tipo de familia son recuperados muy fácilmente

de muestras clínicas, especialmente de heces, ya
que como su nombre los dice se encuentran en los
intestinos.

VI. BIBLIOGRAFÍA

http://es.scribd.com/doc/20181274/11-
ENTEROBACTERIACEAE#scribd

http://es.slideshare.net/jcustodio91/guia-iii

https://microbitos.wordpress.com/2010/06/24/pruebas-
bioquimicas-y-medios-de-cultivo-para-enterobacterias/

http://es.scribd.com/doc/75174289/VRBG-Agar#scribd

http://ademed.blogspot.com/2013/02/identificacion-de-
las-enterobacterias.html