MÉTODOS DE SIEMBRA Y AISLAMIENTO

Yulibeth, Martínez1
1 estudiante de cuarto semestre de medicina, universidad de sucre, facultad de
ciencias de la salud.

Resumen
El primer problema al estudiar una bacteria es su aislamiento del resto de los
microorganismos presentes, ya que la diferenciación de las características de una
especie con otra en un medio mixto puede ser más difícil que si se tiene un medio
puro, por ello se han creado diversos métodos para conseguir esta separación, la
mayoría de ellos basados en la inmovilización de las células microbianas en la
superficie de los medios de cultivo sólidos. Esto se hace con el fin de que esta
bacteria fijada comience un crecimiento y así obtener colonias y colonias aisladas,
lo que nos permitirá hacer un mejor reconocimiento de las especies, para ello se
hace necesario conocer tanto los métodos de que se usan para el aislamiento, como
los distintos medios de cultivo, sus componentes y utilidad.

Palabras claves: Aislamiento, bacteria, medio de cultivo, colonias, crecimiento.

Propósitos u objetivos  Identificar la forma en la cual

 Aprender el método adecuado crecen los micoorganismos,
mediante el cual se pueden sus colonias aisladas, y ciertas
realizar los métodos de características de los mismos
aislamiento, especialmente el  Conocer los diferentes cultivos
método por agotamiento que hay para realizar el
 Familiarizarse con los cultivos aislamiento de bacterias, la
que se utilizan en el laboratorio, composición, cómo y en qué
así como también la utilidad caso utilizarlos
que tienen los métodos de
siembra y aislamiento
Marco teórico de ellos basados en la inmovilización
En la naturaleza, los microorganismos de las células microbianas en la
se encuentran formando poblaciones superficie de los medios de cultivo
mixtas con otros tipos de sólidos. Al depositar una célula
microorganismos. Los cultivos de bacteriana o una levadura en un punto
estas mezclas se llaman por ello del medio de cultivo, ésta quedará
cultivos mixtos. Sin embargo, el inmovilizada en ese punto y en él se
conocimiento de los microorganismos reproducirá por absorción de los
se consigue mediante el estudio de nutrientes del medio. Las nuevas
cepas aisladas, cultivadas en el células generadas permanecerán
laboratorio en cultivos puros (o igualmente inmóviles y tras sucesivas
axénicos). En ocasiones el estudio generaciones conformarán lo que
molecular conduce a la denominamos una "colonia" que no es
caracterización de los más que un montón de células
microorganismos, aún en poblaciones derivadas de una sola célula madre
mixtas. Sin embargo, la identificación inicial, es decir, un clon de la bacteria
bacteriana y la caracterización o levadura depositada al sembrar.
completa solo es posible tras el Esta colonia es visible al ojo humano y
aislamiento de la bacteria y la presenta diferentes características
obtención de cultivos puros. Por ello según el microorganismo que la
el primer problema al estudiar una genera. Esto nos permite distinguir las
bacteria es su aislamiento del resto de diferentes poblaciones microbianas
los microorganismos presentes (En que se encuentran en la muestra
una muestra patológica, de agua, de sembrada y separarlas transfiriendo
suelo, de alimentos, etc.). Una vez que una colonia de cada tipo a un nuevo
se ha logrado el aislamiento es posible medio de cultivo estéril, a estos
obtener la bacteria de interés en cultivos los consideraremos "puros"
cultivo puro.1 por poseer un sólo tipo de
microorganismo.2
Existen diversos métodos para
conseguir esta separación, la mayoría
El aspecto de las colonias, su esterilizarse previamente. La
coloración, tamaño, etc. permiten utilización de estos dispositivos, así
diferenciar diferentes bacterias, como de los diferentes medios de
aunque son propiedades generales cultivo tienen aplicaciones
muy influenciadas por las condiciones específicas. Por ejemplo: Los medios
de cultivo, por lo que a continuación se líquidos, los medios semisólidos, los
realiza una descripción muy general. medios sólidos.3
Las colonias pueden ser opacas,
translucidas o transparentes. Algunas Asimismo, se pueden clasificar según
producen pigmentos fluorescentes la composición de estos, es decir si
cuando se iluminan con luz tienen algún complemento nutritivo
ultravioleta. Otras aparecen con que puede hacer propicia el
superficie pulverulenta, otras son crecimiento de cierto tipo de bacterias.
lisas, o rugosas, o poseen anillos En esta clasificación tenemos:
concéntricos. En ocasiones el olor es
también característico. 1  medio de cultivo básico: son
apropiados para la mayoría de
Entre las técnicas más conocidas y microorganismos ya que
usadas para la siembra se encuentra: poseen requisitos nutricionales
mínimos para desarrollarse. 4
 Método de siembra por estría  medio de cultivo enriquecido:
en placa permiten el crecimiento de
 Métodos de vertido en placa y bacterias difíciles de cultivar,
extensión en placa puesto que se añade ciertos
 Método de siembra en tubo de componentes muy ricos en
ensayo nutrientes. 4
 medio de cultivo selectivo:
Por otro lado, en la transferencia de estos medios contienen
microorganismos se emplean agujas, componentes que inhiben el
asas de inoculación, hisopos, pipetas crecimiento de algunas
o pipetaspasteur que deberán bacterias cuyo crecimiento no
 interesa, permitiendo así aislar que contiene citrato que puede inhibir
una determinada especie. 4 el crecimiento de algunos
 medio de cultivo diferencial: microorganismos y glucosa que falsea
en este se les adiciona las reacciones de hemolisis, aparte de
sustancias para el crecimiento anticuerpos y agentes
de determinadas bacterias y al antimicrobianos. Aquí crecen la
actuar sobre dichas sustancias mayoría de bacterias patógenas y
adquieren un color que las algunas levaduras. Este medio es
diferencia de otras colonias. 4 adecuado para el cultivo y aislamiento
de microorganismos exigentes,
Entre los medios de cultivos más también para estudiar la actividad
usados tenemos: hemolica. 4

Agar nutritivo: está compuesto de Agar MacConkey: está compuesto por

extracto de carne, peptona, ClNa, agar peptona, lactosa, ClNa, sales biliares,
y agua destilada. Se usa como medio cristal violeta, rojo neutro, agar y agua
de cultivo general para la mayor parte destilada. Los medios usados para el
de los microorganismos y como base aislamiento selectivo de
para la preparación de medios enterobacterias se caracterizan por
selectivos y enriquecidos. 4 contener lactosa y un indicador de
cambio de pH que detecta la actividad
Agar sangre: compuesto por extracto fermentadora sobre este azúcar.
de carne, peptona, ClNa, sangre, agra Además, estos medios de cultivos
y agua destilada. Lleva como base el llevan sustancias inhibidoras de Gram
agar nutritivo y se le adiciona sangre positivos. Las sales biliares y el cristal
desfibrinada en una porción del 5- violeta actúan como inhibidores. El
10%, principalmente sangre de indicador vira a rojo ladrillo en medio
conejo, carnero y caballo ya que acido. Las bacterias que fermentan la
ofrecen buenas reacciones lactosa producen colonias de color
hemolíticas. No se usa sangre rojo que pueden estar rodeadas de
humana procedente de banco puesto una zona opaca debida a la
precipitación de sales biliares; las no Materiales
fermentadoras dan colonias incoloras  Cultivos puros de microorganismos
más o menos transparentes. 4  Cajas de Petri con medios de cultivo
sólidos
 Mecheros de gas
Agar EMB (Eosina azul de metileno):  Asas redondas y rectas

compuesto por peptona, fosfato

Procedimiento
dipotásico, lactosa, eosina azul de
Con un asa redonda, previamente
metileno, agar y agua destilada. Su
esterilizada por calentamiento del
uso es prácticamente el mismo del
alambre hasta el rojo vivo en el
agar MacConkey. El azul de metileno
mechero de gas, se tomó una muestra
actúa como indicador e inhibidor al
del cultivo de microorganismos
mismo tiempo. Las colonias
escogido y se extendió sobre un área
fermentadoras de lactosa presentan
pequeña de la superficie de la caja con
un tono violeta más o menos intenso.
agar nutritivo y MacConkey, en forma
Por ejemplo, Escherichia coli origina
de estrías muy juntas, pero sin hacer
colonias muy oscuras, frecuentemente
presión para no dañar el agar.
con brillo verde metálico que facilita su
Posteriormente se flameó el asa, se
detección en aguas contaminadas con
enfrió en las paredes de la caja de
materias fecales. 4
Petri y después, se extendió
nuevamente la muestra partiendo de
La utilización de todas estas técnicas,
la estría anteriormente hecha por otra
métodos y medios de cultivo nos
zona de la placa haciendo nuevas
permitirá entonces hacer una mejor
estrías. Se repitió este proceso 2
diferenciación de ciertos tipos de
veces más y se finalizó con una estría
características específicas de algunas
sin volver al mechero.
especies, lo que nos facilitará su
estudio.

Se incubaron las cajas, invertidas, a

37oC durante 24 horas.
Tras la incubación, se observaron las
colonias aisladas en alguna región de
la caja inoculada y luego se procedió Análisis de datos
la describir el crecimiento de estas. Luego de realizar la siembra de en
este caso bacterias presentes en una
Resultados muestra de agua y conociendo los
componentes y utilidad de los dos
medios usados en esta práctica (Agar
nutrido y MacConkey) se puede hacer
cierto análisis sobre el tipo de bacteria
presente en este cultivo, ya que como
se observa en las imágenes hubo un
crecimiento en ambos medios y
basándonos en que el Agar
MacConkey tiene sustancias

Imagen 1. Cultivo de bacterias en una inhibidoras de Gram positivos,

muestra de agua, sembradas en un podemos decir que nos encontramos

medio de cultivo de Agar MacConkey. en presencia de una bacteria Gram

negativa.

Por otro lado, gracias a la obtención de

colonias aisladas se pudo observar de
mejor manera algunas características
estas. Para esta observación se tuvo
en cuenta principalmente las colonias
que tuvieron crecimiento en el agar
nutrido.

Se pudo observar que las colonias

Imagen 2. Cultivo de bacterias en una crecieron de forma puntiforme,
muestra de agua, sembradas en un presentando un borde entero y con
medio de cultivo de agar nutrido. una elevación convexa; también, al
momento de detallar la superficie de
dichas colonias se observó que  Que haya algún error en la
presentan una superficie cremosa o composición del medio, lo que
de aspecto mucoso. puede llevar a resultados
erróneos o no crecimiento
Como se mencionó anteriormente es adecuado de las colonias entro
muy importante manejar otras cosas
correctamente los métodos de  Romper el agar en el
aislamiento de especies, ya que como procedimiento
lo pudimos evidenciar en esta
práctica, este nos permite identificar Conclusiones
características específicas de las El aislamiento de las especies es muy
bacterias basándonos tanto en su importante para el estudio de estas
crecimiento (haciendo la mismas, ya que nos permite observar
diferenciación por los distintos medios características morfológicas y
de cultivo) como en sus características metabólicas, debido a que ciertas
morfológicas observadas en las bacterias reaccionan mediante
colonias. sustancias usadas con fines de
diferenciación en los diversos medios
Causas de error de cultivo, he aquí la importancia de
 Que haya contaminación, ya aprender a realizar una siembra ya
sea del medio o con otro aislamiento bacteriano correctamente,
microorganismo ya que de esta así como conocer los medios de
manera dejaría de ser un cultivo, sus componentes y la utilidad
cultivo axénico o puro. de cada uno de estos.
 Que haya confusión con la Referencias bibliográficas
elección del medio de cultivo, 1. http://www.ugr.es/~pomif/pom-
por ejemplo, que se quieran bac/pb-iv/pb-iv-2-
cultivar bacterias Gram introduccion.htm.
positivas y se utilice un medio 2. https://sites.google.com/a/gou
que inhiba su crecimiento y mh.umh.es/practicas-de-
visceversa
 microbiologia/indice/tecnicas-
de-aislamiento
3. https://conalepfelixtovar.wordpr
ess.com/2012/09/26/tecnicas
my-metodos-de-aislamiento-y-
seleccion-de-microorganismos/
4. https://www.slideshare.net/caro
linacartagenad/cultivo-y-
aislamiento-de-bacterias.