INFORME 1.

PREPARACIÓN Y ESTERILIZACIÓN DE MATERIALES Y MEDIOS DE

CULTIVO

Kelly Díaz Barraza

Instructora: Laura Muñoz Echeverri
CENTRO TEXTIL Y DE GESTIÓN INDUSTRIAL
QUÍMICA APLICADA A LA INDUSTRIA (FICHA: 1745745)
SENA

Introducción capaces de reproducirse. La

Los microorganismos es un ser vivo que
solo puede visualizarse con el
microscopio. Son organismos dotados de
la individualidad que representan, a
diferencias de las plantas y los animales.
En su mayoría son unicelulares, aunque
en algunos casos se trate de organismos
cenóticos compuestas por células
multinucleadas, o incluso multicelulares.
Dentro de los microorganismos se
encuentran organismos unicelulares
procariotas, como las bacterias y
eucariotas como los son protozoos, una
parte de las algas y hongos, e incluso los
organismos de pequeño tamaño como
los virus.[1] Los microorganismos
dependen de varias condiciones para su
crecimiento y producción, en este caso
existen tipos de medios de cultivos para
poder llevar a cumplir las condiciones,
para llevar a cabo debemos elaborar
cierto parámetro para su cumplimiento,
uno de ellos es la preparación y la
esterilización de materiales como
requisito para el trabajo con los seres
vivos dado a la ubicuidad de los
microorganismos y la existencias de
estructuras celulares resistentes
(esporas y endoesporas) se han
desarrollado procesos de esterilización,
es decir, de eliminación o destrucción de
todo organismos vivo, como objeto
esterilizado esté libre de células viables
esterilización de material puede llevarse
a cabo mediante calor seco o húmedo,
siendo los métodos de mayor utilización
en microbiología.
Otra condición importante para su
crecimiento y producción de los
microorganismos es la selección de
medios de cultivos adecuados, esto debe
suplir requerimientos nutricionales
indispensables para el desarrollo celular,
permitirán diferenciar características del
crecimiento y establecer identidad.
Adicionalmente, conociendo que los
microorganismos se encuentren en
diversos ambientes naturales, los medios
de cultivo deben asemejar dichos
ambientes con el fin de posibilitar su
crecimiento.
Objetivos
 Emplear técnicas de limpieza y
desinfección de materiales y
equipos para el trabajo con
microorganismo.
 Aplicar principios generales para
la preparación y esterilización de
medios de cultivo y materiales de
vidrio de uso común en
microbiología y biotecnología.
 Conocer la composición y el uso
de los diferentes medios de
cultivo y otras soluciones
utilizadas en el laboratorio de
microbiología – biotecnología.
 Lavar todo el material de trabajo
Materiales y escurrir el exceso del agua

 Tubos de ensayo de 10 mm x 100

mm con tapa rosca
 Tubos de ensayo de 16 mm x 150 Precalentar el horno a 80°C por
mm con tapa rosca 15 minutos, se procede a
 Cajas petri de vidrio envolver las cajas Petri con el
 Erlenmeyer de 500 -1000 mL papel kraf y con algodón y gasa
 Erlenmeyer de 250 mL los Erlenmeyer
 Erlenmeyer de 100 mL
 Pipetas graduadas de 10 mL
 Macropipeta de 1 mL a 10 mL
Preparar caldo nutritivo y vaciar
 Puntas de micropipeta de 1 a 10
8mL en el tubo de ensayo
mL
 Agitadores magnéticos
 Papel kraf
 Asas bacteriológicas (asas de Preparar agar nutritivo o plate
lupa) count en un Erlenmeyer y
Horno de calor seco calentar en plancha agitadora
 Hisopo esteril, hasta ebullición
 Algodón
 Gasa
 Vinipel
 Tarro lavador agua destilada Vaciar 10mL del medio anterior
 Planchas de calentamiento y en un tubo de ensayo y evitar
agitación solidificación agregando agua

Reactivos

 Caldo nutritivo Realizar el mismo proceso para

 Agar nutritivo o plate count
 Agar papa dextrosa (PDA), agar
sabouraud u Ogy
 Agar chromocult, VRB, EMB
 Solución salina peptonada: (8.5 g
de NaCl, 1 g de peptona, 1000
mL de agua)
 Agua destilada
Procedimientos
agar para los hongos y dejar los
medios de cultivos que se
enfríen
Etiquetar 27 cajas Petri con AN y
8 PDA, dejar que se solidifique
envolver dichosas cajas de Petri y
refrigerar

Preparación de materiales de
vidrio y medios de cultivos
Anexos
1. ¿Para qué se usa una
incubadora?
La incubadora sirve para
mantener y hacer crecer cultivos
microbiológicos o cultivos
celulares, regulando factores de
crecimiento viables como por
ejemplo la temperatura, la
humedad y la ventilación. Las
incubadoras vienen en distintos
tamaños, tan pequeñas como una
computadora portátil o tan grande
como una habitación,
dependiendo de los
requerimientos del usuario.
2. ¿Cuál es la función de una cabina
de flujo laminar?
Cabinas o campanas se trabaja
con obleas de semiconductor,
cultivos celulares o cualquier otro
sistema que deba mantenerse
limpio y deba evitarse la
contaminación con partículas
minúsculas. Estas cabinas están
diseñadas para proporcionar un
aire limpio y constante a una
velocidad de paso de aire de 0,3
a 0,5 metros por segundo para
así barrer la superficie de la zona
de trabajo y evitar la suspensión
de partículas así como una
posible contaminación de las
muestras. El aire es inyectado a
la zona de trabajo a través de un
filtro HEPA o ULPA e insuflado en
forma de un flujo laminar o flujo
unidireccional, muy suave, hacia
el usuario.
3. ¿Cómo se clasifican los medios
de cultivo según su función?
¿Para qué sirve cada uno?
Los medio de cultivo se clasifican en:
 Líquidos: No contienen agar,
favorecen el crecimiento
bacteriano ya que las bacterias
poseen una gran libertad de
movimiento y al difundirse por
todo el medio encuentran sus
componentes nutritivos y
requerimiento del oxígeno con
mayor facilidad.
 Solidos: Su concentración de
agar es de 1.5% a 2%, las
bacterias crecen con mayor
dificultad ya que los nutrientes
pueden agotarse fácilmente, se
utilizan colonias, aislar
microorganismos, características
de crecimientos y entre otros.
 Semisólidos: Su concentración
de agar es 0.5%, se utiliza para
estudiar el movimientos y algunas
propiedades bioquímicas.
4. ¿Cuáles son los métodos más
corrientes utilizados para
esterilizar material de laboratorio?
Los métodos más utilizados para
esterilizar los materiales del
laboratorio son:
Esterilización por vapor
húmedo: Vapor a presiones
superiores a la atmosfera se logra
en equipos denominados
autoclaves. Esta es usada para
realizar medios de cultivos y
soluciones a 121°C y 15Lb de
presión por 15-20 min. El material
se deja durante este tiempo para
asegurar la destrucción de
 esporas reconocidas como las
estructuras microbianas más 5.
resistentes al color, temperatura
mayores pueden destruir 1 MICROPIPETA 8 CABINA DE
componentes de los medios. FLUJO LAMINAR
2 ERLENMEYER 9 HORNO SECO
Esterilización por vapor seco:
El calor seco desnaturaliza las 3 TUBOS DE 10 PROBETA
enzimas y destruye los ENSAYO
microorganismos por oxidación, 4 PLANCHA DE 11 BEACKER
por ejemplo al ponerlos CALENTAMIENTO
directamente en la llama de un 5 AUTOCLAVE 12 PAPEL KRAF
mechero o en un horno a 110°C
durante 2 horas. Estos métodos 6 CAJA PETRI 13 PIPETEADOR
se aplican principalmente en la
esterilización de asa 7 PIPETA 14 MECHERO DE
GRADUADA BUSSEN
bacteriológica y material de
vidrios y quirúrgica.

6. ¿Cuál es la función de la
autoclave? Describa en un
diagrama los pasos más
importantes asociados a su uso.

La autoclave es un 7. Seleccione uno de los medios

recipiente de presión usados en la práctica. Describa
metálico de paredes paso a paso el método de
gruesas preparación (puede usar
ilustraciones), desde empezar
desde la manera como se
Que se utiliza como una determinó la cantidad a pesar.
medida elemental de
esterilización de material El medio de cultivo a preparar de
PDA:

 Se realizan los cálculos previos

Su proceso involucra vapor para determinar la cantidad a
de agua a altas
utilizar.
temperaturas
20mL 0.02 L
Pesa PDA: 39 g/L

El material a esterilizar es 0.02 L x 39 g/L = 0.78 g

de uso gradable, se requiere
dos métodos de testificación
de la calidad de dicha
esterilización
 Referencias
 Colocar 0.78g del medio de
cultivo en polvo en el Erlenmeyer  Microorganismos. Ecured.
y agregar agua destilada https://www.ecured.cu/Microorgani
 Colocarlo en el calentador smo
agregarle un agitador magnético,
dejar ebullir; dejar reposar.  La cámara de flujo
 Colocar los materiales en la laminar. Escuela Técnica
autoclave y esterilizar a 121°C Superior de Ingeniería
durante 20 min. Agrícola. Universidad de Lérida.
 Luego de dejar de reposar el https://es.wikipedia.org/wiki/Cabin
medio de cultivo PDA, agregarlos a_de_flujo_laminar.
a las caja Petri estéril. En cada
caja Petri vaciar  Medios de cultivos: Metodologia y
aproximadamente 20mL. usos. 2013.
https://es.slideshare.net/WARAUYA
8. ¿Qué cantidad en gramos (g) de 20/medios-de-cultivos-metodologa-
agar nutritivo debo pesar, para y-usos
preparar 500 mL de medio?
NOTA: según las instrucciones
del fabricante por cada 1000 cm3
de agua se deben agregar 0.034
kg de agar nutritivo.

500mL 0.5L
1000cm3 1000mL

Conclusión

De acuerdo con lo realizado en la

presente práctica se puede
concluir que es de gran
importancia preparar y seguir el
procedimiento en la esterilización
y elaboración de los medios de
cultivos, añadir la cantidad de
solución exacta, para obtener los
resultados esperados.