FACULDADE DE SAÚDE E ECOLOGIA HUMANA

Ana Clara Monteiro Castanheira

Relatório de Isolamento e identificação de cocos gram positivos

Vespasiano
2018
 Isolamento e identificação de cocos gram positivos
Introdução
Os cocos gram positivos eles são classificados em estafilococos, estreptococos e
enterococos. Os estafilococos são geralmente encontrados na pele e na microbiota
nasal normal do ser humano, assim permanece no corpo normalmente sem causar
doenças.
Entretanto, mesmo sendo considerado parte da flora natural nasal, em algumas
condições o Staphylococcus aureus pode causar infecções nosocomiais e
comunitárias, desde furúnculos até septicemias, infecções no coração e abscessos.
O uso irracional de antibiótico está fazendo esse microrganismo serem mais
resistentes, com isso, os médicos dividem os estafilococos em dois grupos, pela
sensibilidade aos antibióticos: os meticilino resistentes (aqui no Brasil utilizamos
oxacilina) e os sensíveis.
A pratica foram divida em etapas, desde a coleta da amostra ate o antibiograma. Os
matérias usados são: Swab esterilizados, alça bacteriológica, Ágar Mueller-Hinton,
lâmina, placa de Petri, tubo, pinça de metal e antibiótico. A técnica foi realizada para
descobrir se tem a presença do microrganismo dos estafilococos e sua classificação.
Objetivos
O trabalho desenvolvido tem como objetivo de fazer isolamento e identificação de
cocos gram positivos em microbiota nasal.
Metodologia:
 Coleta da amostra:
Foi coletada secreção do vestíbulo nasal com auxílio do swab esterilizado. Em um
tubo com caldo de tioglicolato, inoculou amostra do nariz e inoculou em 35°c por
dois dias. Após incubação, observou o meio de cultura e o tipo de crescimento.

 Isolamento em ágar manitol-hipertônico:

Após esterilização da alça bacteriológica, ela foi utilizada para pegar o meio de
cultura no tubo. Em seguida, com essa alça deposita na placa de Petri, riscando a
superfície “indo e voltando” do ágar.
Com isso, o manitol é indicador de fermentação, a bactéria Staphylococcus aureus
utiliza o manitol como fonte de carboidrato e produz ácido. Esse ágar originalmente
tem a cor rosa, quando essa bactéria reage com fenol altera a cor da colônia para
amarela.
  DNASE:
O teste de Dnase é usado para detectar a degradação do Ácido Desoxirribonucléico
(DNA), contido no meio de cultura, por bactérias que possuem uma enzima
extracelular, a desoxirribonuclease, responsável pela reação.
No teste prático, despejou um corante azul em todo ágar para revelar atividade
enzimática. Se aparecer uma zona transparente em volta da colônia indica reação
positiva, caso ao contrario indica negativo.

 Catalase:
A catalase é um a enzima que decompõe o peróxido d e hidrogênio (H 2O2) em
água e oxigênio. A prova da catalase é utilizada com frequência para diferenciar
membros da família Micrococcaceae de membros da família Streptococcaceae de
cocos gram-positivos.
Para realização do teste, antes de despejar o corante azul, pegou uma amostra da
colônia no ágar com alça bacteriológica, transferiu para a lâmina e adicionou uma
gota de peroxido de hidrogênio e observou se houve ou não a formação de bolhas.
Se houve aparecimento rápido de bolhas o resultado é positivo, se tiver ausência de
bolhas o resultado é negativo.

 Antibiograma:
É o teste para verificar a resistência da bactéria a antibiótico.
O procedimento foi a coleta da amostra no tubo com auxilio no swab, e depositou no
Ágar Mueller Hinton que é um meio de cultura, recomendado para a realização de
antibiograma. Com auxílio de uma pinça flambada, colocou um disco de gentamicina
e um de penicilina sobre a superfície do meio inoculado e foi deixado durante dois
dias as 35°c.
Com o auxílio de uma régua foi medido o diâmetro dos halos inibitórios de cada
disco, para determinar se a bactéria em análise é sensível ou não ao antibiótico
testado.
Se o diâmetro da penicilina for menor ou igual a 28 milímetro é resistente, já se for
maior ou igual a 29 milímetro é sensível. No caso da gentamicina menor ou igual a
12 milímetro é resistente, entre 13 milímetro a 14 milímetro é intermediário e maior
ou igual a 15 milímetro é sensível.

Resultado e discussão:
Os resultados obtidos nesses testes foram: o meio de cultura e o tipo de crescimento
foi em facultativo e grumo. Já o isolamento em ágar manitol permaneceu rosa
resultando em negativo, pois não houve fermentação do manitol e por isso a
substancia ficou básica.
Na prova de identificação da DNASE deu positivo onde apareceu uma zona
transparente no teste, na catalase deu positivo pois houve formação de bolhas
rapidamente e no antibiograma calculando o diâmetro o resultado foi 30mm de
gentamicina e 31mm de penicilina sendo que as bactérias são sensíveis a ambos
antibióticos.
Concluindo então que ao isolar e identificar o gram através desse trabalho foi
possível identificar que sou portador saudável de Staphylococcus aureus, a maioria
dos testes feitos deram positivos.