Académique Documents
Professionnel Documents
Culture Documents
gradiente de densidad.
INTRODUCCIÓN
La sangre periférica es la fuente primaria de obtención de células mononucleares (linfocitos y monocitos). El proceso
de separación de células mononucleares del resto de los elementos formes de la sangre, se basa en la diferencia de
densidad existente entre ambos (Fig. 1).
Aislamos células mononucleares de sangre periférica o PBMCs (Peripherial Blood Mononuclear Cells), utilizando un
reactivo llamado Lymphoprep para crear un gradiente de densidad.
Cuando ponemos la sangre sobre el Lymphoprep, y lo sometemos a centrifugación, se separan las distintas especies
celulares en función de su densidad. Si tenemos en cuenta que los hematíes y los granulocitos (salvo los basófilos)
tienen una densidad mayor a la del Lymphoprep, éstos caerán al fondo. Por el contrario, las células mononucleares al
tener menor densidad, quedarán por encima del Lymphoprep. Las plaquetas tienen una densidad menor que los
monocitos, por lo que flotan con el plasma, en la parte superior del tubo.
Fig. 1
Fig. 2
Plasma
1.077
(g/ml)
Nube de
Mononucleares
Buffy Coat
(Neutrófilos)
Eritrocitos
La densidad del Lymphoprep es de 1.077 g/ml, y como podemos observar en el gráfico (Fig. 1) no solo aislamos los
linfocitos sino también basófilos y los monocitos, aunque la parte mas abundante es la de linfocitos que son los que nos
interesan en esta práctica.
MÉTODO
A TENER EN CUENTA:
En condiciones de esterilidad, esta técnica se realiza en cabina de flujo laminar, se suele utilizar medio de cultivo RPMI
al hacer la dilución, y los lavados suelen ser dos y también con el medio indicado. Esto es debido a que en el medio de
cultivo crecen muy bien los hongos que lo pueden contaminar (por ello suplementamos el medio con antibiótico –
antifúngico).