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2.

ASPECTOS GENERALES PARA DISEÑAR UN PROCESO DE SEPARACIÓN DE PROTEÍNAS

El diseño de un proceso de recuperación y purificación de proteínas comparte muchas


características con otras actividades de diseño de ingeniería. Para diseñar un proceso o una
operación se requiere:

1. Para satisfacer varias restricciones, como la pureza, la calidad, la temperatura del proceso y el pH,
el rendimiento deseado, etc.

2. Conocer las propiedades de los materiales, por ejemplo, propiedades químicas y bioquímicas,
propiedades termodinámicas y fluidas del material del proceso.

Usando la información y el conocimiento de (1) y (2) para proponer una secuencia de equipos
interconectados en un orden particular.

3.INFORMACIÓN BÁSICA PARA DISEÑAR UN PROCESO DE SEPARACIÓN

El diseño de un proceso para purificar económicamente una proteína, mantener un alto


rendimiento y obtener un producto prácticamente puro y minimizar el costo, requiere cuatro
consideraciones principales:

1. Definir producto final

2. Caracterización del material de partida.

3.Definir posibles tipos de separación y restricciones.

4. Evaluación de la posible integración de procesos.

3.1 DEFINICIÓN DEL PRODUCTO FINAL

Es necesario definir el producto final y tener información sobre su uso. Por ejemplo:

1.¿Cómo se usará el producto?

 Industrial
 Diagnóstico
 Reactivo de laboratorio
 Terapéutico

Las preguntas con respecto a la pureza de uso son vitales (por ejemplo, 80,99 o 99,98%), así como
los rangos permitidos de concentraciones específicas de impurezas.

1. ¿Qué tan grande es el caudal?

Más grande que 3 m3 / h

Menor que 3 m3 / h

3.2 CARACTERIZACIÓN DEL MATERIAL DE PARTIDA

El segundo punto importante es la caracterización del material de referencia. El diseño del proceso
dependerá principalmente de las propiedades físicas, químicas y bioquímicas de los materiales
contaminantes en el caldo original y de las proteínas que constituirán el producto final. Las
propiedades del material de partida estarán determinadas parcialmente por:

1. Su fuente de fermentación

Bacteriano

Levadura

Célula de mamífero

2. ¿Qué tan grande es la concentración celular?

3. El tipo de medio de cultivo utilizado

Presencia de albúmina

Suero de ternera

Presencia de proteasas

Cuerpos sólidos como células enteras o restos celulares

4.Localización del producto

Intracelular

Extracelular

5. Propiedades fisicoquímicas del producto y las proteínas contaminantes en la mezcla final de


proteínas en solución

Carga superficial a diferentes phs y pI

Hidrofobicidad superficial

Peso molecular

Bioespecificidad hacia ciertos ligandos

6. La estabilidad del producto final también es de extrema importancia, ya que esto afectará los tipos
de operaciones que se pueden utilizar, así como los tiempos de congregación y procesamiento que
se pueden anticipar.

3.3 DEFINIR POSIBLES PASOS DE SEPARACIÓN Y RESTRICCIONES

Es necesario tener una base de datos con todos los pasos de separación posibles (Tabla 1) y
considerar todas las restricciones potenciales (Tabla 2).

3.4 EVALUACIÓN DE LA INTEGRACIÓN POTENCIAL DEL PROCESO

Finalmente, el proceso de producción debe tratar de integrar tanto como sea posible, aguas arriba,
fermentación y procesos aguas abajo. Asenjo y Leser (1996) han descrito posibles áreas y niveles de
integración de ingresos. La integración de procesos puede involucrar todo el proceso, partes
específicas de las operaciones de unidades particulares como se muestra en la figura 2. En la tabla
3 se muestran ejemplos de integración de procesos entre fermentación y operaciones posteriores y
entre operaciones posteriores.

El conocimiento que se muestra en las secciones anteriores se puede utilizar para definir un sistema
experto para la selección racional de los procesos de proteínas posteriores.

Tabla 1 Pasos principales y operaciones de la unidad utilizadas en el procesamiento posterior

Etapas Operación Unitaria


Recuperación de proteínas

Separación celular Centrifugación, proceso de membrana (filtración, microfiltración) partición


acuosa en dos fases.

Interrupción celular (solo para Homogeneización, molienda de cuentas, lisis química y enzimática y
proteínas intracelulares) permeabilización.

Separador de residuos (solo Centrifugación, procesos de membrana (microfiltración, ultrafiltración)


para proteínas intracelulares) partición acuosa de dos fases.

Concentración Ultrafiltración, precipita

Purificación de proteínas

Pretratamiento o aislamiento Pretratamiento o aislamiento primario: adsorción por lotes, cromatografía


primario de intercambio iónico, adsorción por afinidad, cromatografía de interacción
hidrofóbica, partición acuosa de dos fases

Cromatografía de interacción hidrofóbica (HIC), cromatografía de


Purificación de alta resolución intercambio iónico de alta resolución, cromografía de afinidad,
cromatografía de quelato de metal (IMAC) cromatografía de tinte-ligad
HPL.
Pulido del producto final
Gel de filtración (GF), cromatografía de intercambio iónico

Tabla 2 Restricciones Potenciales

Restricciones Observaciones
Rango de pH El producto solo es estable en un rango de pH (por ejemplo, 4-9)

Rango de temperatura El producto es estable solo hasta cierta temperatura

Proteasas Eliminación de proteasas, ya que podrían degradar el producto proteico

Cuerpos de inclusión Los cuerpos de inclusión deben solubilizarse y replegarse


Tabla 3

Nivel de integración Acción


Fermentación aguas abajo (el diseño Inmovilización celular, reciclaje celular mediante membranas, uso de
adecuado del paso de fermentación puede cromatografía de lecho expandido después de la fermentación.
proporcionar condiciones para facilitar el flujo
aguas abajo) uso de separación líquido-líquido, uso de lecho expandido para la
Aguas abajo (recuperación y purificación) recuperación de proteínas, uso de cromatografía de interacción
hidrofóbica después de la precipitación con sulfato de amonio