Introducción

La utilización de sustancias orgánicas permite la obtención de energía y elementos

para la construcción de las biomoléculas como carbono, nitrógeno, azufre y fósforo.
Las rutas metabólicas utilizadas para la utilización energética de las sustancias
orgánicas pueden ser clasificadas en dos tipos: oxidativas completas o
fermentativas (oxidativa incompleta). Estas rutas siempre mantienen un estricto
control en su balance de óxido-reducción y su principal contribución a la célula es la
producción de ATP.
El metabolismo de un glúcido puede seguir la vía oxidativa o fermentativa. En vía
oxidativa el aceptor final de electrones debe ser el oxígeno y por consiguiente el
proceso es aerobio y produce poca acidez, mientras que en vía fermentativa el
aceptor final de electrones es un compuesto orgánico y el proceso es anaerobio,
originando mucha acidez en poco tiempo.

Objetivo de la practica
Identificar y clasificar las rutas metabólicas de asimilación de sustratos como
fermentativa u oxidativa a partir del potencial que posee el microorganismo para
crecer y utilizar los diferentes sustratos.
Materiales y métodos
 Asas microbiológicas rectas.
 Cortes de papel Kraft.
 Micropipetas de 20 y 200μL.
 Puntas estériles para las micropipetas anteriores.
 Placas estériles de 96 pozos.
 Estereoscopio.
 Kit de coloración de Gram.
 Medios Hugh and Leifson.
 Solución salina 0.9%
 Medio de cultivo MBS agar (3g/L) suplementado con azul de bromotimol
50mg/L y
 1% de glucosa.
 1% de almidón soluble.
 1% arabinosa.
 1% celobiosa.
 1% de galactosa
 1% de Manitol
 1% de ácido glutámico
 1% de arginina
  1% de fenilalanina
 1% de glicina.
 Aceite mineral estéril.
 Hipoclorito 3 %.
 Etanol 70 %
Métodos
Procedimiento: Se realizo una observación microscópica del microorganismo dado por la
profesora. Posteriormente el tubo que contenía el microorganismo fue llevado a la
centrifugadora por 10 minutos, luego se elimino el sobrenadante quedando solo el pellet en
el fondo al cual se le añadió 5,5 ml de solución salina. Luego se llevó nuevamente a la
centrifugadora por 10 minutos, se descartó el sobre andante y se le adiciono 5,5 ml de
solución salina para poder realizar la macrotecnica y la microtecnica.
Después de lo anteriormente mencionado se realizó la macrotecnica la cual consistía en
tomar el asa recta e inocular en dos tubos de Hugh/Leifson de los cuales a uno se le añadio
aceite para potenciar la anaerobiosis.
Para finalizar se realizo microtecnica que consistía en adicionar a los diferentes pozos de
la placa su respectivo reactivo, dónde a los pozos de color rojo se le adiciono agua destilada
estéril, a los posos internos se les añadio MBS suplementado azul de bromotimol y el
respectivo sustrato a evaluar. Posteriormente se le adiciono el microorganismo a cada
pozo menos a los azules que correspondían a los controles. Los pozos de color amarillo se
les añadió aceite para obtener un medio anaerobio.
Antes de incubar la placa esta fue envuelta en papel Parafilm y fue incubada a mas o menos
37°C por menos de 24h. para finalizar al día siguiente se detalló y se registró el crecimiento
y el tipo de metabolismo que produce el microorganismo en base a los sustratos utilizados
en la práctica.

Bibliografía
Madigan, M. Martinko, J. Dunlap, P. Clark,D., ( 2009). Brook biología de los
microorganismos. Madrid, España. Pearson Education S.A