Beltrán Unda Cuaderno de Enzimología PDF

ESCUELA CUADERNO DE
POLITÉCNICA
DEL EJÉRCITO ENZIMOLOGÍA
INGENIERÍA EN BIOTECNOLOGÍA
AUTORES: Beltrán Audrey
Unda Mateo
26-06-2013
CUADERNO DE ENZIMOLOGÍA 2013
ÍNDICE
UNIDAD I .................................................................................................................................................... 5
1. TERMINOLOGÍA ............................................................................................................................ 5
1.1. Enzimología .............................................................................................................................. 5
1.2. Importancia de la enzimología .................................................................................................. 5
1.3. Aplicaciones de la enzimología ................................................................................................ 5
1.4. Enzimas ..................................................................................................................................... 6
1.5. Grupo prostético........................................................................................................................ 7
1.6. Apoenzima ................................................................................................................................ 7
1.7. Coenzima .................................................................................................................................. 7
1.8. Cofactor..................................................................................................................................... 7
1.9. Holoenzima ............................................................................................................................... 7
1.10. Centro activo ......................................................................................................................... 7
1.11. Sitio alostérico ...................................................................................................................... 8
1.12. Proteína ................................................................................................................................. 8
1.13. Polipéptido ............................................................................................................................ 8
1.14. Aminoácido ........................................................................................................................... 8
1.15. Enlace peptídico .................................................................................................................. 11
2. DISOCIACIÓN DE AMINOÁCIDOS ........................................................................................... 11
2.1. Solución tampón ..................................................................................................................... 13
2.2. Ecuación de Henderson-Hasselbalch ...................................................................................... 13
3. CLASIFICAIÓN DE LAS ENZIMAS ........................................................................................... 14
3.1. Oxido-reductasas..................................................................................................................... 15
3.2. Tranferasas .............................................................................................................................. 20
3.3. Hidrolasas ............................................................................................................................... 21
3.4. Liasas ...................................................................................................................................... 21
3.5. Isomerasas ............................................................................................................................... 22
3.6. Ligasas .................................................................................................................................... 22
4. DEGRADACIÓN DE LA GLUCOSA ........................................................................................... 23
4.1. Glucólisis ................................................................................................................................ 23
4.2. Complejo piruvato deshidrogenasa ......................................................................................... 26
1
4.3. Ciclo de Krebs......................................................................................................................... 27

4.4. Fermentación láctica ............................................................................................................... 30
4.5. Fermentación alcohólica ......................................................................................................... 30
4.6. Cadena respiratoria ................................................................................................................. 31
5. DEGRADACIÓN TOTAL DE LA GLUCOSA ............................................................................. 31
6. COENZIMAS Y COFACTORES .................................................................................................. 32
6.1. Vitaminas ................................................................................................................................ 32
6.2. Iones metálicos........................................................................................................................ 37
6.3. Estructura de coenzima A ....................................................................................................... 38
7. ENERGÍA DE ACTIVACIÓN ....................................................................................................... 38
8. FACTORES QUE CONTRIBUYEN A LA EFICACIA CATALÍTICA ....................................... 39
8.1. Orientación y aproximación .................................................................................................... 39
8.2. Tensión y distorsión-acoplamiento inducido .......................................................................... 40
8.3. Catálisis general ácido-base .................................................................................................... 40
8.4. Catálisis covalente................................................................................................................... 41
8.5. Temperatura ............................................................................................................................ 41
8.6. pH............................................................................................................................................ 42
8.7. Concentración del sustrato ...................................................................................................... 42
9. LEY DE ACCIÓN DE MASAS ..................................................................................................... 43
10. MOLECULARIDAD .................................................................................................................. 44
11. ORDEN DE REACCIÓN ........................................................................................................... 44
12. ESTADO ESTACIONARIO ...................................................................................................... 47
12.1. Número de recambio ........................................................................................................... 48
12.2. Kcat ..................................................................................................................................... 48
12.3. Unidad Internacional ........................................................................................................... 48
12.4. Actividad Total ................................................................................................................... 48
12.5. Actividad Específica ........................................................................................................... 48
12.6. Grado de Purificación ......................................................................................................... 48
13. ECUACIÓN DE MICHAELIS Y MENTEN CON ESTADO ESTACIONARIO ..................... 49
14. METODOS DE LINEALIZACIÓN ........................................................................................... 50
14.1. Linewawer y Burk............................................................................................................... 50
2
14.2. Eadie y Hofstee ................................................................................................................... 51

14.3. Hans-Wolf ........................................................................................................................... 51
15. DETERMINACIÓN APROXIMADA DE LA CANTIDAD DE SUSTRATO ......................... 52
16. EJERCICIOS .............................................................................................................................. 53
16.1. Ejercicio 1 ........................................................................................................................... 53
16.2. Ejercicio 2 ........................................................................................................................... 54
16.3. Ejercicio 3 ........................................................................................................................... 55
UNIDAD II ................................................................................................................................................. 56
17. PODER CATALÍTICO............................................................................................................... 56
18. INFLUENCIA DE LA FUERZA IÓNICA EN LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA ................... 56
19. CONSTANTE DE ESPECIFICIDAD ........................................................................................ 57
20. EFECTOS DEL pH EN LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA ....................................................... 57
20.1. Forma general ..................................................................................................................... 58
20.2. Función de Michaelis .......................................................................................................... 59
20.3. Ionizaciones ........................................................................................................................ 61
21. INHIBICIÓN ENZIMÁTICA..................................................................................................... 65
21.1. Inhibición reversible ........................................................................................................... 65
21.2. Inhibición irreversible ......................................................................................................... 77
22. APLICACIONES DE LOS INHIBIDORES .............................................................................. 78
23. RESUMEN DE INHIBIDORES REVERSIBLES ..................................................................... 78
24. EJERCICIOS DE INHIBICIÓN ................................................................................................. 78
24.1. Ejercicio 1. .......................................................................................................................... 78
24.2. Ejercicio 2. .......................................................................................................................... 80
25. EJERCICIOS DE pH .................................................................................................................. 83
25.1. Ejercicio 1. .......................................................................................................................... 83
25.2. Ejercicio 2. .......................................................................................................................... 86
UNIDAD III ................................................................................................................................................ 88
26. ACTIVADORES ........................................................................................................................ 88
27. REACCIONES MULTISUSTRATO ......................................................................................... 88
27.1. Método King Altman .......................................................................................................... 88
27.2. Formación Bi-Bi Ordenado (Secuencial Ordenado) ........................................................... 90
3
27.3. Formación Bi-Bi al Azar (Secuencial al Azar) ................................................................... 93

27.4. Formación Ping-Pong ......................................................................................................... 95
27.5. Inhibición por productos ..................................................................................................... 97
28. INTERACCIÓN LIGANDO-PROTEÍNA ................................................................................. 97
29. TRATAMIENTO DE SCATCHARD ........................................................................................ 98
30. TRATAMIENTO DE HILL ..................................................................................................... 100
30.1. Ecuación experimental de Hill .......................................................................................... 100
30.2. Linealización de la ecuación de Hill ................................................................................. 102
31. RAZÓN DE SATURACIÓN (RS) ........................................................................................... 103
32. PROTEÍNAS ALOSTÉRICAS................................................................................................. 104
32.1. Modelo concertado de Monod, Wyman y Changeux (MWC) .......................................... 104
32.2. Modelo secuencial............................................................................................................. 106
33. EJERCICIOS ............................................................................................................................ 107
33.1. Ejercicio 1 ......................................................................................................................... 107
33.2. Ejercicio 2 ......................................................................................................................... 109
33.3. Ejercicio 3 ......................................................................................................................... 111
33.4. Ejercicio 4 ......................................................................................................................... 113
GLOSARIO .......................................................................................................................................... 117
BIBLIOGRAFIA .................................................................................................................................. 121
4
UNIDAD I
1. TERMINOLOGÍA
1.1. Enzimología.- Disciplina bioquímica centrada en el estudio y caracterización de

las enzimas, que son biomoléculas proteicas o ribonucleicas que catalizan reacciones
químicas en los sistemas biológicos.
1.2. Importancia de la enzimología.- Su importancia radica en que existe una variedad

enorme de reacciones bioquímicas que comprenden la vida, las mismas que están
mediadas casi en su totalidad por un conjunto de catalizadores biológicos1.
1.3. Aplicaciones de la enzimología.- Esta disciplina es utilizada en una amplia gama de

campos en los cuales se requiera el uso de catalizadores especializados. Dentro de las
aplicaciones se puede encontrar2:
 Enzimología Médica.- Aplicaciones de las enzimas como fármacos y como
objetivos moleculares de la acción de fármacos, en diversas enfermedades
humanas.
 Enzimología Veterinaria.- Aplicaciones de las enzimas en sanidad y en
nutrición de animales, destacando sus repercusiones en ganadería y
acuicultura.
 Enzimología Farmacéutica.- Aplicaciones de las enzimas en la extracción y
síntesis estereoespecífica de nuevos fármacos, destacando la importancia de
las biotecnologías de Diseño Molecular y de Exploración de Alto
Rendimiento.
 Enzimología Agraria.- Aplicaciones de las enzimas como objetivos
moleculares en la mejora de cultivos agrarios (productividad, enfermedades,
plaguicidas, etc.) y en biotecnologías posrecolección (atmósferas controladas
y modificadas, etc.).
 Enzimología Alimentaria.- Aplicaciones de las enzimas como
biocatalizadores y como objetivos moleculares, en la extracción, procesado y
elaboración de alimentos.
 Enzimología y Energía.- Aplicaciones de las enzimas en la extracción de
petróleo y en la producción de biocombustibles renovables (bioetanol,
biometano, etc).
 Enzimología y Materiales.- Aplicaciones de las enzimas en la producción de
pasta, papel, corcho, polímeros inteligentes, polímeros con impresión
molecular, plásticos biocatalíticos, etc.
5
 Enzimología Textil.- Aplicaciones de las enzimas en la elaboración de tejidos

(algodón, lana, seda, cuero, etc.) y en la producción de detergentes
(glucosidasas, lipasas, proteasas, etc.).
 Enzimología Química.- Aplicaciones de las enzimas en la síntesis de
productos químicos, finales e intermedios, utilizados en múltiples sectores
industriales.
 Enzimología Medioambiental.- Aplicaciones de las enzimas en el bioanálisis
y en la biodepuración de contaminantes industriales, destacando su
integración en las labores de Gestión Medioambiental (Normas ISO 14000) y
Gestión de la Calidad (Normas ISO 9000), imprescindibles para las
actividades de las empresas dedicadas a la Biotecnología.
 Enzimología Aplicada de PPO.- Aplicaciones de PPO como objetivo
molecular de fármacos antitumorales, despigmentantes epidérmicos y
antipardeantes en la elaboración de productos alimentarios derivados de frutas
y hortalizas
 Enzimología Industrial.- Aplicaciones de las enzimas en la elaboración de
zumos de frutas y alimentos lácteos.
1.4. Enzimas
Compuestos orgánicos encargados de aumentar la velocidad con que una reacción
química alcanza el equilibrio disminuyendo la energía de activación de las moléculas
que participan.
1.4.1. Características de las enzimas

 Catalizadores biológicos u orgánicos.
 Aceleran las reacciones biológicas o de procesos.
 Formado por aminoácidos.
 Todos lo enzimas son proteínas, pero no todas las proteínas son
enzimas.
 Poseen peso molecular de 12x103.
 Tienen especificidad por el sustrato.
 No dejan subproductos.
 No sufren cambios o modificaciones.
 Actúan en medios acuosos.
 Mantienen el equilibrio.
 Poseen un sitio activo y un sitio catalítico (lugar donde se da la
transformación). Fig. 1
6
Fig. 1 Sitio activo y sitio catalítico del enzima
 Tripsina.- Enzima proteolítica que hidroliza los aminoácidos que

tienen carga positiva. Ejemplo:
Ala – Gly – Phe – Asp – Lys – Met – Tyr – Cys – His
 Quimotripsina.- Rompe enlaces peptídicos provenientes de

aminoácidos aromáticos. Ejemplo:
Ala – Gly – Phe – Asp – Lys – Met – Tyr – Cys – His
1.5. Grupo prostético.- Cuando el cofactor y coenzima o uno de los dos está unido en
forma íntima o permanente a la apoenzima.
1.6. Apoenzima.- Parte proteica de la enzima formada sólo por aminoácidos.
1.7. Coenzima.- Compuesto orgánico complejo diferente a los aminoácidos, son

coenzimas el NAD, FAD, CoA, moléculas que tienen en su estructura vitaminas3.
1.8. Cofactor.- Activador inorgánico del enzima que actúa induciendo reordenamientos
eléctricos adecuados para la unión enzima-sustrato. Generalmente son iones metálicos
como Fe3+, Mg2+, Mn2+, Zn2+, etc.
1.9. Holoenzima.- Es la enzima catalíticamente completa.

Apoenzima + Grupo prostético (Coenzima + Cofactor).
1.10. Centro activo.- Este centro al ser la región que se une al sustrato, contiene los
residuos que participan directamente en la producción y ruptura de enlaces. Los
residuos son denominados grupos catalíticos4.
7
1.11. Sitio alostérico.- Sitio de unión diferente al sitio activo.
1.12. Proteína.- Polímero formado por polipéptidos.
1.13. Polipéptido.- Formado por 5 o más aminoácidos.
1.14. Aminoácido.- Compuesto orgánico anfótero que tiene un grupo carboxilo o grupo
ácido y un grupo amino o grupo básico.
Aminoácido proteico Aminoácido no proteico

COOH COOH
H2N CH H C H
Grupo amino en CH2 CH2

carbono α
R
CH3 H2N CH2
1.14.1. Estructura de aminoácidos5
1.14.1.1. Aminoácidos básicos
8
1.14.1.2. Aminoácidos ácidos
1.14.1.3. Aminoácidos apolares
9
1.14.1.4. Aminoácidos polares
1.14.1.5. Aminoácidos aromáticos
10
1.15. Enlace peptídico.- Enlace entre el grupo amino (–NH2) de un aminoácido y el grupo
carboxilo (–COOH) de otro aminoácido.
La formación de un dipéptido por la unión de dos aminoácidos mediante un enlace
peptídico. Fig. 2
Fig. 2 Dipéptido
2. DISOCIACIÓN DE AMINOÁCIDOS
Se disocia el grupo carboxilo
0 7 14
Se disocia el grupo amino
 En pH = 7 todo el grupo carboxilo está disociado.

 Cuando son equimolares no se les puede dar carga.
 El grupo ácido es el donador.
 El grupo amino es el aceptor.
 La carga positiva migra al cátodo.
 La carga negativa migra al ánodo.
11
 Los grupos amino se deben disociar en básico.

 El punto isoeléctrico no siempre es en pH = 7; debe ser siempre cuando la carga es
cero.
 Un aminoácido simple (un COOH y un NH3) tiene dos zonas de tamponamiento, una
en medio ácido (disociación parcial del grupo carboxilo) y otra en medio básico
(disociación parcial del grupo amino).
Ejemplos:
1. Realizar la disociación de la glicina y la curva de disociación indicando cada curva
en el gráfico.
COOH COO- 2 COOH

1
H3N+ CH H3N+ CH H3N+ CH
H H H
pH = 1 pH = 3.5
Carga = +1 Equimolar; zona de tamponamiento
3 COO- COO- 4 COO-
H3N+ CH H3N+ CH H2N CH
H H H
pH = 7 pH = 9
Carga = 0; PI Equimolar; zona de tamponamiento
COO-
5
H2N CH
H
pH = 11
Carga = -1
12
Fórmulas: PI = ½ (pka + pkb)
pk = -log ka
pH = -lg [H+]
pH = pka
2.1. Solución tampón

El pH de los medios biológicos es una constante fundamental para el mantenimiento
de los procesos vitales. La acción enzimática y las transformaciones químicas de las
células se realizan dentro de unos estrictos márgenes de pH.
Los sistemas encargados de evitar grandes variaciones del valor de pH son los
denominados amortiguadores, buffers o tampones. Son polo general soluciones de
ácidos débiles y de sus bases conjugadas o de bases débiles y sus ácidos conjugados.
Los amortiguadores resisten tanto a la adición de ácidos como de bases. La capacidad
reguladora de la disolución tampón es máxima cuando las concentraciones de ácido y
sal son iguales.
2.2. Ecuación de Henderson-Hasselbalch

La concentración de H+ está vinculada a la naturaleza del electrolito débil.
Considerando un ácido débil, de modo genérico como HAc, su quilibrio de
disociación sería:
13
HAc Ac- + H+
Aplicando la ley de acción de masas, la constante de equilibrio K será:
Despejando (H+):
Aplicando –log:
-log (H+) = -log K –log (HAc) + log (Ac-)
Si:
-log (H+) = pH
-log K = pK
Se obtiene la ecuación de Henderson-Hasselbalch:
Si en la ecuación la concentración de ácido es igual a la de la base, el cociente es 1,

siendo el log de 1 = 0, teniendo:
Por lo tanto el pK es el valor de pH de una solución amortiguadora en el que el ácido

y la base se encuentran a concentraciones equimolares o al 50% cada una.
3. CLASIFICAIÓN DE LAS ENZIMAS

La Unión Internacional de Bioquímica y Biología Molecular asigna un número a cada
enzima y clasifica a las enzimas en seis grupos importantes de acuerdo a la clase de
reacciones que catalizan.
La codificación consta de 4 dígitos:
Primero: Clase 1-6
Segundo: Subclase
Tercero: Sub- subclase
Cuarto: Sustrato
14
3.1. Oxido-reductasas
Actúan en reacciones de oxidoreducción, por medio del hidrógeno, oxígeno o con el
transporte de electrones (ganancia o pérdida)6.
Dentro de este grupo se encuentran:
 Oxidasas.- Transportan electrones desde un dador hacia el oxígeno.
Ejemplo: Glucosa oxidasa; utilizada en biosensores para detectar los niveles
de glucosa.
 Oxigenasas.- Incorporan el oxígeno al sustrato de la molécula, formando un
nuevo grupo hidroxilo o carbonilo.
Se distinguen dos tipos:
 Monooxigenasas.- Transfieren un átomo de oxígeno al sustrato y
reduce el otro oxígeno a agua.
Ejemplo: Enzimas catalizadas por el citocromo P-450.
 Dioxigenasas.- Transfieren al sustrato ambos átomos de oxígeno de la

molécula.
Ejemplo: Triptófano 2,3-dioxigenasa; rompe el anillo de 5 carbonos
en el indol del triptófano.
 Peroxidasas.- Catalizan reacciones bisustrato de carácter redox, utilizando un

peróxido como oxidante y un segundo sustrato de características reductoras
que es el oxidado por e peróxido. Utiliza el grupo hemo como cofactor.
Ejemplo: Los fenoles pueden eliminarse mediante su polimerización
catalizada mediante la peroxidasa de Amoracia rusticana, para el tratamiento
industrial de aguas contaminadas.
 Deshidrogenasas.- Catalizan la oxidación o reducción de un sustrato por

sustracción o adición de dos átomos de hidrógeno, empleando un par de
coenzimas que actúan como aceptores o donadores.
Ejemplo: Lactato deshidrogenasa que cataliza la reacción de piruvato a
lactato.
3.1.1. Coenzimas de las óxido-reductasas

NAD+: Dicnucleótido de adenina y nicotinamida (Fig. 10).
NADP+: Fosfato de dinucleótido (Fig. 12).
FMN: Mononucleótido de flavina (Fig.14 ).
FAD: Dinucleótido de adenina y flavina (forma dobles enlaces; ejemplo
reacción 6 de Ciclo de Krebs) (Fig. ).
15
El NAD+ y NADP+ se encargan del transporte transitorio de iones hidruro (H-)

El FAD y FNM se encargan del transporte transitorio de átomos de hidrógeno.
3.1.1.1. Bases nitrogenadas

Compuestos orgánicos cíclicos, que incluyen dos o más átomos de
nitrógeno. Son parte fundamental de los nucleósidos, nucleótidos,
nucleótidos cíclicos, dinucleótidos y ácidos nucleicos.
Biológicamente existen seis bases nitrogenadas, las cuales se clasifican en
purinas y pirimidinas.
 Purinas.- Compuesto orgánico heterocíclico aromático, formado por
dos anillos fusionados, uno de seis átomos y el otro de cinco. Siendo
purinas la adenina (Fig. 3) y la guanina (Fig. 4).
Fig. 3 Adenina Fig. 4 Guanina
 Pirimidinas.- Compuesto orgánico con un anillo heterocíclico (dos

átomos de nitrógeno sustituyen al carbono en las posiciones 1 y 3. Son
pirimidinas la timina (Fig. 5), citosina (Fig. 6) y uracilo (Fig. 7).
Fig. 5 Timina Fig. 6 Citosina Fig. 7 Uracilo
16
3.1.1.2. Nucleótidos.- Moléculas orgánicas formadas por la unión covalente

de un monosacárido de cinco carbonos (pentosa), una base
nitrogenada y un grupo fosfato; siendo el nucleósido la parte del
nucleótido formado únicamente por la base nitrogenada y la pentosa.
Fig. 8 Nucleótido
Fig. 9 Nicotinamida
17
Fig. 10 NAD+ Fig. 11 NADH + H+
Fig. 12 NADP+ Fig. 13 NADPH + H+
18
Fig. 14 FMN Fig. 15 FMNH2
Fig. 16 FAD
19
Fig. 17 FADH2
3.2. Tranferasas.- Transfieren grupos de un sustrato a otro. Grupos como aminas,

carboxilo, carbonilo, metilo, acilo, glicosilo, fosforilo. Dentro de este grupo se
encuentran las quinasas.
Participan en reacciones de transaminación (transaminasas), formación de nuevos
aminoácidos a partir de una fuente de nitrógeno.
3.2.1. Reacción de transaminación

Condición:
 Exista fuente de nitrógeno.
 Exista esqueleto carbonado que sea α-oxo-ácido.
 Presencia de enzimas.
Ejemplo:
COO- COO- COO- COO-

B6
H3N+ CH C O C O H3N+ CH
CH3 CH2 Transaminasa CH3 CH2
COO- COO-
 La coenzima de la transaminasa es la vitamina B6 o piridoxina (Fig.

18).
 Las partes de la vitamina B6 son el piridoxal (Fig. 19) y la
piridoxamina (Fig. 20).
20
 Para que el piridoxal se active, debe convertirse en fosfato piridoxal; el

cual recepta transitoriamente el grupo amino.
Fig. 18 Piridoxina Fig. 19 Piridoxal
Fig. 20 Piridoxamina
3.3. Hidrolasas.- Enzimas que catalizan reacciones de hidrólisis, cuya característica

básica es tener el agua como sustrato.
Ejemplo:
Enzima: Tripsina.
Descripción de la reacción: Hidrólisis de enlaces peptídicos.
Coenzima: Ninguna.
3.4. Liasas.- Enzimas que participan en la transferencia de grupos al doble enlace. Una
liasa que cataliza una reacción de adición en células se denomina sintasa.
Incluyen: Carboxilasas, aldolasas (rompimiento de un compuesto), descarboxilasas.
Ejemplo:
Enzima: Piruvato descarboxilasa.
Descripción de la reacción: Descarboxilación de piruvato.
Coenzima: Tiamina pirofosfato.
21
3.5. Isomerasas.- Catalizan reacciones de isomerización; distribución de los átomos en el

espacio. Debido a que solo tienen un sustrato y un producto, estas reacciones son las
más sencillas.
Incluyen: Isomerasas, racenmasas, epimerasas, mutasas.
 Isomerasas.- Distribución de los átomos en el espacio.
 Epimerasas.- Posición α y β.
 Mutasas.- Transferencia de grupos de un lugar a otro pero en el
mismo compuesto.
3.6. Ligasas.- Catalizan la unión C-C, C-H, C-O, a expensas del rompimiento hidrolítico
de un trifosfato. A estas enzimas se las denomina sintetasas.
Fig. 21 ATP (Adenosín trifosfato)
Ejemplo:
Enzima: Glutamina sintetasa.
Descripción de la reacción: Síntesis de L-glutamina dependiente de ATP.
Coenzima: ATP.
22
4. DEGRADACIÓN DE LA GLUCOSA
Glucosa
(C6H12O6)
10 Reacciones
2 CH3 – C – COO- (Piruvato)

Medio anaerobio Medio anaerobio
facultativo estricto
Aerobia
Alcohólica Ciclo de Krebs Láctica
Cadena respiratoria
4.1. Glucólisis
Reacción 1: α-D-Glucosa + ATP α-D-Glucosa 6-fosfato + ADP + H+
23
Reacción 2: α-D-Glucosa 6-fosfato α-D-Fructosa 6-fostato
Reacción 3: α-D-Fructosa 6-fostato + ATP α-D-Fructosa 1,6-bifosfato + ADP

+ H+
Reacción 4: α-D-Fructosa 1,6-bifosfato Dihidroxiacetona fosfato +

Gliceraldehído 3-fosfato
24
Reacción 5: Dihidroxiacetona fosfato Gliceraldehído 3-fosfato
Reacción 6: 2Gliceraldehído-3-fosfato + 2Pi + 2NAD+ 2(1,3-bifosfoglicerato)

+ 2(NADH + H+)
Reacción 7: 2(1,3-bifosfoglicerato) + 2ADP 2(3-fosfoglicerato) + 2ATP
Reacción 8: 2(3-fosfoglicerato) 2(2-fosfoglicerato)
25
Reacción 9: 2(2-fosfoglicerato) 2 fosfoenolpiruvato
Reacción 10: 2 fosfoenolpiruvato + ADP + H+ 2 piruvato + ATP
4.2. Complejo piruvato deshidrogenasa
COO- SCoA
C O E1, E2, E3
C O + CO2
CH3 CH3
Piruvato Acetil CoA
Enzima Coenzima
26
E1: Piruvato deshidrogenasa Tiamina pirofosfato (TPP)
E2: Dihidrolipoil transacetilasa Lipoamida, coenzima A
E3: Dihidrolipoil deshidrogenasa FAD, NAD
4.3. Ciclo de Krebs

Reacción 1: Acetil CoA + oxalacetato + H2O Citrato + CoA + H+
Reacción 2: Citrato Cis-aconitato Isocitrato
Reacción 3: Isocitrato + NAD+ α-cetoglutarato + CO2 + NADH + H+
27
Reacción 4: α-cetoglutarato + NAD+ + CoA Succinil CoA + CO2 + NADH

+ H+
Reacción 5: Succinil CoA + Pi + ADP Succinato + ATP + CoA
28
Reacción 6: Succinato + FAD Fumarato + FADH2
Reacción 7: Fumarato + H2O L-malato
Reacción 8: L-malato + NAD+ Oxalacetato + NADH + H+
29
4.4. Fermentación láctica
4.5. Fermentación alcohólica
30
4.6. Cadena respiratoria
5. DEGRADACIÓN TOTAL DE LA GLUCOSA
Ruta 1: Degradación total de la glucosa por vía anaerobia estricta

Glucólisis:
Glucosa + 2(ADP+Pi) + 2NAD+ 2 Piruvato + 2(NADH+H+) + 2H2O + 2ATP
Fermentación láctica:
2 Piruvato + 2(NADH+H+) 2 Lactato + 2NAD+
Glucosa + 2(ADP+Pi) 2 Lactato + 2H2O + 2ATP
Ruta 2: Degradación total de la glucosa por vía anaerobia facultativa

Glucólisis:
Fermentación alcohólica:
2 Piruvato + 2(NADH+H+) 2 Etanol + 2CO2 + 2NAD+
Glucosa + 2(ADP+Pi) 2 Etanol + 2CO2 + 2H2O + 2ATP
31
Ruta 3: Degradación total de la glucosa por vía aerobia

Glucólisis:
Sistema multienzimático:
2 Piruvato + 2 CoA + 2NAD+ + 2H2O 2 Acetil CoA + 2HCO3 + 2(NADH+H+)
Ciclo de Krebs:
2 Acetil CoA + 6NAD+ + 2FAD+ + 2(GDP+Pi) + 4H2O 4CO2 + 6(NADH+H+) +
2FADH2 + 2GTP + 2 CoA
Cadena respiratoria:
10(NADH+H+) + 30(ADP+Pi) + 5O2 30ATP + 10NAD+ + 40H2O
2FADH2 + 4(ADP+Pi) + O2 4ATP + 2FAD+ + 6 H2O
Glucosa + 38(ADP+Pi) + 6O2 4CO2 + 38ATP + 42H2O
La ruta 2 y la ruta 3 son irreversibles debido a que intervienen descarboxilasas.
6. COENZIMAS Y COFACTORES
6.1. Vitaminas
Las vitaminas son sustancias químicas no sintetizadas por el organismo presentes en los
alimentos e indispensables para la vida. No producen energía pero actúan como coenzimas o
como precursores de coenzimas. Se clasifican en liposolubles e hidrosolubles.
6.1.1. Vitaminas liposolubles

Tipo de vitamina Forma activa Tipo de reacción Enzima
Vitamina A Retinol, retinal, ácido Ciclo visual

retinóico, 3-deshidroretinol
Vitamina D Ergocalciferol, 1,25- Regulación del Ca2+

dihidroxicalciferol
Vitamina E Α,β,γ y δ-tocoferol, Α,β,γ y Protección de lípidos

δ-tocotrienol de membrana
32
Vitamina K Filoquinona, menaquinona, Cofactor de Ligasas,

menadilona carboxilasas carboxilasas
Tipo de vitamina Estructura
Vitamina A
Vitamina D
Vitamina E
Vitamina K
33
6.1.2. Vitaminas hidrosolubles
Tiamina (B1) Fosfato de tiamina Descarboxilación de Liasas,

α-cetoácidos descarboxilasas
Riboflavina (B2) FMN, FAD, Coenzima de Óxidorreductasas

fosforriboflavina óxidorreductasas
Ácido nicotínico (B3) NAD, NADP Coenzima de Óxidorreductasa

óxidorreductasas
Ácido pantoténico Coenzima A Transferencia de Transferasas

(B5) grupos acilo
Piridoxina (B6) Piridoxina, piridoxamina, Transferencia de Transferasas ,

piridoxal, fosfato de grupos amino transaminasas
piridoxal
Biotina (B7) Biocitina, D-biotina Transferencia de Transferasas

CO2
Ácido fólico (B9) Ácido fólico, ácido Coenzima de Óxidorreductasas,

tetrahidrofólico hidroxilación oxigenasas
Cobalamina (B12) Desoxiadenosil cobalamina, Desplazamiento de Isomerasas

hidroxicobalamina hidrógenos
Ácido ascórbico (C) Ácido ascórbico, ácido Reacciones de Óxidorreductasas,

deshidroascórbico hidroxilación oxigenasas
34
Tiamina (B1)
Riboflavina (B2)
Ácido nicotínico (B3)
Ácido pantoténico (B5)
Piridoxina (B6)
35
Biotina (B7, B8, H)
Ácido fólico (B9)
Cobalamina (B12)
Ácido ascórbico (C)
36
6.2. Iones metálicos

Los iones metálicos actúan como cofactores de ciertas enzimas.
Elemento Función Enzima
Fe+2 Oxidación aldehídos, Óxidorreductasas

transporte de electrones
Cu+2 Oxidación de ácido úrico, Óxidorreductasas

transporte de oxígeno
Zn+2 Intercambio de CO2, rotura de Óxidorreductasas,

enlaces DNA, RNA transferasas, liasas, hidrolasas
Mn+2 Transferencia de fosfatos, Transferasas, liasas

conversión a piruvato
Mg+2 Fotosíntesis, transferencia de Transferasas, liasas

radicales en pentosas
Ni+2 Degradación de urea Hidrolasas
Se-2 Protección contra daño por Óxidorreductasas

oxidación
K+ Fermentación láctica Óxidorreductasas
37
6.3. Estructura de coenzima A
7. ENERGÍA DE ACTIVACIÓN
Las enzimas disminuyen la energía de activación que es la cantidad de energía expresada en
calorías para llevar todas las moléculas de 1 mol de sustancia a una temperatura determinada al
estado de transición.
38
Cambio energético:
En el equilibrio:
8. FACTORES QUE CONTRIBUYEN A LA EFICACIA CATALÍTICA
8.1. Orientación y aproximación

Los enzimas se unen al sustrato de tal modo que el enlace susceptible no solamente se hace
próximo al grupo catalítico sino también que esté orientado de modo preciso que el complejo
enzima sustrato alcance un estado de transición.
39
NO orientación NO orientación SI orientación
NO aproximación SI aproximación SI aproximación
NO complejo ES NO complejo ES SI complejo ES
8.2. Tensión y distorsión-acoplamiento inducido

La unión del sustrato puede inducir a un cambio en la conformación del enzima que pone en
tensión la estructura del dentro activo y distorsiona al sustrato unido colaborando a llevar al
complejo enzima sustrato al estado de transición. Este cambio se llama el acoplamiento inducido
del enzima hacia el sustrato.
8.3. Catálisis general ácido-base

Los sitios activos del enzima pueden proporcionar grupos R de residuos de aminoácidos del sitio
activo que son buenos aceptores y dadores de los mismos. Estos grupos son potentes
catalizadores para muchas reacciones en sistemas acuosos.
Ácido: solución dadora de protones H+
Base: solución receptora de protones H+
40
8.4. Catálisis covalente

Los enzimas reaccionan con sustratos para formar el complejo enzima sustrato unido por
covalencia y muy estables que experimentan una reacción ulterior para formar productos con
mucha facilidad.
Compuesto covalente: compartición de electrones con un No metal
8.5. Temperatura
Por cada 10 °C de aumento en la temperatura la velocidad aumenta a 2 a 4 veces hasta llegar a la
velocidad máxima a una temperatura óptima, luego existe la desnaturalización del enzima con
una disminución de la velocidad.
41
8.6. pH
Cada enzima presenta un pH óptimo.
8.7. Concentración del sustrato

La concentración del sustrato aumenta la velocidad de reacción catalizada por un enzima, a
mayor cantidad de sustrato mayor velocidad manteniendo la concentración de enzima constante.
La velocidad de reacción es directamente proporcional a la concentración del sustrato hasta
alcanzar la velocidad máxima, si hay un exceso de sustrato entonces la velocidad disminuye.
Manteniendo la concentración de enzima constante se obtiene la hipérbola de Michaelis y

Menten que corresponde a la ecuación:
42
Dónde:
Velocidad inicial
Velocidad máxima
Concentración de sustrato
Constante de Michaelis
Km es la constante característica del sustrato, nos determina la afinidad del sustrato por el
enzima. A menor Km mayor afinidad del sustrato por ese enzima. Tiene un orden de 10 -3-10-6.
Está determinada a un medio de en unidades de molaridad.
9. LEY DE ACCIÓN DE MASAS

También conocido como Principio de acción de masas. Nos dice que la velocidad de reacción es
directamente proporcional a la concentración de reactivos.
Constante de equilibrio:
En equilibrio se tiene:
43
También la velocidad de reacción es simplemente los cambios de la concentración de una

especie con el tiempo y podemos escribir de forma diferencial.
10. MOLECULARIDAD
Es el número de moléculas involucradas en una reacción simple.
Reacción Molecularidad Unidad de constante de

velocidad
Molecularidad 1, uni-uni K=s-1
Molecularidad 2, bi-uni K=M-1s-1
Molecularidad 3, tri-bi K=M-1s-2
11. ORDEN DE REACCIÓN

Es la suma de los coeficientes de cada reactante. Para determinar el orden (método experimental)
si tenemos más de un reactante, se mantiene constante al uno.
44
Manteniendo [B] constante:
Aplicando logaritmos se puede linealizar para obtener curva de vs
Manteniendo [A] constante:
Aplicando logaritmos se puede linealizar para obtener curva de vs
45
Encontrando las 2 pendientes α y β y sumándolas se encontrará el orden de reacción
En la hipérbola de Michaelis y Menten existen 2 órdenes de reacción teniendo las siguientes

consideraciones:
Se desprecia Km
Se desprecia [S]
es constante
46
12. ESTADO ESTACIONARIO

Considerando que es directamente proporcional a la concentración de enzima total y que
es directamente proporcional a la concentración del complejo enzima sustrato siendo esta
proporcionalidad la k catalítica, kcat, específica de la enzima, se tienen las siguientes ecuaciones:
La velocidad inicial corresponde a la descomposición del complejo enzima sustrato.
→
←
La formación del complejo enzima sustrato es rápida mientras que la disociación del complejo es
lenta por lo que es el paso limitante y se denomina k catalítica a su constante.
Se tiene una constante Ks de tal forma que
En el estado estacionario la velocidad de formación es igual a la velocidad de degradación por lo

que la variación de una especia química en la que se encuentra el enzima con el tiempo es igual a
0.
En forma diferencial se tiene:
Se pueden construir curvas de concentraciones en función del tiempo en las que aumentan las
concentraciones de producto y de enzima sustrato mientras que disminuyen las concentraciones
de sustrato y de enzima.
47
12.1. Número de recambio.- Es la cantidad máxima de sustrato que una molécula de

enzima puede convertir en producto por unidad de tiempo.
12.2. Kcat.- Es la cantidad de enzima capaz de transformar un mol de sustrato en un
segundo.
12.3. Unidad Internacional.- Cantidad de enzima necesaria para transformar 1µmol de
sustrato en 1min.
12.4. Actividad Total.- Cantidad de enzima necesaria para transformar 1µmol de sustrato
en 1min para un volumen determinado en mL.
12.5. Actividad Específica.- Cantidad de enzima necesaria para transformar 1µmol de

sustrato en 1min para una masa de proteína determinada en mg.
12.6. Grado de Purificación.- medida del incremento de pureza, se obtiene dividiendo la

actividad específica, calculada después de cada paso de purificación, por la actividad
específica del extracto inicial.
48
13. ECUACIÓN DE MICHAELIS Y MENTEN CON ESTADO ESTACIONARIO
→
←
Balance de masas:
Estado estacionario:
49
14. METODOS DE LINEALIZACIÓN
14.1. Linewawer y Burk
50
14.2. Eadie y Hofstee
14.3. Hans-Wolf
51
15. DETERMINACIÓN APROXIMADA DE LA CANTIDAD DE SUSTRATO

Se tiene una concentración de sustrato óptima dependiendo del Km.
Es posible determinar una cantidad de sustrato en un tiempo determinado tomando ciertas

consideraciones.
∫ ∫
52
∫ ∫
16. EJERCICIOS
16.1. Ejercicio 1
Calcular el número de recambio de un enzima (PM=30000), si 1,5 ug de enzima
contenido en alícuotas de 0,5 ml de una preparación enzimática actuaron sobre el sustrato
específico con una velocidad máxima inicial de 3umol de sustrato transformado por
minuto.
¿Cuál sería la actividad total de la preparación enzimática si su volumen fuera de 100 ml?
¿Cuál sería la actividad específica?
53
16.2. Ejercicio 2
En los siguientes datos se obtuvieron la velocidad de reacción que tiene la
estequiometría: aA + bB pP
[A] mmol/L
10 20 50 100
[B] 10 1,2 2 2,8 3,9
mmol/L 20 2,6 4 5,9 7,9
50 6,5 8,8 14,5 19,8
100 12,5 17,9 29 40,5
Determinar el orden de reacción.
Con [B] constante a 10 mmol/L

Log[A] logv
1 0.0792
1.301 0.301
1.699 0.4471
2 0.591
Con [A] constante a 10 mmol/L

Log[B] logv
1 0.0792
1.301 0.4149
1.699 0.8129
2 1.0969
54
16.3. Ejercicio 3
Se agrega una cantidad constante de una solución de enzima a una serie de mezclas de
reacción que contiene distintas concentraciones de sustrato, los datos obtenidos son:
[So] Vo
umol/L umol/L/min
0,1 0,27
2 5
10 20
20 40
40 64
60 80
100 100
200 120
1000 150
2000 155
Determinar Vmáx y Km
Vo Vo/[S]
(umol/L/min) (min-1)
0,27 2.7
5 2.5
20 2
40 2
64 1.6
80 1.33
100 1
120 0.6
150 0.15
155 0.0775
55
UNIDAD II
17. PODER CATALÍTICO

Según Núñez, 2001 el poder catalítico es la razón entre la velocidad de reacción
catalizada y la misma pero no catalizada y está dado por la relación:
Que da la evolución de un enzima. Si se sustituye por expresiones queda de la siguiente

manera:
( )
( )
El poder catalítico es proporcional al enzima total e inversamente proporcional al

sustrato, por lo que si se disminuye la concentración de sustrato el poder catalítico
aumentará.
Kt la constante de equilibrio del complejo activado y tiene un rango de 108-1020 M.
18. INFLUENCIA DE LA FUERZA IÓNICA EN LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA

La fuerza iónica influye en la actividad enzimática de acuerdo al medio en que se
encuentre. Se dan cambios en la estructura tridimensional y en los pk de los restos de
aminoácidos implicados en el centro activo (Núñez, 2001). Para calcular la fuerza iónica
se tiene la expresión:
56
Dónde:
En ensayos in vitro se deben mantener fuerzas iónicas constantes que mimeticen la fuerza
iónica del interior de la célula, los tampones utilizados son generalmente K+ o tris HCl.
19. CONSTANTE DE ESPECIFICIDAD

Tomando en cuenta la ecuación de Michaelis y Menten:
Y que
Cuando se desprecia la concentración de sustrato, la ecuación queda reducida a:
representa una constante de especificidad que es un marcador del grado de evolución

adaptativa de un enzima para conseguir la mayor eficiencia, tiene un valor máximo de
108-109 M-1s-1 (Núñez, 2001).
20. EFECTOS DEL pH EN LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA

Dado que tanto el enzima como el sustrato son proteínas y se ven afectadas por la
concentración de iones H+ aportadas por los cambios de pH, entonces se pueden resumir
los efectos en:
 Grupos involucrados en la catálisis

 Grupos involucrados en la unión del sustrato
 Grupos que se unen a los sitios alostéricos
 Grupos de los sustratos.
57
Al realizar un experimento modificando el pH del medio con diferentes enzimas,

manteniendo constante las concentraciones de sustrato, de enzima, la fuerza iónica y la
temperatura se obtienen las gráficas siguientes que muestran un pH óptimo para
diferentes tipos de enzimas (Voet, 2006):
Existen restos de aminoácidos en los sitios activos de los enzimas y se pueden encontrar
de forma protonizada o desprotonizada dependiendo del pH del medio y del valor del pka
(Núñez, 2001). Los restos de aminoácidos más encontrados son:
Restos pka Tipo

Extremos α-COOH 3.0-3.5
α-NH3+ 7.5-8.0
γ-β-COOH 3.0-5.0 Carga (-)
Grupo R ε-NH3+ 9.5-10.5 Carga (+)
-SH 8.0-8.5 Cis
fenoles básico Phe, Tyr, Trp
20.1. Forma general

Los enzimas ectocelulares actúan en ambientes que pueden tener pH’s muy variados por
lo que el modelo general se lo hace en base a un enzima con 2 restos protonizables a
condición que se encuentre en un medio ácido (Núñez, 2001).
58



Del balance de masas:
Se deduce la fórmula general de la velocidad inicial:
( )
( )
( )
Con
( )
20.2. Función de Michaelis

La función de Michaelis es la fracción del enzima que se encuentra en forma
protonizable.
59
( )
Con valores comprendidos entre 0 y 1.
Su gráfica es útil para encontrar las pk.
60
20.3. Ionizaciones
20.3.1. Ionización del enzima
( )
( )
Graficando vs. es posible encontrar pk1 y pk2.
61
20.3.2. Ionización del complejo enzima-sustrato
( )
( )
( )
( )
62
Graficando vs. log es posible encontrar pk1 y pk2.
Graficando vs. o vs. es posible encontrar o .
63
20.3.3. Ionización del sustrato
Caso 1:
Caso 2:
64
( )
( )
21. INHIBICIÓN ENZIMÁTICA

La actividad de una enzima puede ser disminuida o eliminada completamente por la
acción de ciertas sustancias a las cuales se las conoce con el nombre genérico de
inhibidores enzimáticos (UBA, 2009).
La inhibición enzimática es de gran importancia fisiológica, ya que a veces la inhibición

de una sola enzima que forma parte de una cadena de reacciones metabólicas puede
inhibir por completo a todo el proceso metabólico involucrado y ejercer en esa forma un
efecto profundo y a veces fatal sobre el organismo (UBA, 2009).
Los inhibidores se agrupan en tres clases fundamentales:

 Inhibición reversible
 Inhibición irreversible
 Inhibición suicida
21.1. Inhibición reversible

La unión del inhibidor a la enzima es de forma no covalente, es decir que siempre
puede revertirse (Mathews, 2006).
65
En este tipo de inhibición las concentraciones iniciales del inhibidor [ ] son mucho
mayores que las concentraciones iniciales de la enzima [ ], siendo la formación de
EI o EIS rápida, logrando definir la constante de inhibición (Ki) (Núñez, 2001).
A la inhibición reversible también se lo conoce como inhibición lineal porque se

puede expresar multiplicando los términos numerador y denominador por el siguiente
factor:
Dentro de este tipo de inhibición se encuentran:

 Inhibición competitiva
 Inhibición no competitiva
 Inhibición acompetitiva
 Inhibición por exceso de sustrato
 Inhibición mixta
21.1.1. Inhibición Competitiva

Las características de esta inhibición son las siguientes:
 El inhibidor y el sustrato compiten por el mismo centro activo de la
enzima.
 Un inhibidor competitivo disminuye la velocidad de catálisis
reduciendo la porción de moléculas de enzima que quedan ligadas al
sustrato.
 El inhibidor es un isóstero del sustrato, es decir que tienen forma y
tamaño similares.
 En este tipo de inhibición los valores para Ki suelen ser del mismo
orden de magnitud que Km, es decir .
 Cuando se busca un inhibidor por sus propiedades farmacológicas es
deseable que Ki sea pequeña para que no se disocie de forma rápida.
 El aumento de [I] produce un aumento de la Km aparente.
66
 El valor de Km aumenta para obtenerse un Km aparente (Kmap), es

decir, el inhibidor interfiere con la unión del sustrato.
 La velocidad máxima (Vmax) es constante debido a que el inhibidor
no obstaculiza la catálisis en (ES) porque no se puede unir a él.
 Si [S] es muy grande para un valor de [I] este no compite.
Balance de masas respecto a la ecuación de conservación:
Si
La velocidad inicial para un inhibidor competitivo es:

=
Debido a que Km aumenta se obtiene un valor de Km aparente

(1 )
Así la velocidad inicial en presencia de un inhibidor competitivo queda:

=
67
El grado de inhibición (i) depende de la concentración de inhibidor, del valor

de la constante de inhibición, de Km y de la concentración inicial del sustrato.
Representaciones gráficas de la acción de los inhibidores competitivos

sobre las actividades enzimáticas
Dobles Inversos: ( ) +
Eadie y Hofstee: -
( ) ( )
68
Ejemplo de inhibición competitiva:

Un ejemplo clásico de este tipo de inhibición es el de la inhibición de la
succinato deshidrogenasa, enzima que tiene por sustrato el ácido succínico,
por otras sustancias estructuralmente parecidas al ácido succínico, como el
ácido malónico, el ácido oxálico, y el ácido glutárico.
21.1.2. Inhibición No competitiva

 El inhibidor no compite con el sustrato por el sitio activo, sino que se
une a la enzima en un centro de unión diferente al centro activo.
 La unión del inhibidor afecta la unión del sustrato, y viceversa.
 Este tipo de inhibición se puede reducir, pero no superar al aumentar
las concentraciones del sustrato.
 El valor de Km es constante, es decir no afecta a la unión del sustrato.
 La velocidad máxima (Vmax) disminuye, es decir la unión del
inhibidor obstaculiza la catálisis.
69
Si
La velocidad inicial para un inhibidor no competitivo es:

=
( )
La velocidad máxima disminuye en factor:

( )
Siendo la velocidad máxima aparente (Vmap):

=
( )
El grado de inhibición (i) depende de la constante de inhibición Ki.
70

Dobles Inversos: ( )+
Eadie y Hofstee:
Ejemplo de inhibición no competitiva:
71
El ácido iodoacético inhibe la transformación de glucosa en ácido láctico a

nivel muscular; este inhibidor reacciona con grupo sulfhídrilo, esencial para
que la enzima glicoceraldehído-fosfato-deshidrogenasa sea activada
catalíticamente.
La adición de sustrato no provoca desplazamiento del inhibidor unido a la
enzima.
21.1.3. Inhibición Acompetitiva

 El inhibidor se une solamente al complejo enzima-sustrato formado
[ES].
 La velocidad máxima y la constante de Michaelis (Km) disminuyen.
La velocidad inicial para un inhibidor acompetitivo es:

=
( )( )
( )
La velocidad máxima y Km disminuyen en factor:
72
( )

Dobles Inversos: ( )+
21.1.4. Inhibición por exceso de sustrato

 Este es un caso muy frecuente de inhibición reversible, donde se
obtiene como resultado una caída en la actividad enzimática.
 En este caso, el modelo cinético presupone que una segunda molécula
de substrato puede unirse al complejo-ES dando lugar a la formación
del complejo-ES2 que no da producto
73
La velocidad inicial para esta inhibición es:

=
La concentración de sustrato a la cual se obtiene el óptimo de velocidad puede

hallarse fácilmente aplicando las condiciones de extremo, así el cálculo de la
concentración óptima de sustrato se tiene la siguiente formula:
√
Al realizar los dobles recíprocos se puede ver una curva de la forma:
74
21.1.5. Inhibición Mixta

 La inhibición mixta es una forma de inhibición donde la unión del
inhibidor con la enzima reduce su actividad pero no afecta la unión
con el sustrato, es decir que el inhibidor es capaz de unirse tanto al E
libre como al complejo [ES] (Peretó, 2007).
 Grado de inhibición depende solamente de la concentración de
inhibidor.
 La velocidad máxima disminuye.
 La constante Km aumenta.
La velocidad inicial para un inhibidor mixto es:
75
( )
=
( )
( )
( )
21.1.6. Representaciones Dixon-Webb para la inhibición competitiva y no competitiva.

Dixon y Webb propusieron una representación gráfica alternativa de la
ecuación de inhibición competitiva y no-competitiva, usada para identificar el
mecanismo de inhibición de la enzima y para estimar el Ki (Zhang y Zhu,
2007).
Inhibidor No competitivo:
76
Inhibidor Competitivo:
21.2. Inhibición irreversible

Los inhibidores irreversibles se combinan con un grupo funcional para unir y
modificar la parte activa de la enzima de forma definitiva. Dentro de estos inhibidores
se encuentran sustancias tóxicas, naturales o sintéticas (Mathews, 2006).
La constante de inhibición (Ki) oscila entre y su ecuación de

conservación es (Núñez de Castro, 2001).
Ejemplo de inhibición irreversible:

El diisopropilfluorofosfato (DFP) se muestra como un ejemplo de inhibidor
irreversible, esta enzima hidroliza el enlace entre el fósforo y el flúor, pero el residuo
de fosfato se mantiene unido a una serina en el centro activo, inactivándolo. Además,
el DFP también reacciona con el centro activo de la acetilcolinesterasa en
la sinapsis de las neuronas, lo que lo convierte en una potente neurotoxina, con una
dosis letal a partir de cantidades inferiores a 100 mg.
77
21.2.1. Inhibición suicida

 Deben ser químicamente inactivos en ausencia de la enzima.
 Las moléculas de estos inhibidores se activan específicamente por la enzima.
 Una vez activados, reaccionan con la proteína uniéndose covalentemente a
algún resto de aminoácido e inactivando la enzima.
Un ejemplo de esta inhibición son los biosintetizadores de poliaminas α-

difluorometilornitina o DFMO, que es un análogo del aminoácido ornitina, y es usado
para tratar la Tripanosomiasis Africana (enfermedad del sueño).
22. APLICACIONES DE LOS INHIBIDORES

Los inhibidores enzimáticos pueden ser encontrados en la naturaleza, pero también son
diseñados y producidos como parte de la farmacología y la bioquímica. Los venenos
naturales son a menudo inhibidores enzimáticos que han evolucionado para defender a
una planta o animal contra sus depredadores. Estas toxinas naturales incluyen algunos de
los compuestos más venenosos conocidos hasta hoy, siendo los inhibidores artificiales
usados como medicamentos, insecticidas (como el malathion), herbicidas (como el
glifosato) o desinfectantes, (como el triclosán) (UCM, 2008).
23. RESUMEN DE INHIBIDORES REVERSIBLES

Inhibición Inhibición No Inhibición Inhibición
competitiva competitiva acompetitiva mixta
Vmax Constante Disminuye Disminuye Disminuye
Km Aumenta Constante Disminuye Aumenta
Grado de _______ ________

inhibición
(i)
24. EJERCICIOS DE INHIBICIÓN
24.1. Ejercicio 1.
El efecto de un inhibidor [I] sobre la velocidad de una reacción catalizada sobre un
sustrato, obteniéndose los siguientes resultados:
78
[I] mmol/L
[S] mmol/L 0 0,5 1
Vo (umol/L/min)
0,05 0,33 0,2 0,14
0,1 0,5 0,33 0,25
0,2 0,67 0,5 0,4
0,4 0,8 0,67 0,57
0,5 0,83 0,71 0,63
a) ¿De qué manera actuó el inhibidor?

b) Calcular los valores de velocidad máxima, Ki y Km.
1/s 1/v 1/v 1/v

20 3,03030303 5 7,14285714
10 2 3,03030303 4
5 1,49253731 2 2,5
2,5 1,25 1,49253731 1,75438596
2 1,20481928 1,4084507 1,58730159
Sin inhibidor: y = 0,99 + 0,1x

Si y = 0
79
Si x = 0
Con inhibidor = 0,5: y = 0,99 + 0,2x

Si y = 0
Si x = 0
Con inhibidor = 1: y = 0,96 + 0,31x

Si y = 0
Si x = 0
Es una inhibición competitiva, donde
( )
( )
24.2. Ejercicio 2.
El ácido yodoanilín-8-naftalen sulfónico (ANS) es inhibidor de la acetilcolineterasa. Para
determinar la naturaleza de la inhibición se han medido las velocidades iniciales de hidrólisis del
acetilcolina a diferentes concentraciones de sustrato, en ausencia del ANS (experiencia A), en
presencia de ANS 8,05 x 10-4molar (experiencia B), y 1,07 x 10-3molar (experiencia C); las
80
velocidades se expresan en umol de acetilcolina hidrolizados /minuto/miligramo de proteína. Los

datos son los siguientes:
[I] molar
[S] mM A B C
Vo (umol/mg/min)
0,165 66 40 35
0,22 82 45 39
0,33 107 52 44
0,45 130 56,5 47,5
0,55 143 59 49,5
0,66 156 61 51
Determinar el tipo de inhibición y la Ki del experimento.
1/s 1/V 1/V 1/V

6,06060606 0,01515152 0,025 0,02857143
4,54545455 0,01219512 0,02222222 0,02564103
3,03030303 0,00934579 0,01923077 0,02272727
2,22222222 0,00769231 0,01769912 0,02105263
1,81818182 0,00699301 0,01694915 0,02020202
1,51515152 0,00641026 0,01639344 0,01960784
81
Sin inhibidor (Experiencia A): y = 0,003 + 0,002x

Si y = 0
Si x = 0
Con inhibidor (Experiencia B): y = 0,013 + 0,002x

Si y = 0
Si x = 0
Con inhibidor (Experiencia C): y = 0,017 + 0,002x

Si y = 0
Si x = 0
Es una inhibición acompetitiva, donde
( )
( )
82
25. EJERCICIOS DE pH
25.1. Ejercicio 1.
El efecto del pH sobre el comportamiento del enzima se puede describir en el siguiente
diagrama:
Se ha medido a diferentes pH’s la Vmax (10-4 mol/min) y km (mM) con una concentración de
enzima de 1µM.
pH Vmax km
3 0.057 1
4 0.537 1.07
5 3.21 1.45
6 6.4 1.89
7 7.05 1.99
8 6.55 2
9 3.6 2
10 0.655 2
11 0.07 2
Determinar ka, kb, ka’, kb’, kcat (seg-1)
H+ 1/Vmax(pH)
0.001 17.54385965
0.0001 1.862197393
0.00001 0.31152648
0.000001 0.15625
83
H+ 1/Vmax(pH)
1E-07 0.141843972
1E-08 0.152671756
1E-09 0.277777778
1E-10 1.526717557
1E-11 14.28571429
H vs. 1/Vmax(pH) (A)

20
18
16
14 y = 17408x + 0,1348
12
1/Vmax(pH) 10
8
6
4
2
0
0 0,0002 0,0004 0,0006 0,0008 0,001 0,0012
H
H vs. 1/Vmax(pH) (B)

16
14
12
10
8
1/Vmax(pH)
6
y = -5E+07x + 4,2897
4
2
0
-2 0 2E-08 4E-08 6E-08 8E-08 0,0000001 1,2E-07
H
84
pH vs. log(Vmax(pH)/Vmax)
0
0 2 4 6 8 10 12
-0,5
-1
log(Vmax(pH)/
Vmax)
-1,5
-2
-2,5
pH
85
25.2. Ejercicio 2.
La velocidad de hidróliis de Benzoil Glicil Glicil Fenilalanina por la carboxipeptidasa A varía
con el oH de la experiencia. Al estudiar las variaciones de la constante catalítica en función del
pH se ha podido determinar el pk de un grupo cuya ionización modifica la velocidad de reacción.
pH kcat(1/min)
8.2 1170
7.8 1145
7.5 1115
7.3 1080
6.9 955
6.7 860
6.3 610
6.1 475
5.8 300
5.6 205
5.35 125
5.2 92
5.05 67
4.95 54
¿En qué estado de ionización debe hallarse presente el grupo para que el pH sea activo?
Determinar el ok de este grupo.
El grupo debe estar totalmente desprotonizado y corresponde al grupo α-NH3+.
H 1/kcat
6.30957E- 0.000855
09
1.58489E- 0.000873
08
3.16228E- 0.000897
08
5.01187E- 0.000926
08
1.25893E- 0.001047
07
1.99526E- 0.001163
07
5.01187E- 0.001639
07
7.94328E- 0.002105
86
H 1/kcat
07
1.58489E- 0.003333
06
2.51189E- 0.004878
06
4.46684E- 0.008
06
6.30957E- 0.01087
06
8.91251E- 0.014925
06
1.12202E- 0.018519
05
H vs. 1/kcat
0,02
0,018 y = 1524.897x + 0.0009
0,016
0,014
0,012
0,01
0,008
0,006
0,004
0,002
0
0 0,000002 0,000004 0,000006 0,000008 0,00001 0,000012
87
UNIDAD III
26. ACTIVADORES
Los activadores son compuestos que se unen al enzima para aumentar su actividad enzimática.
Pueden ser iones como K+ en la reacción de la piruvato quinasa o el fosfato en la reacción de la
glutamina fosfato dependiente.
( )
En el caso que se forme también otro complejo, el ES:
27. REACCIONES MULTISUSTRATO
27.1. Método King Altman

Es un método enunciado para reacciones con más de un sustrato, para ello se construye un
polígono con tantos vértices como especies químicas.
Por ejemplo si se tiene que
Se va a construir un triángulo de la siguiente manera:
88
Para conocer la igualdad de las especies se debe enmascarar una arista del polígono multiplicar
las constates existentes para llegar a dicha especie, se realiza esto para cada arista y se suman los
productos, es decir que se tendría lo siguiente:
89
[E] = k2k4 + k2k5 + k3k5
[ES] = k1k4S + k1k5S + k4k6P
[EP] = k1k3S + k2k6P + k3k6P
27.2. Formación Bi-Bi Ordenado (Secuencial Ordenado)

La formación Bi-Bi ordenado toma en cuenta que existe la formación ordenada de un complejo
ternario EAB y utiliza el método King-Atlman. Las reacciones de óxido reducción siguen un
modelo de formación ordenado.
Para comprender mejor las reacciones ordenadas se realiza el siguiente esquema:
90
Realizando el método King-Altman se tiene lo siguiente:
Para encontrar la fórmula de la velocidad inicial se debe tomar en cuenta que los productos P y Q
aún no se han formado, los términos que tengan los productos se anularán, de esta manera se
obtiene:
[E] = Bk3k5k7 + k2k5k7 + k2k4k7
[EA] = Ak1k4k7 + Ak1k5k7
[EAB] = ABk1k3k7
[EQ] = ABk1k3k5
Para encontrar kia se grafican los dobles inversos haciendo a la ecuación dependiente de [A] con
valores fijos de [B].
91
Para encontrar kB y Vmax se grafica 1/B vs. ordenadas
Para encontrar kA se grafica 1/B vs. pendiente
92
Un ejemplo es la formación del lactato a partir del piruvato con la oxidación de NAD.
27.3. Formación Bi-Bi al Azar (Secuencial al Azar)

La formación Bi-Bi al azar toma en cuenta que existe la formación al azar de un complejo
ternario EAB o EBA (EPQ) y no utiliza el método King-Atlman.
Para comprender mejor las reacciones al azar se realiza el siguiente esquema:
Para encontrar la fórmula de la velocidad inicial se toma en cuenta ciertas expresiones:
Si [B] se encuentra en concentraciones saturantes:
93
Si [A] se encuentra en concentraciones saturantes:
Para encontrar kA y kB se grafican los dobles inversos haciendo a la ecuación dependiente de [A]
con valores fijos de [B] y viceversa.
Un ejemplo es la fosforilación de la creatina que transforma la creatina en fosfocreatina

utilizando ATP.
94
27.4. Formación Ping-Pong

La formación Ping-Pong toma en cuenta que no existe la formación de un complejo ternario
EAB o EBA sino que existe la modificación del enzima luego de la formación del complejo EA
y utiliza el método King-Atlman. Las reacciones de transaminación siguen un modelo de
formación ping-pong.
Para comprender mejor las reacciones ping-pong se realiza el siguiente esquema:
Realizando el método King-Altman se tiene lo siguiente:
Para encontrar la fórmula de la velocidad inicial se debe tomar en cuenta que los productos P y Q
aún no se han formado, los términos que tengan los productos se anularán, de esta manera se
obtiene:
[E] = Bk3k5k7 + Bk2k5k7
[EA] = ABk1k5k7
[E’] = Ak1k3k5 + Ak1k3k7
[E’B] = ABk1k3k5
95
Para encontrar kA y kB se grafican los dobles inversos haciendo a la ecuación dependiente de [A]
con valores fijos de [B] y viceversa.
96
Un ejemplo es la formación del piruvato
27.5. Inhibición por productos

Según el tipo de mecanismo y el producto las inhibiciones se comportan de diferentes maneras:
Mecanismo Inhibidor A (B saturante) B (A saturante)

Bi-Bi Ordenado P Acompetitiva No Competitiva
Q Competitiva
Ping-Pong P Competitiva
Q Competitiva
Bi-Bi al Azar P No Competitiva No Competitiva

Q No Competitiva No Competitiva
28. INTERACCIÓN LIGANDO-PROTEÍNA

La modulación de la actividad enzimática puede se inducida por activadores o inhibidores que se
unen a la proteína en sitios distintos al sitio activo, llamados efectores alostéricos a los
compuestos que se unen a un sitio diferente al sitio activo. Una proteína puede unir más de un
ligando a su estructura funcional.
Considerando el siguiente esquema se pude concluir:
K1, K2, K3, K4= Son constantes intrínsecas de cada sitio de unión de la proteína.
 Si K1=K2=K3=K4 → No presenta cooperatividad

 Si K1<K2<K3<K4 → Presenta cooperatividad positiva. La unión de un ligando facilita la
unión de otros ligandos.
 Si K1>K2>K3>K4 → Presenta cooperatividad negativa. La unión de un ligando impide la
unión de los otros ligandos.
97
29. TRATAMIENTO DE SCATCHARD

Este tratamiento permite calcular los números de sitio de unión por mole de proteína, la
constante de unión proteína-ligando y determinar el tipo de cooperatividad.
La función de Scatchard, v, se define como la razón entre la concentración de ligando-unido y la

concentración total de proteína.
̅
La función de saturación, Y, representa el número de sitios ocupadospartido por el número total

de sitios de unión que tiene la macromolécula.
̅=
Relación entre ambas funciones:

̅=̅
Donde: ̅ = Función de Scatchard
̅ = Función de saturación
n = Número de sitios por mol de proteína
Si se considera un modelo para 2 sitios de unión.
Donde: K = Constante de unión.
98
L = Ligando libre.
Si se considera n sitios de unión:

̅
̅
̅
Se pueden observar tres gráficos:

1. No existe cooperatividad
2. Cooperatividad positiva
99
3. Cooperatividad negativa
30. TRATAMIENTO DE HILL
30.1. Ecuación experimental de Hill

Experimentalmente se pueden tratar las saturaciones. La ecuación de saturación para la
hemoglobina viene de:
̅=
̅=
̅=
̅=
nH es un valor experimental que puede ser fraccionario y se llama índice de Hill.

Donde:
 nH = 1; no existe cooperatividad
 nH > 1; cooperatividad positiva
 nH < 1; cooperatividad negativa
100
Se puede representar gráficamente según la ecuación:
Representación de dobles inversos:

 nH = 1, no existe cooperatividad
101
 nH > 1, cooperatividad positiva
 nH < 1, cooperatividad negativa
30.2. Linealización de la ecuación de Hill

Se puede linealizar haciendo las siguientes transformaciones:
̅
̅
̅
̅
102
̅
̅
31. RAZÓN DE SATURACIÓN (RS)

Mide la razón de las concentraciones de sustrato que dan como resultado el 10 y el 90% de
saturación.
Cálculo de Rs para diferentes valores de nH:

 Para nH = 1, el valor de Rs = 81. No existe cooperatividad, comportamiento Michaelis-
Menten
 Para nH > 1, el valor de Rs = 9. Cooperatividad positiva.
 Para nH < 1, el valor de Rs = 6561. Cooperatividad negativa.
103
Un enzima que muestra cooperatividad positiva, un cambio en la concentración en 9 veces de

sustrato hace que el enzima pase de una saturación del 10 al 90%. Si un enzima presenta
cooperatividad negativa para un cambio de saturación del 10% al 90% necesitamos incrementar
la concentración de sustrato en 6561 veces.
32. PROTEÍNAS ALOSTÉRICAS

Las proteínas alostéricas son activadas y reguladas por moduladores, existiendo dos modelos, el
modelo concertado y el modelo secuencial.
Una enzima alostérica es una enzima cuya actividad está regulada mediante un centro alostérico,
que es un sitio, distinto del centro activo de la enzima, al que se une un regulador de manera
reversible y no covalente. La unión de este regulador modifica la estructura tridimensional de la
enzima y llega a afectar la configuración del sitio activo, por lo que aumenta o disminuye su
actividad, según el caso.
32.1. Modelo concertado de Monod, Wyman y Changeux (MWC)

El modelo MWC explica la cooperatividad, suponiendo que una pequeña fracción de
desoxihemoglobina se encuentra con la estructura cuaternaria correspondiente a la oxi que fija el
oxígeno más fuertemente. Para simplicidad del modelo se supone que la estructura cuaternaria de
la molécula es simétrica, una molécula parcialmente ligada se encuentra en estado oxi o desoxi
no existiendo estados intermedios. De forma característica en este modelo todas las formas
conformacionales cambian al mismo tiempo.
Este modelo consta de los siguientes postulados:
1.- Las proteínas alostéricas son proteínas oligoméricas.
2.- Existe siempre un eje de simetría en la estructura espacial de los protómeros.
3.- Cada protómero posee un sitio de unión y solamente uno para cada uno de los diferentes
ligandos que pueden ser: sustratos, activadores o inhibidores.
4. La proteína se encuentra en uno de los dos estados conformacionales, T (tenso) o R (relajado),

los dos estados difieren en la energías y en el número de enlaces entre las subunidades de forma
que el estado T esta constreñido con relación al estado R. la conformación relajada se une
fuertemente al sustrato y la forma T se une de forma más débil al sustrato (T=INACTIVA,
R=ACTIVA).
104
3.- La constante alostérica L se define como el cociente entre la concentración de de la proteína

en el estado T y en el estado R (L=T/R) en ausencia de ligando
4.- El estado T tiene mayor afinidad por los ligandos
4.- Todos los sitios de fijación en cada estado sin equivalentes y tienen constantes de fijación
idénticas para los ligandos (suposición de simetría).
5.- La curva de fijación sigmoidal de cualquier proteína alostérica puede calcularse utilizando 3
parámetros: L constante alostérica, KT y KR constantes de disociación de cada sitio en los
estados T y R.
: Concentración de ligando libre
c: Constante ratio de las dos constantes de disociación
: Concentración de ligando libre
105
El análisis de la expresión, puesto que: ̅ , predice tres posibles variantes del modelo.
Modelo tipo K Modelo tipo V Modelo mixto
C=0 C=1
̅
̅
Vmáx constante Vmáx altera Vmáx altera

Km altera Km constante Km altera
32.2. Modelo secuencial

Ayuda a explicar el comportamiento de las proteínas alostéricas. Éste modelo supone que el
ligando unido a uno de los protómeros induce un cambio conformacional en éste.
El modelo supone las siguientes ventajas:
 Permite la presencia de formas híbridas.

 Explica tanto la cooperatividad positiva como la negativa.
Este modelo tiene en cuenta todas las interacciones entre los estados transconformacionales de
los protómeros y todos los equilibrios posibles:
 Equilibrio de transconformación de la forma A a la forma B: A˂--˃ B, siendo la constante

de transconformación
 Equilibrio de formación del complejo [BS] por parte de cada uno de los conformómeros:
B + S ˂--˃ BS, siendo la constante de equilibrio
106
33. EJERCICIOS
33.1. Ejercicio 1
La glucógeno fosforilasa (α-1,4-glucano) ortofosfato glucosil Transferasa ha sido estudiada
cinéticamente con objeto de determinar el mecanismo de reacción. Se han medido las
velocidades iniciales de las reacciones expresadas en µmoles de glucosa-1-fosfato formado
por minuto por miligramo de proteína en función de las concentraciones de ambos sustratos.
Determinar el mecanismo de reacción y las constantes cinéticas.
Fosfato Glucógeno (mg/mL)

(mM) 3.2 8 16 24 48
6 12 18 21 23 25
15 24 35.5 43 46 49
30 35.5 53 64 68.5 74
45 43 64 77 82 88
60 47.5 71 85 91.5 98.5
0,09
y = 0,4151x + 0,0141
0,08
0,07
0,06 y = 0,2762x + 0,0096
0,05 y = 0,2394x + 0,0076

1/vo
0,04 y = 0,2167x + 0,0073
y = 0,1987x + 0,0069
0,03
0,02
0,01
0
0 0,02 0,04 0,06 0,08 0,1 0,12 0,14 0,16 0,18
1/A
107
0,09
y = 0,1468x + 0,0375
0,08
0,07
0,06
0,05
1/vo
0,04 y = 0,0733x + 0,0188
0,03 y = 0,0502x + 0,0125
y = 0,0409x + 0,0105
0,02
y = 0,0373x + 0,0094
0,01
0
0 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,35
1/B
Se trata de un mecanismo bi-bi al azar.
108
0,016
0,014 y = 0,0252x + 0,0063
0,012
0,01
Ordenada 0,008
0,006
0,004
0,002
0
0 0,1 0,2 0,3 0,4
1/B
33.2. Ejercicio 2
Un enzima cataliza una reacción entre dos sustratos A y B, con el objeto de determinar el
esqueleto de reacción se han efectuado diferentes medidas de la velocidad inicial en presencia de
las concentraciones variables de los sustratos obteniéndose:
A.10-4 B.10-4 M
M 1 2 5 10 20
1 0.5 0.7 1 1.1 1.25
2 0.57 0.9 1.37 1.65 1.8
5 0.62 1 1.73 2.2 2.6
10 0.65 1.1 1.9 2.5 2.9
20 0.66 1.15 2 2.7 3.2
Determinar el mecanismo de reacción y las constantes cinéticas.
109
2,5
2 y = 0,5075x + 1,4964
1,5
y = 0,5675x + 0,8537
1/vo
y = 0,5251x + 0,4726
1
y = 0,5627x + 0,3398
0,5 y = 0,5141x + 0,2893
0
0 0,2 0,4 0,6 0,8 1 1,2
1/A
2,5
2 y = 1,2528x + 0,764
y = 1,2689x + 0,4819
y = 1,2978x + 0,3258
1,5
y = 1,2615x + 0,277
1/vo
1 y = 1,2663x + 0,245
0,5
0
0 0,2 0,4 0,6 0,8 1 1,2
1/B
Se trata de un mecanismo Ping-Pong.
110
1,6
y = 1,2768x + 0,218
1,4
1,2
1
Ordenadas 0,8
0,6
0,4
0,2
0
0 0,2 0,4 0,6 0,8 1 1,2
1/B
33.3. Ejercicio 3
Se tienen los siguientes datos:
CTP (citosina #CTP fijado/mol de

trifosfato libre) x 10-5 enzima
0,024 0,62
0,045 1
0,1 1,6
0,245 2,3
0,82 3,1
2,6 4
4,4 4,35
8 4,8
12,8 5,1
14,6 5,15
21,6 5,25
Determinar el número de centros de fijación y las constantes de asociación y

disociación.
111
CTP libre es Ligando y CTP fijado es la función de scatchard.
V V/L
0,62 25,8333333
1 22,2222222
1,6 16
2,3 9,3877551
3,1 3,7804878
4 1,53846154
4,35 0,98863636
4,8 0,6
5,1 0,3984375
5,15 0,35273973
5,25 0,24305556
30
25
20
15
V ̅/L
Series1
10 Lineal (Series1)
5
0 y = -5,2247x + 25,097
0 2 4
R² = 0,9066 6
-5
V̅
y = 25,004 – 5,183x
Si y = 0
x=n=5
m = -K
m = 5,183 x 105 M-1 = KA
112
33.4. Ejercicio 4
Con los siguientes datos calcular. a) Qué modelo permite interpretar los resultados. b) Calcular la
constante de transformación del sistema (L).
A = Activador
B = Inhibidor
C = Ausencia de activador e inhibidor
[S] x 10-5M A B C
1 0,62 0,1 0,375
2 1,1 0,18 0,65
3,5 1,67 0,27 1
5 2,1 0,33 1,25
7,5 2,6 0,41 1,55
10 2,95 0,47 1,75
20 3,7 0,59 2,2
35 4,2 0,67 2,5
50 4,4 0,7 2,6
1/[S] 1/V
1 1,61290323
0,5 0,90909091
0,28571429 0,5988024
0,2 0,47619048
0,13333333 0,38461538
0,1 0,33898305
0,05 0,27027027
0,02857143 0,23809524
0,02 0,22727273
113
3
y = 2,3413x + 0,3372
2,5 R² = 0,9997
2
1/V
1,5
Series1
1
Lineal (Series1)
0,5
0
0 0,5 1 1,5
1/S
A: y = 0,1971 + 1,416x
Si x = 0
y=
Vmáx = 5,074
Si y = 0
x=
Km = 7,18 x 10-5M
1/[S] 1/V
1 10
0,5 5,55555556
0,28571429 3,7037037
0,2 3,03030303
0,13333333 2,43902439
0,1 2,12765957
0,05 1,69491525
0,02857143 1,49253731
0,02 1,42857143
114
3
y = 2,3413x + 0,3372
2,5 R² = 0,9997
2
1/V 1,5
1/c
1 Lineal (1/c)
0,5
0
0 0,5 1 1,5
1/S
B: y =1,2512 + 8,7205x
Si x = 0
y=
Vmáx = 0,799
Si y = 0
x=
Km = 6,969 x 10-5M
1/[S] 1/V
1 2,66666667
0,5 1,53846154
0,28571429 1
0,2 0,8
0,13333333 0,64516129
0,1 0,57142857
0,05 0,45454545
0,02857143 0,4
0,02 0,38461538
115
3
y = 2,3413x + 0,3372
2,5 R² = 0,9997
2
1/V 1,5
Series1
1
Lineal (Series1)
0,5
0
0 0,5 1 1,5
1/S
C: y 0,3371 + 2,3413x
Si x = 0
y=
Vmáx = 3,03
Si y = 0
x=
Km = 7,09 x 10-5M
El modelo que ayuda es V, porque la Vmás es diferente y Km constante.
116
GLOSARIO
 Enzimología.- Disciplina bioquímica centrada en el estudio y caracterización de las
enzimas, que son biomoléculas proteicas o ribonucleicas que catalizan reacciones
químicas en los sistemas biológicos.
 Enzimas.- Compuestos orgánicos encargados de aumentar la velocidad con que una

reacción química alcanza el equilibrio disminuyendo la energía de activación de las
moléculas que participan.
 Grupo prostético.- Cuando el cofactor y coenzima o uno de los dos está unido en forma
íntima o permanente a la apoenzima.
 Apoenzima.- Parte proteica de la enzima formada sólo por aminoácidos.
 Coenzima.- Compuesto orgánico complejo diferente a los aminoácidos, son coenzimas el

NAD, FAD, CoA, moléculas que tienen en su estructura vitaminas3.
 Cofactor.- Activador inorgánico del enzima que actúa induciendo reordenamientos

eléctricos adecuados para la unión enzima-sustrato. Generalmente son iones metálicos
como Fe3+, Mg2+, Mn2+, Zn2+, etc.
 Holoenzima.- Es la enzima catalíticamente completa, apoenzima + Grupo prostético

(Coenzima + Cofactor).
 Centro activo.- Este centro al ser la región que se une al sustrato, contiene los residuos
que participan directamente en la producción y ruptura de enlaces. Los residuos son
denominados grupos catalíticos.
 Sitio alostérico.- Sitio de unión diferente al sitio activo.
 Proteína.- Polímero formado por polipéptidos.
 Polipéptido.- Formado por 5 o más aminoácidos.
 Aminoácido.- Compuesto orgánico anfótero que tiene un grupo carboxilo o grupo ácido
y un grupo amino o grupo básico.
 Aminoácido proteico.- aminoácido que tiene el grupo amino en el carbono α
117
 Enlace peptídico.- Enlace entre el grupo amino (–NH2) de un aminoácido y el grupo

carboxilo (–COOH) de otro aminoácido.
 Bases nitrogenadas.- Compuestos orgánicos cíclicos, que incluyen dos o más átomos de
nitrógeno. Son parte fundamental de los nucleósidos, nucleótidos, nucleótidos cíclicos,
dinucleótidos y ácidos nucleicos.
 Purinas.- Compuesto orgánico heterocíclico aromático, formado por dos anillos

fusionados, uno de seis átomos y el otro de cinco. Siendo purinas la adenina y la guanina.
 Pirimidinas.- Compuesto orgánico con un anillo heterocíclico (dos átomos de nitrógeno

sustituyen al carbono en las posiciones 1 y 3. Son pirimidinas la timina, citosina y
uracilo.
 Nucleótidos.- Moléculas orgánicas formadas por la unión covalente de un monosacárido

de cinco carbonos (pentosa), una base nitrogenada y un grupo fosfato; siendo el
nucleósido la parte del nucleótido formado únicamente por la base nitrogenada y la
pentosa
 Vitaminas.-Las vitaminas son sustancias químicas no sintetizadas por el organismo

presentes en los alimentos e indispensables para la vida. No producen energía pero actúan
como coenzimas o como precursores de coenzimas. Se clasifican en liposolubles e
hidrosolubles.
 Iones metálicos.-Los iones metálicos actúan como cofactores de ciertas enzimas.
 Ácido.- solución dadora de protones H+
 Base.- solución receptora de protones H+
 Compuesto covalente.- Compartición de electrones con un No metal
 Molecularidad.-Es el número de moléculas involucradas en una reacción simple.
 Orden de reacción.-Es la suma de los coeficientes de cada reactante
 Número de recambio.- Es la cantidad máxima de sustrato que una molécula de enzima

puede convertir en producto por unidad de tiempo.
118
 Kcat.- Es la cantidad de enzima capaz de transformar un mol de sustrato en un segundo.
 Unidad Internacional.- Cantidad de enzima necesaria para transformar 1µmol de

sustrato en 1min.
 Actividad Total.- Cantidad de enzima necesaria para transformar 1µmol de sustrato en

1min para un volumen determinado en mL.
 Actividad Específica.- Cantidad de enzima necesaria para transformar 1µmol de sustrato

en 1min para una masa de proteína determinada en mg.
 Grado de Purificación.- Medida del incremento de pureza, se obtiene dividiendo la

actividad específica, calculada después de cada paso de purificación, por la actividad
específica del extracto inicial.
 Pka.- pH en el cual las moléculas protonadas y desprotonadas se encuentran en

concentraciones equimolares.
 Poder catalítico.- Razón entre una velocidad de reacción catalizada y la misma pero no
catalizada.
 Constante de especificidad.- Marcador del grado de evolución adaptativa de un enzima

para conseguir la mayor eficiencia.
 Función de Michaelis.- Fracción del enzima que se encuentra en forma protonizable.
 Isóstero.- Molécula con mismo tamaño, número de átomos y/o electrones de valencia
que el sustrato.
 a.- Razón entre la velocidad de reacción con inhibidor y la misma pero sin inhibidor.
119
 Inhibidor.- Molécula que se une al enzima o al complejo enzima-sustrato para disminuir

su actividad.
 Activador.- Molécula que se une al enzima o al complejo enzima-sustrato para aumentar

su actividad.
 Efector alostérico.- Compuesto que se une a la proteína en un sitio diferente al sitio

activo.
 Alosterismo.- Forma de regulación en la célula debido a que puede producir cambios

rápidos y fácilmente reversibles en la actividad de las enzimas. Muchos fármacos actúan
uniéndose al sitio alostérico de las enzimas, como los inhibidores de transcriptasa inversa
no nucleósidos.
 Cooperatividad.- Modificación de la constante de unión de la proteína por una molécula

pequeña por la unión anterior de otra molécula pequeña.
120
BIBLIOGRAFIA
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=0CCoQFjAA&url=http%3A%2F%2Fwww.bioscripts.net%2Fcol%2FApuntes%2FLice
121
nciatura_Bioquimica%2FEnzimologia%2FTema014.ppt&ei=NuPJUa2KFKXY0gGshYD
wDg&usg=AFQjCNGkBt2WfGiechtMVHMc6127vBY34w&sig2=KWZYjqiBnxbe4N1
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122

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ESCUELA CUADERNO DE

AUTORES: Beltrán Audrey

4.3. Ciclo de Krebs......................................................................................................................... 27

14.2. Eadie y Hofstee ................................................................................................................... 51

27.3. Formación Bi-Bi al Azar (Secuencial al Azar) ................................................................... 93

1.1. Enzimología.- Disciplina bioquímica centrada en el estudio y caracterización de

1.2. Importancia de la enzimología.- Su importancia radica en que existe una variedad

1.3. Aplicaciones de la enzimología.- Esta disciplina es utilizada en una amplia gama de

 Enzimología Textil.- Aplicaciones de las enzimas en la elaboración de tejidos

1.4.1. Características de las enzimas

Fig. 1 Sitio activo y sitio catalítico del enzima

 Tripsina.- Enzima proteolítica que hidroliza los aminoácidos que

 Quimotripsina.- Rompe enlaces peptídicos provenientes de

1.6. Apoenzima.- Parte proteica de la enzima formada sólo por aminoácidos.

1.7. Coenzima.- Compuesto orgánico complejo diferente a los aminoácidos, son

1.9. Holoenzima.- Es la enzima catalíticamente completa.

1.11. Sitio alostérico.- Sitio de unión diferente al sitio activo.

1.12. Proteína.- Polímero formado por polipéptidos.

1.13. Polipéptido.- Formado por 5 o más aminoácidos.

Aminoácido proteico Aminoácido no proteico

Grupo amino en CH2 CH2

1.14.1. Estructura de aminoácidos5

1.14.1.1. Aminoácidos básicos

1.14.1.2. Aminoácidos ácidos

1.14.1.3. Aminoácidos apolares

1.14.1.4. Aminoácidos polares

1.14.1.5. Aminoácidos aromáticos

Se disocia el grupo carboxilo

Se disocia el grupo amino

 En pH = 7 todo el grupo carboxilo está disociado.

 Los grupos amino se deben disociar en básico.

COOH COO- 2 COOH

3 COO- COO- 4 COO-

H3N+ CH H3N+ CH H2N CH

Fórmulas: PI = ½ (pka + pkb)

2.1. Solución tampón

2.2. Ecuación de Henderson-Hasselbalch

Aplicando la ley de acción de masas, la constante de equilibrio K será:

Se obtiene la ecuación de Henderson-Hasselbalch:

Si en la ecuación la concentración de ácido es igual a la de la base, el cociente es 1,

Por lo tanto el pK es el valor de pH de una solución amortiguadora en el que el ácido

3. CLASIFICAIÓN DE LAS ENZIMAS

 Dioxigenasas.- Transfieren al sustrato ambos átomos de oxígeno de la

 Peroxidasas.- Catalizan reacciones bisustrato de carácter redox, utilizando un

 Deshidrogenasas.- Catalizan la oxidación o reducción de un sustrato por

3.1.1. Coenzimas de las óxido-reductasas

El NAD+ y NADP+ se encargan del transporte transitorio de iones hidruro (H-)

3.1.1.1. Bases nitrogenadas

Fig. 3 Adenina Fig. 4 Guanina

 Pirimidinas.- Compuesto orgánico con un anillo heterocíclico (dos

Fig. 5 Timina Fig. 6 Citosina Fig. 7 Uracilo

3.1.1.2. Nucleótidos.- Moléculas orgánicas formadas por la unión covalente

Fig. 10 NAD+ Fig. 11 NADH + H+

Fig. 12 NADP+ Fig. 13 NADPH + H+

Fig. 14 FMN Fig. 15 FMNH2

3.2. Tranferasas.- Transfieren grupos de un sustrato a otro. Grupos como aminas,

3.2.1. Reacción de transaminación

COO- COO- COO- COO-

CH3 CH2 Transaminasa CH3 CH2

 La coenzima de la transaminasa es la vitamina B6 o piridoxina (Fig.

 Para que el piridoxal se active, debe convertirse en fosfato piridoxal; el

Fig. 18 Piridoxina Fig. 19 Piridoxal

3.3. Hidrolasas.- Enzimas que catalizan reacciones de hidrólisis, cuya característica