PRÁCTICA DE LABORATORIO 2

BIOMASA RETENIDA: REMOCIÓN DE UN CONTAMINANTE

EMPLEANDO UN MICROORGANISMO

Caudillo Calderón Miriam Guadalupe1*, Peinado Pérez Alexa2 **, Rivas Durán Joyce Lilly, Mora Benavides Alicia
Mahelet, Vásquez García Carmen Xihunelly, Hernández Romero Diego Iván
*Ingeniería ambiental Universidad de Guanajuato, Guanajuato, México
** Ingeniería ambiental Universidad de Guanajuato, Guanajuato, México

e-mail: mg.caudillocalderon@gmail.com

RESUMEN: Este trabajo describe una 50 ppm; un pH ajustado a 4, ya que los

técnica de remoción para el azul de metileno
en agua a través de biomasa retenida
(Monocultivo: levadura de pan comercial) en
un biopolímero. Para garantizar
remoción eficiente se empleó un método de
prueba y error, en él se realizaron diferentes
diluciones del contaminante en cuestión (10
ppm y 50 ppm) en dos muestras de agua,
una con un pH ajustado a 4 y la otra a 8; a
cada una de estas diluciones se le agregaron
perlas hechas con diferentes
concentraciones de biomasa retenida, con
las relaciones siguientes: 1:2, 1:1 y 1:0.5. Las
variables a observar son: concentración del
contaminante, pH del agua, relación de
biomasa y el tiempo.
Luego de 3 días de espera en los que
observaron cabios físicos y de absorbancia al
espectrofotómetro se encontró que las
mejores condiciones para la remoción del
azul de metileno se dieron en el protocolo que
involucro: una concentración del colorante a
microorganismos prefieren un medio acido
para desarrollarse; una relación de biomasa
de 1:0.5, debido a que el espacio para los
una microorganismo es mayor, por lo que su
trabajo es más eficiente; y un tiempo de 3
días para el mejor aprovechamiento de la
vida útil de las perlas.
Palabras clave: adsorción, biopolímero,
levadura, microorganismos, remoción.
ABSTRACT: This work describes a removal
technique for methylene blue in water through
retained biomass (Monoculture: commercial
bread yeast) in a biopolymer. To obtain an
efficient removal, a trial and error method was
used, where different dilutions of the
contaminant in question (10 ppm and 50 ppm)
were found in two water samples, one with a
pH adjusted to 4 and the other at 8; To each
of these dilutions be added pearls made with
different variables of retained biomass, with
the following ratios: 1: 2, 1: 1 and 1: 0.5. After

1
PRÁCTICA DE LABORATORIO 2
3 days of waiting in the physical and
absorbance cape observers for the
spectrophotometer, the best conditions for
the removal of methylene blue were found in
the protocol that involved: a concentration of
the dye at 50 ppm; a pH adjusted to 4, since
microorganisms prefer an acidic medium to
develop; a biomass ratio of 1: 0.5, because
the space for microorganisms is greater, so
that their work is more efficient; and a time of
3 days for the best use of the life of the pearls.
Keywords: adsorption, biopolymer, yeast,
microorganisms, removal.
INTRODUCCIÓN: La contaminación del
agua puede definirse como la incorporación
de materias extrañas como;
microorganismos, productos químicos,
residuos industriales y de otros tipos. Entre
estas materias que deterioran la calidad del
agua tenemos a los limpiadores domésticos,
limpiadores con amonio, blanqueadores,
desinfectantes, destapa caños, pulidores de
pisos y muebles, limpiadores de hornos,
limpiadores de inodoros, productos en
aerosol, Pesticidas y repelentes, adhesivos,
anticongelantes, aceite para motor, líquido de
transmisión, baterías, líquido para frenos y
cera para carrocerías. (Ozdemir, et. al.
2004:49-60).
De acuerdo con el objetivo de este trabajo
podemos citar que la mayoría de las aguas
2
residuales contienen generalmente
colorantes industriales empleados en: papel,
industrias textiles, destiladoras, entre otras,
las cuales causan serios problemas en la vida
acuática y cambios drásticos en el medio
ambiente.
Como interés particular, sabemos que en la
última década se han hecho notables
avances en el empleo de aplicaciones
biotecnológicas en los efluentes textiles no
solo para remover el color, sino también para
la completa eliminación del colorante. Entre
estos se hallan el mejoramiento de los
tratamientos mediante filtración, oxidación
química y técnicas especializadas de
floculación, así como pretratamientos que
incluyen digestión anaeróbica, biorreactores
de película fija, reactivos de oxidación
avanzada por reactivo de Fenton, electrólisis
o flotación por espuma. La adsorción es una
nueva opción de tratamiento ya que es una
operación de separación de sustancias, que
se realiza al poner en contacto un fluido con
un sólido adsorbente, este es un fenómeno
de superficie mediante el cual el adsorbato
queda retenido en la superficie exterior y en
los poros interiores del sólido. En México se
tienen este tipo de problemas por
contaminación del agua de ríos, lagos y
mares, alteran el equilibrio de los
ecosistemas provocando, fenómenos
irreversibles que se reflejan en el deterioro de
la calidad de vida.
PRÁCTICA DE LABORATORIO 2

Estrictamente para el caso del azul de

metileno, se ha determinado que en materia PROTOCOLO
sanitaria la exposición a elevadas
concentraciones causa aumento del ritmo I. Pesar la biomasa correspondiente
con la relación: 1gr biopolímero=1.5
cardiaco, vómitos, mareos, la cianosis y la gr de biomasa.

necrosis de tejido expuesto, además la mayor

parte de los colorantes son mutágenos y/o
cancerígenos lo que convierte a este tipo de
compuestos en un problema de salud
pública; y es aquí donde radica la importancia
de encontrar una técnica para su remoción de
las aguas.
II. Ajustar dos muestras de agua, una
a pH 4 y otra a pH 8.
III. Establecer las relaciones de
biomasa 1:2, 1:1 y 1:05; con ellas
realizar las perlas con un jeringa.

Este trabajo supone una aportación a los

estudios previos que se han hecho en la IV. Realizar las diluciones del azul de
metieno, diluir el xenobiotico de
remoción de un colorante en agua 10,000 ppm a 1,000 ppm para 10 ppm
y 50 ppm con el agua a pH 4 y pH 8.
empleando microorganismos retenidos.

V. Agregar las perlas a los tubos de

ensayo y observar la remocion por 3
dias.
OBJETIVOS
Fig. 1 Diagrama de flujo del protocolo.
GENERAL: Elaboración propia.

Conocer el comportamiento de las levaduras

en un medio inmovilizado a diferentes REACTIVOS Y MATERIALES:
concentraciones de contaminante y biomasa
REACTIVOS DESCRIPCIÓN
en un medio acuoso.

ESPECÍFICOS: Es un compuesto
I. Determinar el pH al cual las levaduras Azul de químico heterocíclico
se desarrollan óptimamente. Metileno aromático con fórmula
II. Identificar el comportamiento de molecular:
remoción del contaminante
encontrado en el medio en relación C16H18ClN3S.
con la biomasa, así como también la
relación de concentración-tiempo del
azul de metileno.

3
PRÁCTICA DE LABORATORIO 2

Agua destilada Sustancia cuya sodio se utiliza también

composición se basa en para producir hipoclorito
la unidad de moléculas de sodio, un
de H2O y ha sido desinfectante del agua.
purificada o limpiada
mediante destilación.
MATERIALES DESCRIPCIÓN
Cloruro de Compuesto químico,
Calcio inorgánico, mineral.
Charola para
Utilizado como
pesar (3)
coagulante en algunos
tipos de tratamientos de
Espátula (1)
aguas.

Biopolímeros Materiales poliméricos o

macromoleculares
sintetizados por los
Pipeta Pasteur
seres vivos.
(3)
Levadura Un tipo de levadura
comercial utilizado industrialmente
(Saccharmyces en la fabricación de pan,
Jeringa de 20
cerevisae) cerveza y vino.
ml (3)
HCl Se emplea comúnmente
como reactivo químico y
se trata de un ácido
Matraz
fuerte que se disocia
Aforado de 10
completamente en
ml (2)
disolución acuosa.

NaOH en Utilizado para controlar

escamas la acidez del agua y Tubo de
ayudar a eliminar los Ensaye (26)
metales pesados del
agua. El hidróxido de

4
PRÁCTICA DE LABORATORIO 2

Agitador Balanza
Magnético (2) analítica

Espectro-
Vaso de
fotómetro
precipitados
600 ml (2)

Crisol de
Acrílico (2)
PROCEDIMIENTO Y OBSERVACIONES

A continuación, se describen

Botes con detalladamente los pasos que se siguieron

tapa de 600 ml para el protocolo expuesto en la fig.1.

I. Pesar la biomasa correspondiente con la

relación: 1gr biopolímero = 1.5 gr de biomasa.
Conductímetr Para la relación 1:0.5 los gramos necesarios
o o tiras de pH de levadura son: 0.75 gr
(1.5)(0.5)
𝑥= = 0.75 𝑔𝑟
1
Para la relación 1:1 los gramos necesarios de
Gradilla levadura son: 1.5 gr
(1.5)(1)
𝑥= = 1.5 𝑔𝑟
1
Para la relación 1:2 los gramos necesarios de
levadura son: 3 gr
Micropipeta
(1.5)(2)
𝑥= = 3 𝑔𝑟
1
II. Ajustar dos muestras de agua, una a pH 4,
utilizando HCl 0.1M; y otra a pH 8, utilizando
NaOH 0.12M, asegurando la cantidad
suficiente para disponer cuando haga falta ya

5
PRÁCTICA DE LABORATORIO 2

que este parámetro se mantendrá durante con las perlas hechas de relaciones
todo el protocolo. diferentes de biomasa. Un ejemplo se
muestra en la fig. 2.

III. Una vez establecidas las relaciones de 10 ppm 50 ppm

biomasa 1:2, 1:1 y 1:05 mezclar rápido y
perfectamente las cantidades de levadura
con el biopolímero hasta eliminar por
completo las burbujas. Una vez bien
mezcladas las partes, utilizar una jeringa para
tomar una muestra de cada una de las
Fig.2 Ejemplo de la distribución de cada subgrupo de
relaciones cuidando no introducir aire. Agitar tubos de ensaye.

lentamente para dejar caer gota a gota la

mezcla en una solución de CaCl para DISCUSIÓN Y RESULTADOS

endurecerlas, de forma que lucirán como En cuanto a las observaciones de la

perlas, un indicador de que se ha realizado
correctamente este paso es que las perlas
que queden suspendidas en la solución no
serán funcionales, las que se precipiten sí lo
serán. Una vez hechas 25 perlas para cada
tubo, estas deberán enjuagarse dos veces
con agua destilada con ayuda de un papel
filtro como soporte.
IV. Realizar las diluciones del azul de
metileno, esto es, diluir el xenobiótico de
10,000 ppm a 1,000 ppm para 10 ppm y 50
ppm en este paso se utiliza el agua con pH
ajustado a pH 4 (tres grupos de pruebas) y
pH 8(dos grupos de pruebas). Cabe señalar
que cada grupo tiene dos subgrupos (50 ppm
y 10 ppm del colorante), a su vez en cada uno
de estos subgrupos hay un tubo de ensayo
remoción, pudimos percatarnos de que en la
primera hora las perlas actuaron
eficientemente pues comenzaron a remover
el colorante del agua. Al transcurrir los días
0,1 y 2 visualmente se llegó a la hipótesis de
que la mejor absorción se dio en el tubo de
ensaye que contenía una concentración de
azul de metileno de 50 ppm y las perlas
estaban hechas con una relación 1:0.5 de
biomasa. Teniendo en consideración este
parámetro, decidimos reafirmar la hipótesis al
analizar los parámetros de absorbancia
(medidos día con día en el
espectrofotómetro) y graficarlos para su
entendimiento, los resultados se observan en
las figuras 3 y 4.

6
PRÁCTICA DE LABORATORIO 2

se asume que el numero microorganismos

pH 4
3.5 disminuyo, puesto que la concentración del
3
contaminante aumento.
2.5
2 De esto se puede rescatar que el pH óptimo
1.5
para los microorganismos es 4 y que el
1
0.5 espacio que estos necesitan se tiene en la
0 relación 1:0.5. Cabe señalar que para
Día Día Día
0 1 2
obtener la concentración se necesitaron los
Relación 1:0.5 3.133 1.58 1.423
Relación 1:1 3.187 1.667 1.669 datos de la absorbancia que se muestran en
Relación 1:2 1.91 1.834 0.845 𝑦 + 0.0004
el anexo 1 y la ecuación: 𝑥 = donde
Relación 1:0.5 Relación 1:1 Relación 1:2 0.17

“y” es la absorbancia y la “x“ la concentración

Fig.3 Gráfica y tabla de datos para la concentración de
50 ppm de azul de metileno en el agua vs cada una de de contaminante.
las relaciones de biomasa en las perlas. pH = 4

pH 8 GLOSARIO
3.5
3 Absorbancia: Se trata de la medida que
2.5
refleja cómo se atenúa la radiación cuando
2
atraviesa un elemento.
1.5
1 Adsorción: Es un proceso por el cual
0.5
átomos, iones o moléculas de gases, líquidos
0
Día Día Día o sólidos disueltos son retenidos en una
0 1 2
Relación 1:0.5 2.561 1.849 1.8612 superficie, en contraposición a la absorción,
Relación 1:1 2.308 1.461 1.643 que es un fenómeno de volumen.
Relación 1:2 3.02 1.849 2.273
Azul de metileno: Es un colorante de
Relación 1:0.5 Relación 1:1 Relación 1:2
naturaleza orgánica con múltiples funciones.
Fig.4 Gráfica y tabla de datos para la concentración de
50 ppm de azul de metileno en el agua vs cada una de Biopolímero: No son más que unas
las relaciones de biomasa en las perlas. Para pH = 8
macromoléculas que están presentes en los
seres vivos.
Puede confirmarse en la fig.3 que la
Biomasa: Cantidad de productos obtenidos
relación 1:0.5 es la que logro una mejor
por fotosíntesis, susceptibles de ser
remoción del contaminante considerando la
transformados en combustible útil para el
concentración inicial de este. La fig.8 muestra
más inconsistencias, por la forma de la recta

7
PRÁCTICA DE LABORATORIO 2

hombre y expresada en unidades de posible. Este trabajo con el método de prueba

superficie y de volumen. y error logro identificar las características en

Células inmovilizadas: Inmovilización de las que los microorganismos actúan

células se refiere a células físicamente eficientemente, estrictamente los parámetros

confinadas o localizadas en una cierta región fueron los siguientes:

definida en el espacio reteniendo sus  Tiempo: Se concluyo que la vida útil de

propiedades y actividades catalíticas. las perlas para el procedimiento es de

Factores abióticos: La noción de abiótico 3 días.

se utiliza en el ámbito de la biología para  El contaminante: la mejor manera en

hacer mención del medio que, por sus la que se remueve el colorante es

características, no puede albergar ninguna concentrarlo a 50 ppm.

forma de vida.  Biomasa: La relación de biomasa mas

eficiente para la remoción fue de 1:0.5
Factores bióticos: Son todos aquellos que
 Ph: El que brinda mayor comodidad a
poseen vida, es decir, que están
los microorganismos para
contemplados en alguno de los reinos de la
desarrollarse es el de Ph = 4.
vida, y cuyas interacciones apuntan a la
supervivencia y la reproducción de su
especie.

Levaduras: La levadura es un hongo

unicelular que se alimenta de azúcares y
compuestos hidrogenados a través de las
enzimas que produce.

Organismos eucariotas: Es un adjetivo

que se utiliza en la biología para referirse a
las células que presentan un núcleo
diferenciado, protegido por una membrana y
con citoplasma organizado.

CONCLUSIONES

La remoción de azul de metileno

empleando la técnica de biomasa retenida es

8
PRÁCTICA DE LABORATORIO 2

MAPA MENTAL DEL CUESTIONARIO

REMOCIÓN DE UN COLORANTE EMPLEANDO MICROORGANISMOS

En este experimento se emplearon usos

Células Para la producción eficiente
microorganismos (levaduras) y eficaz de aminoácidos y
inmovilizadas
retenidos en un biopolímero. antibióticos, la ruta más
viable es la utilización de
características Se refiere a células físicamente
enzimas catalíticas.
confinadas o localizadas en una
Son organismos eucariotas: cierta región definida en el
Levadura (hongo). espacio reteniendo sus
Reproducción: Asexual por propiedades y actividades Obtención de otros
gemación o brotación compuestos:
Sexual por ascosporas ó catalíticas.
-Alcaloides Indólicos
basidiósporas -Digoxina
Tolerancia pH:
Entre 4.5 y 6 óptimos para su
-Fenoles
desarrollo Factores son fundamentales para el
levaduras para crecimiento y desarrollo de la Aplicaciones
consumo levadura:
humano ambientales:
Actividad de agua -Biodegradación
Acidez y capacidad de tampón
Saccharomyces Control del pH de contaminantes
cerevisiae potencial de redox -Técnicas de
Kluyveromyces fragilis capacidad de equilibrio biorremediación
Candida utilis nutrientes de suelos y aguas
fuente de nitrógeno
fuentes de carbono
vitaminas
fuentes de minerales Se demostró el incremento
en la resistencia a la
toxicidad y concentración
Con la finalidad de remover el
contaminante usado (Azul de
del compuesto en la fase
Metileno). líquida.

En las tres concentraciones de biomasa que

El pH más favorable fue de 4 porque al terminar el
experimento se registraron los datos de
concentración final y en el pH 4 las concentraciones
eran menores que el pH 8. Y en este
comportamiento se comprobó que las levaduras
prefieren los medios ácidos y realizan sus funciones
con mayor eficiencia.
utilizamos, observamos que las de menor
cantidad de biomasa respondían de una manera
óptima al momento de degradar el contaminante,
ya que tuvieron mayor área de contacto todos los
microorganismos, lo cual provocó que la
concentración obtenida día con día fuera
disminuyendo.

La finalidad fue ver si los microorganismos utilizados eran capaces de remover el contaminante ya que
el azul de metileno es uno de los colorantes mayormente utilizado en diversos ámbitos y es de suma
importancia encontrar un tratamiento biológico para la remoción de este. Entre los usos del azul de
metileno se encuentra la industria textil, papelera, farmacéutica, alimenticia o en laboratorios de
diagnóstico, docencia e investigación, entre otras. Por tanto, los desechos de estas industrias y
laboratorios contienen alta cantidad de colorantes, entre los que se encuentra el azul de metileno. Estos
colorantes son perjudiciales para el medio ambiente.

9
PRÁCTICA DE LABORATORIO 2

CUESTIONARIO Digoxina: se usa para tratar la insuficiencia y

I. Explique, por qué es tan importante el la frecuencia cardíaca anormal (arritmias).

empleo de células inmovilizadas en los Ayuda a que el corazón funcione mejor y a

procesos industriales para producir controlar su frecuencia cardíaca.

compuestos como: aminoácidos, Fenoles: Utilizados para la fabricación de:

antibióticos. aditivos de aceites lubricantes, adhesivos

R= Para la producción eficiente y eficaz de para la industria maderera y zapatera,

aminoácidos y antibióticos, la ruta más viable resinas para laminados decorativos e

es la utilización de enzimas catalíticas, sin industriales. [2]

embargo, la mayoría de las enzimas no son III. ¿Tienen aplicaciones ambientales las
estables en las condiciones de trabajo. Por células inmovilizadas? Explique
otra parte, al ser solubles en agua, su ampliamente.
separación de los sustratos y productos es R= Sí tienen aplicaciones; el uso de células
difícil, y, por tanto, no se pueden reutilizar. La inmovilizadas en el área ambiental ha sido
inmovilización de enzimas es un proceso en poco explotado, a pesar de que se reconoce
el que se confina o localiza a la enzima en su potencial en la biodegradación de
una región definida del espacio, para dar contaminantes debido al incremento en la
lugar a formas insolubles que retienen su estabilidad de las células y la tolerancia ante
actividad catalítica y que pueden ser ciertos compuestos tóxicos. Entre las
reutilizadas repetidamente. Con la técnicas de inmovilización de células que se
inmovilización de las enzimas se han podido conocen, la adsorción y el atrapamiento en la
superar estos últimos inconvenientes, matriz de un soporte polimérico sin duda son
permitiendo que el proceso biotecnológico las más utilizadas. En la inmovilización por
sea económicamente rentable. [1] adsorción los microorganismos se unen al
II. Con el argumento de la pregunta soporte por interacciones iónicas, que
anterior, cite otros compuestos que se preferentemente deben ser materiales con
obtienen por esta metodología, y cuál es grandes superficies, tales como el carbón
su aplicación. activado. La técnica de atrapamiento es

R= Alcaloides Indólicos: utilizados en la aplicable a diversos microorganismos y en

fabricación de medicamentos de tipo esta se utiliza gelatina, agar, gel de

analgésico. poliacrilamida, alginato de calcio,

carragenina, quitosano, alcohol polivinílico o

10
PRÁCTICA DE LABORATORIO 2

sol-gel como materiales para la formación de menor proporción en suelos. Sin embargo, la
la matriz. las aplicaciones de la biotecnología mayoría de las aplicaciones se han realizado
para resolver problemas ambientales han a nivel de laboratorio. Las aplicaciones de
permitido el desarrollo de diversas técnicas microorganismos inmovilizados en la
de biorremediación para suelos y aguas degradación de contaminantes se han
contaminadas, que se han basado de forma enfocado principalmente a estudios
tradicional en el uso de microorganismos desarrollados en medios acuosos, que han
libres. Sin embargo la incorporación de demostrado que el material usado como
microorganismos libres en los sistemas de soporte puede crear microhábitats de
tratamiento tiene ciertas limitaciones debidas protección y funcionar como una fuente
a la toxicidad inherente de los contaminantes, temporal de sustratos específicos para los
así como a la competencia entre las microorganismos introducidos. Una
poblaciones nativas y las exógenas. Una característica fundamental de los
forma de salvar estas limitaciones es a través microorganismos inmovilizados es su mayor
del uso de microorganismos inmovilizados, tolerancia a altas concentraciones de
ya que la inmovilización brinda a las células sustrato. Esta cualidad es de especial interés
una protección contra el efecto tóxico de las cuando se emplean compuestos
sustancias presentes en el medio y a la contaminantes tóxicos. [2]
depredación por parte de otras poblaciones. IV. Los estudios respecto a la
Cuando se usan células inmovilizadas en inmovilización de células en la actualidad
procesos de remoción de contaminantes se se están enfocando en superar
logra incrementar la tasa global de limitaciones técnicas observadas durante
biodegradación, debido a las altas el proceso de inmovilización, y en la
densidades celulares que se alcanzan, búsqueda de soportes de bajo costo,
además de incrementar la estabilidad y desde tu perspectiva, cuáles son las
tolerancia de los microorganismos a los ventajas de emplear esta metodología y
compuestos tóxicos. Las células cómo propones hacer más eficiente este
inmovilizadas como una alternativa sistema. Explique ampliamente y bien
tecnológica para aplicación ambiental se han fundamentado el argumento.
usado en agricultura, biocontrol, aplicación
R= Como ventajas del empleo de enzimas
de pesticidas, biodegradación de
inmovilizadas podemos destacar:
contaminantes en aguas subterráneas y en
1. El aumento de la estabilidad de la enzima
aguas residuales de origen industrial y en

11
PRÁCTICA DE LABORATORIO 2

2. La posible reutilización del derivado, por lo por parte de otras poblaciones. ¿Qué se
que disminuyen los costes del proceso. buscó atender en este protocolo

3. La posibilidad de diseñar un reactor experimental y por qué? Explique

enzimático de fácil manejo y control, ampliamente y bien fundamentado el

adaptado a la aplicación de la enzima argumento.

inmovilizada. R= En este experimento se buscó en primer

Para obtener un sistema más eficiente es lugar emplear microorganismos retenidos en

necesario tomar en cuenta la compatibilidad un biopolímero o medio inmovilizado, una vez

del proceso con el tipo de microorganismo a logrado esto se sometieron a varias

emplear al igual que darles gran importancia relaciones de colorante azul de metileno y

necesaria a las propiedades de: agua a pH 4 u 8 para determinar cuál es la

óptima para la retención del colorante, y claro
La resistencia física a la compresión,
también saber cuál pH es mejor.
hidrofobicidad, inertes entre las enzimas y
sus derivados, biocompatibilidad, resistencia VI. En este protocolo experimental se

al ataque microbial y bajo costo. empleó organismos eucariotas. Qué

puedes señalar sobre su tamaño, forma,
Las características físicas de los soportes
color, si es un hongo, cómo se
(como el tamaño medio de partícula,
reproducen, cómo crecen. Explique
resistencia mecánica a la compresión, etc.)
ampliamente.
debido a que de ellos se deriva el
comportamiento del sistema inmovilizador y R= Presentan una forma esférica. Tienen

determinará el tipo de reactor por usar bajo diferentes colores: blanco, rosado y beige. Su

condiciones técnicas. [3] tamaño oscila entre 2.5 - 10 micras de ancho

y 4.5 - 21 micras de largo. Caracterizados por
V. En la inmovilización por adsorción
dividirse asexualmente por gemación o fisión
como fue el caso de esta práctica, los
binaria y por tener estados sexuales que no
microorganismos se unen al soporte por
están adjuntos a un esporocarpio (cuerpo
interacciones iónicas, que
fructífero). Se reproducen asexualmente por
preferentemente deben ser materiales con
gemación o brotación y sexualmente
grandes superficies, ya que la
mediante ascosporas o basidiósporas.
inmovilización brinda a los
Durante la reproducción asexual, una nueva
microorganismos una protección contra
yema surge de la levadura madre cuando se
el efecto tóxico de las sustancias
dan las condiciones adecuadas, tras lo cual
presentes en el medio y a la depredación

12
PRÁCTICA DE LABORATORIO 2
la yema se separa de la madre al alcanzar un
tamaño adulto. En condiciones de escasez
de nutrientes las levaduras que son capaces
de reproducirse sexualmente formarán
ascosporas. Las levaduras que no son
capaces de recorrer el ciclo sexual completo
se clasifican dentro del género Cándida.
VII. La mayoría de las levaduras toleran un
rango de pH entre 3 y 10, cuál es el pH que
les resulta más favorable.
R= Se puede decir que el pH óptimo para una
buena actividad fermentativa de la célula de
levadura estaría entre 4,5 y 6. En las masas
de fermentación directa, el pH se acostumbra
a situar entre un 5,2 y un 5,7. Estos datos
varían en función de la masa madre que se
use y de su acidez. [4]
VIII. Las levaduras más estudiadas en el
mundo son cepas provenientes de las
especies: Saccharomyces cerevisiae
(levadura panadera comercial), qué otras
levaduras son aptas para el consumo
humano o microorganismos GRAS (por
las siglas en inglés de Generally
Recognized As Safe)
R= Kluyveromyces fragilis y Cándida utilis. [5]
IX. Qué factores son fundamentales para
el crecimiento y desarrollo de la levadura,
para su obtención en forma industrial, y
por qué.
R= Actividad de agua; acidez y capacidad de tampón,
control del pH, potencial de redox y capacidad de
13
equilibrio, nutrientes, fuente de nitrógeno, fuentes de
carbono, vitaminas, y fuentes de minerales.
X. Los dos principales productores de
alcohol, son Estados Unidos y Brasil, que
juntos producen el 70 % del total
producido a nivel mundial (Estados
Unidos a partir del maíz y Brasil de la caña
de azúcar), seguidos por China, India y
Francia. Actualmente, debido a la escasez
del petróleo y los precios en alza del
mercado, se está convirtiendo en un
hecho cada vez más importante el
replantearse la posibilidad de utilizar
alcohol como combustible. Desde tu
perspectiva con la formación académica
que tienes, cuáles son las ventajas y
desventajas sobre este argumento.
Explique ampliamente y de forma
argumentada.
R= A lo largo de las investigaciones que
realizamos semestre tras semestre, hemos
visto que el etanol es un combustible que
ofrece diversas ventajas acorde con sus
características físicas y químicas, así como el
medio de donde proviene y su
sustentabilidad. De manera general se puede
decir que se resumen en que es un líquido de
baja densidad y alta fluidez con alto calor de
combustión, sus costos de producción y de
transporte son bajos, así como los efectos
negativos en el ambiente. Como dijo Pasteur
en 1857 []: La principal fuente para la
obtención de alcohol es la biomasa,
específicamente aquella que lleva a una
importante producción de glucosa (la
molécula precursora del alcohol en el
proceso de fermentación), esto nos da el
indicio de que la producción de este
PRÁCTICA DE LABORATORIO 2
biocombustible es relativamente fácil y tiene
un impacto mucho menor respecto a quienes
lideran el sector energético. Estrictamente,
las principales ventajas que nos ofrece el
etanol como combustible son:
1. Es un recurso renovable, ya que como
describimos, proviene de la biomasa.
Disminuye en forma importante por
sustitución parcial o total las
cantidades utilizadas de nafta
(Hidrocarburo líquido, incoloro, volátil
y muy inflamable). Esto lleva a una
reducción en el uso y la importación de
hidrocarburos y favorece el uso de
recursos naturales renovables
nacionales. Puede contrarrestar y
reducir el impacto de los problemas
recurrentes de precios y reservas de
hidrocarburos en períodos de crisis
energéticas.
2. Constituye una opción factible de
promover una reactivación económica
y productiva. Es capaz de integrarse
en los sectores públicos y privados.
Esta actividad, primariamente agrícola
e industrial, generaría nuevas fuentes
de trabajo directas e indirectas,
fomentando el empleo rural, la
regionalización industrial y el
desarrollo de regiones con potencial
agroindustrial, llevando al país a una
notable y contundente alza
económica.
3. Químicamente, posee un alto grado de
solubilidad y miscibilidad con la nafta.
El etanol se obtiene en estado líquido,
tiene un importante número de
octanos y no deteriora la calidad de las
naftas para su uso en los motores de
combustión, lo que lo hace adecuado
para su uso en automotores.
4. En diferentes investigaciones se
demuestra con hechos que su
utilización como combustible
contribuye a reducir la polución
atmosférica debido a una menor
producción de partículas carbonosas.
Disminuye ligeramente la emisión del
14
CO2 con efecto invernadero, con
respecto a la nafta, lo que se traduce
en la reducción de las emisiones de
monóxido de carbono, óxidos de
sulfuro y óxidos de nitrógeno; que
como hemos visto son gases que
afectan directamente a la biota.
Sin embargo, como todos los procesos
sustentables, este combustible tiene sus
limitaciones como fuente energética, las más
importantes son:
1. Como cualquier proceso que requiere
de una constante compra de insumo
para su producción, el precio estará
directamente ligado al mercado
nacional e internacional de la materia
prima en cuestión. En nuestro país
corresponde al del azúcar.
2. Exige un consumo mayor de
combustible, ya que el etanol posee un
30% menos de densidad de energía
que los combustibles provenientes del
petróleo. La nafta provee 42
Mjoules/kg, mientras que el etanol solo
29 Mjoules/kg. Energéticamente, un
litro de nafta equivale a 1.5 litros de
etanol. La adición de un 10% de etanol
a la nafta reduce el calor de
combustión solamente en un 3.8 %, lo
que es prácticamente similar en
cuanto a combustible consumido. [6]
Por otra parte, la alta volatilidad del
etanol anhidro afecta la eficiencia de la
mezcla y puede llevar a intermitencias
en el suministro de combustible al
motor y a pérdidas por evaporación.
La evaporación aumenta con la
temperatura ambiente. La elevada
afinidad química que posee el etanol
por el agua, en virtud de su estructura
molecular, puede generar problemas
en la correcta operación del motor.
3. Requerimientos de infraestructura
especial para transporte y almacenaje.
Se necesitan vehículos estructural y
mecánicamente adaptados para
operar con alcohol y con las mezclas
PRÁCTICA DE LABORATORIO 2

de alconafta, lo que provee una

operabilidad general inferior a la
tradicional para las naftas. Además,
como es bien sabido, el etanol puede
provocar oxidación.
4. La producción agrícola de la biomasa
requiere cultivos de grandes
extensiones de tierra, las que podrían
ser utilizadas con otro fin, por ej. para
alimentación.
A lo largo de los años en México se han dado
los primeros pasos para la producción de
este biocombustible. En algunos casos, dicho
proceso se encuentra en su fase de
investigación. [9] Incluso, se hacen presentes
algunas carencias institucionales respecto al
impulso en la investigación, producción y, por
tanto, consumo de dicho biocombustible en el
parque vehicular del país. Sin embargo,
como caso de éxito tenemos a la empresa:
Eoinova, dirigida por Gerardo Nungaray
Benítez que mostró el primer aditivo natural
(Oxifuel) en México, formulado con alcohol
etílico desnaturalizado, obtenido del
aprovechamiento sustentable de caña de
azúcar nacional, producto que posee el
reconocimiento de la Secretaría de Energía
(Sener). Con un precio de 13 pesos por litro,
Oxifuel es vendido actualmente en Veracruz,
Oaxaca, Estado de México, Morelos, Hidalgo,
Tlaxcala y Puebla. Su aplicación ha
reactivado la economía de zonas rurales a lo
largo y ancho de la República Mexicana. En
cuanto a su alcance ha mostrado claros
avances ya que la organización firmó un
contrato con Petróleos Mexicanos (Pemex)
para concretar la venta de etanol carburante
a la paraestatal en Veracruz; desde 2015
Oxifuel busca trasladar etanol a la Península
de Yucatán, actualmente realiza los trámites
ante la Secretaría de Medio Ambiente y
Recursos Naturales (Semarnat) para abrir
otra estación de servicio. [7]
XI. En el protocolo experimental
propuesto se realizó la aplicación de
microorganismos inmovilizados en la
remoción de un contaminante en un
sistema líquido. Se demostró el
incremento en la resistencia a la toxicidad
y concentración del compuesto en la fase
líquida.
R= Incremento en la resistencia a la toxicidad
este fenómeno, es atribuido a diferentes
razones entre las cuales se encuentran las
diferencias fisiológicas entre los
microorganismos inmovilizados y los de
crecimiento libre; también es atribuido a la
concentración de nutrientes alrededor de la
matriz, lo cual permite que los
microorganismos sobrevivan a las altas
concentraciones de compuestos tóxicos. Por
último, la matriz de exopolisacáridos formada
por los mismos microorganismos, reduce la
difusión de las sustancias tóxicas hacia el
interior de la biopelícula, gracias a la carga
neutra o poli aniónica que puede tener el tipo
de exopolisacárido que sea, protegiendo así
a los microorganismos que la componen.
Aumento en la concentración del compuesto
en la fase líquida, se debe a que la perla que
contiene atrapada a la biomasa, comienza a

Este caso evidencia que la producción del liberarla, talvez por deficiencias en la perla
alcohol como combustible es totalmente permitiendo así el crecimiento y reproducción
factible y que se debe apoyar en todos los
sentidos a este tipo de nuevas empresas.

15
PRÁCTICA DE LABORATORIO 2
lo que conlleva a que el compuesto
incremente en la fase liquida.
XII. En este protocolo experimental, cuál
es el pH que les resulta más favorable en
la remoción del contaminante y por qué.
R= El pH más favorable fue de 4 porque al
terminar el experimento se registraron los
datos de concentración final y en el pH 4 las
concentraciones eran menores que el pH 8.
Y en este comportamiento se comprobó
que las levaduras prefieren los medios ácidos
y realizan sus funciones con mayor eficiencia.
XIII. Cómo explicas el comportamiento de
la cantidad de biomasa empleada en la
remoción del contaminante.
R= En las tres concentraciones de biomasa
que utilizamos, observamos que las de
menor cantidad de biomasa respondían de
una manera óptima al momento de degradar
el contaminante, ya que tuvieron mayor área
de contacto todos los microorganismos, lo
cual provocó que la concentración obtenida
día con día fuera disminuyendo.
XIV. La biodegradación de compuestos
orgánicos, empleando microorganismos
es un proceso complejo, cuyos resultados
cuantitativos y cualitativos dependen de
factores abióticos y bióticos. Entre los
primeros se deben enumerar a las
condiciones ambientales locales como
pH, temperatura, principalmente, además
de la concentración y la disponibilidad del
16
contaminante. Entre los factores bióticos
son fundamentales la composición, la
adaptabilidad y capacidad fisiológica de
las poblaciones microbianas. En este
protocolo experimental se dio una
biodegradación, explique qué ocurrió.
R=En este experimento lo que se realizó fue
una absorción del contaminante ya que
quedaba retenido en los microorganismos.
Las perlas con microorganismos
encapsulados se teñían al pasar el tiempo,
pero llegaba un momento en el cual en lugar
de seguir reteniendo liberaba una cantidad
del contaminante. Esto se observó en el color
de las perlas y al analizar la concentración del
contaminante que había.
XV. Qué factores abióticos se estudiaron
en este protocolo experimental y cuál es
el más importante en función a los
resultados experimentales obtenidos.
R= Los factores abióticos estudiados en este
experimento, fueron el pH, la concentración
de colorante en el agua. El factor abiótico
más importante fue el pH debido a que tiene
influencia en la actividad de las levaduras.
XVI. Qué diferencias notaste respecto al
protocolo experimental anterior y este.
R= El protocolo ya se había hecho y las
conclusiones de este fueron mucho mas
claras, lo que nos ayudo a ver con mas
facilidad lo que sucedería al trascurrir los días
de experimentación. Sin embrago, no todo
PRÁCTICA DE LABORATORIO 2

fue replicar, y es lo que más le gusto a todo colorantes son perjudiciales para el medio
este equipo, el añadir las incógnitas sobre ambiente.
cual estrategia seria la que en realidad XIX. Qué perspectivas tenías antes de
funcionaria le dio a este protocolo una iniciar el semestre sobre este laboratorio
enseñanza más de como observar, discutir e de bioprocesos ambientales. En base al
interpretar correctamente los resultados. desarrollo de los protocolos
XVII. Cuál es la conclusión a la que experimentales propuestos para este
llegaste en este protocolo experimental. laboratorio, y en los cuales, estas

R= La mejor relación fue la de 1:0.5 porque participando activamente, habrá

fue la óptima ya que tuvo mejor absorbancia, cambiado tu perspectiva del mismo, si es

en un pH 4 ya que los hongos de levaduras así explica por qué.

se desarrollan en pH ácidos. R= Todo el equipo concuerda con que en la

XVIII. Cuál fue la finalidad de emplear este sesión donde esta pregunta se trató frente al
contaminante y como lo correlacionas con grupo quedaron muchos comentarios por
las actividades industriales desarrolladas hacer, pues en muchos aspectos algunos
en tu ciudad, estado o país. compañeros del grupo y este equipo estamos

R= La finalidad fue ver si los de acuerdo, uno de ellos es que en el

microorganismos utilizados eran capaces de laboratorio no se percibe el liderazgo que

biodegradar el contaminante ya que el azul deberían tener los encargados, lo que

de metileno es uno de los colorantes dificulta el entendimiento de todo el protocolo.

mayormente utilizado en diversos ámbitos y Aunado a lo anterior el quipo concuerda en

es de suma importancia encontrar un que realmente la perspectiva cambió ya que

tratamiento biológico para la remoción del se esperaba trabajar muy similar a los otros

mismo. Entre los usos del azul de metileno se laboratorios, esta manera hace que uno se

encuentra la industria textil, papelera, confunda y pierda el desenlace de la práctica,

farmacéutica, alimenticia o en laboratorios de se considera que es mejor tener un protocolo

diagnóstico, docencia e investigación, entre antes de iniciar la sesión para saber que

otras. Por tanto, los desechos de estas vamos a realizar y sólo llegar a efectuar el

industrias y laboratorios contienen alta experimento, este modelo de trabajo anterior

cantidad de colorantes, entre los que se nos dio el poder de comprender el proceso.

encuentra el azul de metileno. Estos Se complica mucho trabajar de esta nueva

forma ya que también no se esperaba que las

17
PRÁCTICA DE LABORATORIO 2

prácticas se llevaran a cabo en días que no idea enviar un documento donde vengan el título,
están estipulados en el horario para una los objetivos y el procedimiento para que cuando
sesión de laboratorio (en otros laboratorios lleguemos a laboratorio ya sepamos qué es lo que
también había que ir otros días, pero no se va a hacer y si nos surgió una duda ellos sean
demasiados ni en todas las practicas) lo cual quien nos la resuelvan. Además de que ellos deben
es complicado porque todos tenemos ir mucho más organizados en cuanto a designar
distintos horarios, y no creemos justo que actividades, creemos que así los errores serian
unos vayan y otros no porque se pierde la menos y la idea del protocolo completo se
secuencia del experimento y a la hora de entendería mucho más, si darán ordenes, deben
realizar el reporte es complicado y uno no hacerlo al frente y asegurándose que todos sepan
aprende que es lo importante, esto debido a que están por decir algo importante no en grupos
que todos tenemos puntos de vista muy por que no todos reciben la información correcta.
diferentes y tal vez lo que una persona ignoro Creemos que así están haciendo la comprensión
para otra es fundamental y al momento de más difícil.
compartir su experiencia con el grupo, esta
no está completa y queda sujeta a más
errores. Tener el conocimiento en cambio con
BIBLIOGRAFIA:
esta técnica de estudio no se está logrando,
[1] Arroyo, D. R. Miguel. (1998).
por ende, se considera que no es factible.
Inmovilización de enzimas. Fundamentos,
métodos y aplicaciones. Recuperado 2
XX. Cuál es tu visión sobre el hecho de
octubre, 2019, de
que un compañero tuyo, sea quién indique
https://www.ugr.es/~ars/abstract/arroyo.pdf
el camino a seguir para el desarrollo del
[2] M.A. Martínez-Trujillo y M. García-Rivero.
protocolo experimental propuesto.
(2011). Aplicaciones ambientales de
Explique ampliamente. microorganismos inmovilizados. 16 de
Diciembre 2011, de SciELO Sitio web:
R= Puede que sí sea más digerible la información http://www.scielo.org.mx/scielo.php?script=s
ya que ellos ya lo comprenden porque lo hicieron ci_arttext&pid=S1665-27382012000100005
antes pero, la verdad a la hora de llevar acabo el [3] Fajardo Ochoa, R. (s.f.).
protocolo y hacer el reporte se vuelve un problema INMOVILIZACIÓN DE CÉLULAS Y
ENZIMAS. Recuperado 6 octubre, 2019, de
porque como unos hacen una cosa y otros se https://www.researchgate.net/publication/22
ocupan de otra no se sabe al 100 por ciento que se 0007839_Inmovilizacion_de_celulas_y_enzi
mas
hace en la práctica, al equipo le parecería buena

18
PRÁCTICA DE LABORATORIO 2

[4] La Levadura (Saccharomyces

Cerevisiae). (2009, 8 abril). Recuperado 2
octubre, 2019, de
http://www.artesblancas.com/la-levadura-
saccharomyces-cerevisiae

[5] Caridad Suárez-Machín*, Norge Antonio

Garrido-Carralero, Carmen Amarilys
Guevara-Rodríguez. ( 1, enero-abril, 2016).
Levadura Saccharomyces cerevisiae y la
producción de alcohol.. ICIDCA. Sobre los
Derivados de la Caña de Azúcar, 1, 10.

[6] Alvarez, Silvia; Evelson, Pablo; Boveris,

Alberto . (Noviembre 2008). Etanol : El
combustible del futuro. 28/09/2019, de
Universidad de Buenos Aires Sitio web:
http://repositoriouba.sisbi.uba.ar

[7] Dr. Felipe de Alba, Juana Martín y Alexia

Macario. (Febrero 2017). Etanol o las
alternativas combustibles: ¿Qué hacer frente
al “gasolinazo” en México?. 28/09/2019, de
Centro de Estudios Sociales y de Opinión
Pública Sitio web: CESOP-IL-
14DT239EtanololasAlternativasCombustible-
20170203]

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PRÁCTICA DE LABORATORIO 2

ANEXOS

1. RESULTADOS

PH 4 DÍAS
RELACIÓN CONCENTRACIÓN ABS CONCENTRACION ABS CONCENTRACIÓN ABS CONCENTRACION

10ppm 0.543 2.7106 0.217 0.9475 0.242 1.083

1:0.5
50 ppm 0.503 2.4943 0.340 1.6127 0.367 1.759

10ppm 0.620 3.1271 0.361 1.7263 0.412 2.002

1:1
50 ppm 0.805 4.1276 0.525 2.6133 0.580 2.911

10ppm 0.480 2.3699 0.382 1.8399 0.449 2.202

1:2
50 ppm 0.470 2.3158 0.258 1.1692 0.409 1.986

PH 4 DÍAS
RELACIÓN CONCENTRACIÓN ABS CONCENTRACION ABS CONCENTRACIÓN ABS CONCENTRACION

10ppm 0.452 2.218 0.235 1.045 0.212 0.92

1:0.5
50 ppm 0.621 3.133 0.334 1.58 0.35 1.423

10ppm 0.526 2.619 0.286 1.321 0.311 1.456

1:1
50 ppm 0.631 3.187 0.35 1.667 0.356 1.699

10ppm 0.562 2.813 0.33 1.559 0.348 1.656

1:2
50 ppm 0.395 1.91 0.196 1.834 0.198 0.845

PH 8 DÍAS
RELACIÓN CONCENTRACIÓN ABS CONCENTRACION ABS CONCENTRACIÓN ABS CONCENTRACION

10ppm 0.522 3.073 0.292 1.720 0.289 1.702

1:0.5
50 ppm 0.435 2.561 0.314 1.849 0.316 1.861

10ppm 0.451 2.655 0.300 1.767 0.326 1.920

1:1
50 ppm 0.392 2.308 0.248 1.461 0.279 1.643

10ppm 0.616 3.626 0.395 2.325 0.408 2.402

1:2
50 ppm 0.513 3.02 0.314 1.849 0.386 2.272

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