Introducción EZ-10 Spin Column Kits proporcionan un método rápido, sencillo y eficaz para la

purificación del ADN genómico de diversas fuentes como Bacterias, Tejidos vegetales, Tejidos
animales, Células y Sangre. Al aprovechar las ventajas de nuestra tecnología de purificación de
ADN basada en sílice, el ADN se adsorbe selectivamente en la membrana basada en sílice
incrustada en la columna de centrifugación EZ-10. Otros componentes e impurezas fluyen a través
de la columna o se eliminan durante los pasos de lavado. El ADN genómico se eluye fuera de la
columna y puede utilizarse fácilmente en la mayoría de las aplicaciones posteriores, incluyendo la
digestión de enzimas de restricción, PCR, Southern-blotting, etc. El procedimiento de purificación
que se utiliza en estos kits no requiere el uso de compuestos peligrosos como fenol, cloroformo o
CsCl. El ADN se purifica sin pasos adicionales de precipitación de etanol. Limitaciones de uso

Estos kits están diseñados para uso exclusivo en investigación. El ADN purificado no debe utilizarse
para transfusiones de animales vivos. Tampoco debe utilizarse para el diagnóstico humano ni para
la producción de drogas.

Características

Simple, rápido y eficiente.

Preparación de ADN genómico de alta calidad a partir de diversas fuentes.

Alto rendimiento y reproducibilidad.

No se requiere extracción de cloroformo fenólico ni precipitación de etanol.

Alta capacidad: hasta 10 µg de ADN por columna.

Aplicaciones

Purificación de hasta 10 µg de ADN genómico de diversas fuentes.

Almacenamiento

Todos los componentes (excepto la proteinasa K) pueden almacenarse a temperatura ambiente. La

proteinasa K debe mantenerse a 4ºC durante un corto periodo de tiempo o a -20ºC durante un
largo periodo de tiempo. Los componentes del kit son estables durante 12 meses a temperatura
ambiente después de su recepción. Para una máxima estabilidad, almacene todo el contenido a
4ºC.

Procedimientos para el aislamiento del ADN genómico de las células o bacterias 1. Preparación de
la muestra.

B. Colección de Bacterias Gire el número apropiado de bacterias (aproximadamente 106~107) a

6.000 x g (8.000 rpm) durante 5 minutos a temperatura ambiente. Eliminar completamente el
sobrenadante y volver a suspender las células en 200 µl de TE frío (no incluido en el kit), proceder
al paso 2.

2. Añadir 400 µl de solución de digestión a 200 µl de la muestra del paso 1. Mezcle bien. Añadir
3 µl de solución de Proteinasa K (2mg/150 µl) para muestrear e incubar a 55 ºC durante 5 minutos.
No agregue la solución de proteinasa K directamente a la solución de digestión. El período de
incubación depende de la naturaleza de la muestra. Para los cultivos celulares, 5 minutos son
generalmente suficientes para obtener un lisado completo. Las muestras de tejido pueden requerir
de 3 a 5 horas. Períodos más largos de incubación (incluso durante la noche) no afectarán el
resultado. Si se requiere ADN genómico libre de ARN, añadir 20 µl de RNasa A (10 mg/ml, no
suministrada con el kit), mezclar en vórtice e incubar durante 5 minutos a temperatura ambiente
antes de continuar con el paso 3.

3. Añadir 260 µl de etanol 100% y mezclar bien. Aplique la mezcla sobre una columna de
centrifugado EZ-10 que se coloca en un tubo de recogida de 2,0 ml. Girar a 8.000 x g (10.000 rpm)
durante 2 minutos.

4. Deseche el flujo a través del tubo de recolección. Añadir 500 µl de Solución de Lavado y girar a
8.000 x g (10.000 rpm) durante 2 minutos.

5. Repita el paso 4.

6. Descarte el flujo a través de la válvula. Gire a 8.000 x g (10.000 rpm) durante un minuto adicional
para eliminar la cantidad residual de solución de lavado.

7. Colocar la columna EZ-10 en un tubo limpio de Eppendorf de 1,5 ml. Añadir 30-50 µl de tampón
de elución en la parte central de la membrana de la columna. Incubar a RT durante 2 o 3 minutos.
Incubar el tubo a 37ºC o 50ºC durante 2 minutos puede aumentar el rendimiento de recuperación.

8. Girar a 8.000 x g (10.000 rpm) durante 2 minutos para eluir el ADN de la columna.

9. Para su almacenamiento a largo plazo, mantener alícuotas de ADN genómico purificado a -20 ºC.

10. Medir la cantidad de ADN por absorción de UV en A260 (1.0 OD unidad es equivalente a 50 µg).
Evaluar la calidad del ADN genómico mediante un gel de agarosa analítico al 0,7%. La longitud del
ADN genómico es de unos 50 kb.

1. Bajo rendimiento

a. Almacenamiento inadecuado del material de partida

>>>Preparar muestras frescas y utilizar inmediatamente.

b.Demasiado o muy poco material de partida

>>>Reducir o aumentar el material de partida en consecuencia.

c. Preparación incorrecta de los tampones

>>>Cada paso debe ser seguido estrictamente.

2. Contaminación por ARN

Realizar el tratamiento opcional con RNase de acuerdo con el protocolo.

3. Relación OD260nm/280nm fuera del rango 1.6-2.2

Si la relación de OD260nm/280nm es mayor que 2.2, puede haber trazas de etanol presentes. Si la
proporción de OD260nm/280nm es menor a 1.6, puede haber contaminación proteica. Asegúrese
de que la muestra se mezcle bien después de la digestión de la proteinasa K.

4. El ADN no funciona bien

a. Cizallamiento de ADN

>>>Evitar la congelación y descongelación repetida del material de partida; si las muestras son
demasiado viejas, comenzar con una nueva muestra.

b. Arrastre de etanol

>>>Separe los pasos adicionales antes de la elución.