Determinación espectrofotométrica del ácido láctico

Resumen: se ha desarrollado un método espectrofotométrico eficiente y económico para la

determinación De ácido láctico en el estado individual y en alimentos y líquidos biológicos y
culturales. El método se basa. Sobre la determinación espectrofotométrica del producto coloreado
de la reacción de iones lactato con cloruro de hierro (III) a 390 nm. Se han encontrado las
condiciones óptimas de la reacción, y una curva de calibración en el Se ha construido un rango de
0,3 a 10 g / l de ácido láctico con el coeficiente de correlación 0,9999. El método no requiere
preparación compleja de la muestra.

Palabras clave: espectrofotometría, ácido láctico, cloruro de hierro (III).

El ácido láctico (CH3CHOHCOOH) se usa hidroxidifenilo en presencia de iones

ampliamente en Alimentos, cosmética,
farmacéutica, cuero, química, y otras
industrias; por lo tanto, el desarrollo de
Métodos económicos para la determinación
del ácido láctico es de gran importancia. El
consumo mundial del ácido láctico es de
varias decenas de miles de toneladas y Se
espera que aumente significativamente [1].
Métodos eficientes y económicos para la
determinación. de ácido láctico puede ser
ampliamente utilizado, en primer lugar, para
El control de la fermentación de cepas
bacterianas de bacterias del ácido láctico, que
se utilizan tradicionalmente para la
Producción de ácido láctico, así como para el
control de calidad de alimentos, materias
primas agrícolas, etc. En la actualidad, Varias
versiones de HPLC, incluyendo ion [2], par de
iones [3], cromatografía de exclusión iónica
[4] y de fase inversa [5] son los métodos más
precisos de la determinación del ácido láctico.
El uso de HPLC en rutina. La práctica está
limitada por la necesidad de complejos.
preparación de la muestra y también por la
necesidad en costosos Equipos y personal
cualificado.
Un método basado en la oxidación del ácido
láctico al aldehído acético y la determinación
del aldehído. ya sea por el método del
bisulfito [6] o por coloración con p-
metálicos [7] También se utiliza para la
determinación de ácido láctico. Una
desventaja de este conjunto de métodos es la
necesidad de la Eliminación de impurezas de
proteínas y carbohidratos. utilizando ácido
fosfórico de tungsteno 12, CuSO4 y CaO Antes
de la determinación del ácido láctico. KMnO4,
H2SO4, o Ce (IV), se utilizan como oxidantes.
trabajo con el que requiere especial
Precauciones. El análisis toma Varias horas, y
los resultados del análisis pueden ser
insuficientes. Preciso por la eliminación
incompleta. de impurezas de la muestra de
ensayo.
Un método enzimático basado en la
transformación. de ácido láctico a piruvato
bajo la acción de la enzima lactato
deshidrogenasa en presencia de NAD +, que a
su vez se reduce a NADH, también se usa para
La determinación del ácido láctico. La
concentración de El ácido láctico en la
muestra es proporcional a la cantidad. de
NADH formado en la reacción enzimática; es
determinado por espectrofotometría a 340
nm [8]. La Utilización de costosas
hidrogenasas de L y D-lactato purificadas. Con
la cierta actividad enzimática es necesario.
Para la implementación de este método.
Además, el método es complejo y requiere
una gran minuciosidad en El rendimiento de
las mediciones debido a la Inestabilidad de
NAD + y NADH. Hay comerciales Kits de
reactivos para la determinación de ácido
láctico por el método enzimático; sin
embargo, su costo es extremadamente alto y
es de aproximadamente $ 400 para 100
pruebas [9, 10].
Por lo tanto, el problema del desarrollo de
métodos eficientes Y sencillos para la
determinación del ácido láctico es muy
importante. Los métodos
espectrofotométricos de análisis son
altamente selectivos y sensibles. Se utilizan
con frecuencia en laboratorios debido a Su
simplicidad y disponibilidad.
El objetivo del presente trabajo fue el
desarrollo. de un espectrofotómetro simple,
económico y rápido. Método para la
determinación de los isómeros L y D de ácido
láctico adecuado, en particular, para la
microbiología industria en la determinación
de ácido láctico en Líquidos culturales.
EXPERIMENTAL
Equipo. Un espectrofotómetro UV-Vis 10S
(Genesys, Estados Unidos) (l = 1 cm) se utilizó.
Materiales, reactivos y soluciones. FeCl3 ⋅
6H2O, grado reactivo (Khimmed, Rusia), ácido
DL-láctico, cp grado (89%, VAG Chemie,
Alemania), glaciar CH3COOH, grado cp
(99.8%, Khimmed, Rusia), etanol, grado cp
(Reakhim, Rusia), glicerina, grado reactivo
(Khimmed, Rusia), y suero bovino Se usaron
albúmina (98–99% Sigma, Estados Unidos).
Las soluciones se prepararon por disolución
de los correspondientes Porciones pesadas de
porciones y porciones alícuotas. En agua des
ionizada.
Construcción de la curva de calibración.
Ácido láctico (1.2 g) con la concentración
conocida (89%, ρ = 1,2 g / ml) se colocó en un
matraz volumétrico de 10 ml y Diluido con
agua. Una solución madre con la
concentración x De ácido láctico se
obtuvieron 89 g / l. Una serie de Se
prepararon soluciones de ácido láctico a
partir de la solución madre. utilizando
diluciones dobles.
Una solución de cloruro de hierro (III) (0.2%)
fue preparado. Se colocó cloruro de hierro (III)
(0,3 g) en un Matraz volumétrico de 100 ml,
diluido hasta la marca con Agua y se agita a la
completa disolución de la sal. La solución
debe estar a temperatura ambiente 25 ±. 5 °
C. Una solución de ácido láctico (50 μL) de un
correspondiente La concentración se añadió a
2 ml de una solución al 0,2%. de cloruro de
hierro (III) y agitado. La absorbancia de las
soluciones coloreadas obtenidas se midió a
390 nm. La solución de referencia contenía 2
mL de un Solución al 0,2% de cloruro de hierro
(III). La dependencia De la absorbancia de
soluciones coloreadas sobre la concentración.
de ácido láctico tomado para la reacción se
utilizó para El cálculo de los parámetros de
ecuación lineal. Correspondiente al rango de
linealidad de la calibración. curva. El
tratamiento de los resultados y la
construcción. de la curva de calibración se
realizaron con la estadística. 6.0 software.
Método de la determinación
espectrofotométrica de ácido láctico. Una
solución de prueba (50 μL) que contiene
láctico. se añadió ácido a 2 ml de una solución
al 0,2% de hierro (III) Cloruro y agitado y se
midió la absorbancia a 390 nm frente a la
solución de referencia (2 mL de un 0.2%).
Solución de FeCl3). La reacción y medidas
fueron. Realizado a 25 ± 5 ° C. El color de la
solución era Estable durante 15 min.
Determinación del ácido láctico en líquido
cultural. El líquido Cultural se separó de las
células mediante centrifugación. El
sobrenadante se diluyó 20 veces con agua.
des ionizada. Se determinó el ácido láctico en
la muestra. Por el método
espectrofotométrico para la determinación
de ácido láctico. La concentración de ácido
láctico fue calculada utilizando una curva de
calibración teniendo en cuenta la dilución de
20 veces de la muestra de prueba.
Determinación del ácido láctico en la
composición de Producto lácteo
fermentado. El suero se separó de la Se
precipita por centrifugación y se diluye diez
veces con agua des ionizada. Se determinó el
ácido láctico en la muestra. por el método
espectrofotométrico para la Determinación
del ácido láctico. La concentración de láctico.
ácido se calculó utilizando una curva de
calibración tomando en cuenta la dilución de
10 veces de la muestra de prueba.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Espectro de absorción. La reacción del hierro
(III). Se obtiene cloruro con ácido láctico en
solución acuosa. En la formación de lactato de
hierro (III) de color verde amarillento en la
solución. Espectros de absorción de los
siguientes componentes. De la mezcla de
reacción se registraron: Solución de cloruro
de hierro (III) y una solución láctica. Ácido, así
como el producto de su interacción. hierro
(III) lactato (figura). Se puede ver que él Se
observó absorción máxima de hierro (III)
lactato. a 390 nm. La absorbancia del ácido
láctico en esta región. está cerca de cero y es
sustancialmente más bajo para la solución de
cloruro de hierro (III) que para el producto de
reacción hierro (III) lactato. Como resultado
del estudio, nosotros Seleccionó la longitud
de onda analítica a 390 nm.
Efecto de la concentración de cloruro de
hierro (III). Los Efecto de la concentración de
cloruro de hierro (III) en la absorbancia del
producto de reacción se estudió en 390 nm.
Solución de cloruro de hierro (III) con la
concentración. De 0.05 a 0.3% se añadió a un
ácido láctico. Solución con una concentración
constante de 10 g / l. Las mediciones se
realizaron contra cloruro de hierro (III).
Soluciones de concentraciones
correspondientes. La absorbancia de la
solución aumenta con un aumento. en la
concentración de cloruro de hierro (III),
alcanzando El valor óptimo a la concentración
del 0,2%. El aumento adicional en la
concentración del reactivo hizo No aumenta
la intensidad del color del hierro formado (III).
solución de lactato.
Efecto del tiempo. La intensidad del color de
la reacción. producto, hierro (III) lactato, en
solución se estudió en 390 nm en el rango de
1 a 30 min. Para realizar la reacción, una
solución al 0,2% de cloruro de hierro (III) y una
solución de ácido láctico de la concentración
10 g / l fueron usado. El color del hierro (III)
lactato fue estable en el rango de 1 a 15
minutos, luego una ligera disminución en la
absorbancia ocurrido, que puede ser debido a
la parcial Descomposición del producto de
reacción.
Efecto de las impurezas sobre la
determinación del ácido láctico. El efecto del
etanol, proteínas, glicerina y acético. ácido,
productos secundarios del proceso
enzimático presente en Líquidos culturales en
la producción microbiológica de Se estudió el
ácido láctico y también en la alimentación. Los
estudiados Se añadieron sustancias de
impureza (100 μL) a la Mezcla de reacción que
contiene 2 ml de una solución al 0,2% de
Cloruro de hierro (III) y 50 μL de una solución
al 0,5% de láctico. ácido, y la absorbancia de
las soluciones obtenidas. se midió a 390 nm.
Los resultados del análisis de la solución
obtenida y una solución que contiene 2 ml de
una Solución al 0,2% de cloruro de hierro (III),
50 μL de un 0,5%. Se compararon solución de
ácido láctico y 100 μl de agua. Los resultados
se presentan en la Tabla 1. Puede ser Visto
que el efecto de los compuestos estudiados es
insignificante. y no supera el 2%. Así, el
desarrollado método asegura la
determinación del ácido láctico en Mezclas
complejas y no requieren la depuración. del
producto diana en la preparación de la
muestra escenario.
Curva de calibración. La absorbancia del
hierro (III) lactato. La solución (A) es
proporcional a la concentración. de ácido
láctico (c) en el rango de 0.5 a 11 g / L. La
ecuación de la curva de calibración tiene la
forma A = 0.1414c - 0.0222, el coeficiente de
correlación es 0.9999, nivel de confianza
0.000001, y aseguramiento estadístico de
Aproximación 0.9998.
Aplicación analítica. El método desarrollado
fue Aplicado a la determinación de ácido
láctico en un acuoso. solución, en la
composición de un líquido cultural en
Producción microbiológica, así como en la
composición. de un producto lácteo
fermentado obtenido por la Inoculación de la
leche utilizando bacterias del ácido láctico.
Para evaluar la exactitud del método
desarrollado, Comparamos los resultados de
los estudios obtenidos utilizando el Método
espectrofotométrico propuesto y (Tabla 2). El
procesamiento estadístico de los datos (n = 3)
mostró que los resultados del método
espectrofotométrico cayeron En el intervalo
de confianza de los resultados de las
mediciones. por HPLC. La diferencia de los
resultados no lo hizo. supera el 3%. El método
propuesto da suficientes resultados precisos
de la determinación de la cantidad de Ácido
láctico tanto en el estado individual como en
la composición. de mezclas complejas, como
líquidos culturales. o la comida.
Así, el método espectrofotométrico
presentado es Simple, sensible, económico y
que no consume mucho tiempo. no requiere
preparación compleja de la muestra, y Da
resultados suficientemente precisos.
Además, la propuesta Método asegura la
determinación de ambos terrenos. D-
isómeros del ácido láctico.
El método puede ser utilizado en la práctica
rutinaria de Laboratorios genéticos y
microbiológicos en la creación. y pruebas de
cepas productoras de ácido láctico,
Elaboración de métodos de cultivo, etc. Los
propuestos. También es necesario el método
para el control de la producción. De ácido
láctico a las plantas de producción
microbiológica. de ácido láctico.
Cabe destacar que, aunque la longitud de
onda 390 nm es óptimo para la medición de la
absorbancia. de hierro (III) lactato, posibilidad
de uso de este También existe un método a
400-405 nm (figura), que reduce ligeramente
su sensibilidad; Sin embargo, permite al
analista. Para evitar el uso de costosas
espectrofotometrías. equipo.