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EMPECEMOS CON LA BIOFÍSICA……..
 Espectroscopia

Qué vamos a ver hoy:

Espectroscopia - Principios

Por qué y para qué

Transiciones electrónicas

Reglas de selección
 Espectroscopia

d 2y ( x) 2m
- 2
= 2 Ey
dx !
 Por que Espectroscopia?
• Estructuras: Representacion Estatica
• No destructiva
• No invasiva
• In vivo (sensibilidad?)
• Posibilidad de medir termodinámica y cinética
• Estructura electrónica: reactividad
• Qué tipo de espectroscopia? Cómo elegir?

INTERACCIONES ESCALA DE
Y PROCESOS TIEMPO
Vibraciones ps (10-12 s)
Difusión ns (10-12 s)
Mov. Proteínas ms (10-6 s)
Reacciones ms, s
 Por qué Espectroscopia?
• Resolución de estructuras (totales o parciales)
• Cambios conformacionales
• Dinámica
• Accesibilidad a sitios (solvente, ligandos)
• Efectos anisotrópicos (membranas)
• Uso de Sondas locales
• Seguimiento de procesos in vivo-In cell
 Espectroscopia
Estudio de la interacción de la materia con la radiación
electromagnética

!e
ℎ'
Δ# = ℎ& =
(
B(t) = ℎ'ν-
!g

La absorción de la luz por parte de una molécula resulta en la

conversión de la energía radiante en energía vibracional, rotacional
o electrónica.
Es decir que altera las rotaciones, vibraciones y estructura
electrónica de la molécula.
 Espectroscopia: Parámetros
. ! define el tipo de
"e espectroscopia
Δ$ = ℎ' Regreso al equilibrio:
B(t) • Emisión de fotón
"g
• Relajación

DE grande DE chica (kT)

Diferencia de poblaciones Diferencia de poblaciones
grande chica
Tiempos de vida media Tiempos de vida media
cortos (ps, ns) largos (s, ms)
Emisión de fotones Relajación
S/N alta S/N baja
UV, Vis, mayor E RMN, EPR
 Qué necesito conocer de una
tecnica?
"e

Δ$ = ℎ!
B(t)
"g

• Rango de energía (transiciones)

• Sensibilidad (S/N)
• Intensidad (reglas de selección)
• Escala de tiempo (tpo detección)
• Resolución (D! intrínseco, Número de señales,
rango espectral)
 Energías y transiciones

Magnetic Transitions Molecular Electronic Electronic Deep electronic

vibrations Absorption Absorption core levels (atoms)
Valence Band Valence band

Infrared, UV absorption
Raman Molecular Orbitals

Microwave, Visible X-ray Absorption (XAS)

Radiofreq. Molecular Orbitals
EPR
NMR
ENDOR
Transiciones entre Orbitales Moleculares
Función de onda (x,y,z,t)
Autovalores y Autovectores
Cada función de onda tiene su energía asociada
Transiciones electrónicas en
moléculas orgánicas
 Transiciones electrónicas en
moléculas orgánicas

p ® p* : A mayores longitudes de onda

s ® s*: A menores longitudes de onda (vacío)

n ® p* // n ® s*: Cuando el cromóforo tiene

heteroátomos (N, O, S) con electrones n sin
compartir
Ejempo de formación de Orbitales
Moleculares
MO Rules:
• Constructive overlap = bonding
• Destructive overlap = antibonding
• Number of π MO’s = Number of p orbitals
• The MO energies are symmetrically
distributed above and below the initial
energies of the p orbitals
• Half the MO’s are bonding, the other half
antibonding.

So, now for buta-1,3-diene:

There are 4 p orbitals to consider.
The lowest energy MO will have the
greatest number of favorable
interactions (i.e. with all the p lobes
interacting constructively).
 buta-1,3-diene

stable molecules tend to have filled bonding MO’s

and vacant antibonding MO’s.
Efecto del grado de conjugacion en la frecuencia de absorcion

Beta-carotene
Influencia del campo eléctrico de la
radiación en la transición

er: Dipolo (q.r)

Real (azul)
Probabilidad
Imaginaria (roja) ΨN = Ψ0 * Ψ1: densidad
de transición
es una superposición
entre Ψ0 y Ψ1 y
describe cambios en la
estructura electrónica
y la distribución de
E carga en la transición.

Esto cambios producen

un dipolo oscilante

Momento del dipolo

de transicion
Momento del dipolo de
transición

Probabilidad de la
transición
 Expected intensities of electronic transitions
Transition type Typical values of ε /m2mol-1
Spin forbidden,
0.1
Laporte forbidden
Spin allowed (octahedral
complex), 1 - 10
Laporte forbidden
Spin allowed (tetrahedral
complex),
50 - 150
Laporte partially allowed
by d-p mixing
Spin allowed,
1000 - 106
Laporte allowed
Son así las Reglas de Selección??
Transiciones Vibracionales y electrónicas
Principio de Frank-Condon
Transiciones Vibracionales y electrónicas
Principio de Frank-Condon
Enlace Peptídico: El Cromóforo Amida
n à p* 220 nm
p à p* 190 nm
 Bibliografía de la clase

Peter Walla
“Modern Biophysical Chemistry”
Capitulo 1

Modern Biophysical Chemistry: Detection and Analysis of Biomolecules,

Second Edition. Peter Jomo Walla.
Published 2014 by Wiley-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA.