FRACIONAMIENTO SUBCELULAR I Y II

FUNDACION UNIVERSITARIA SAN MARTIN

BIOLOGIA ESTRUCTURAL
Y MOLECULAR.

2018

UNIVERSIDAD FUNDACION SAN MATIN

SEDE PTO COLOMBIA
 INFORME DE LABORATORIO N°4

FRACIONAMIENTO SUBCELULAR I Y II

Estudiante de medicina:
González Vergara Daniela

López Olivella Nelly

Nieves Luz Daniela

Rodríguez Aguilar Alex David

Sánchez Sánchez Madeleine Daily

Teherán Ávila Diana Marcela

Docente De Biología Practico

Daisy Johana Lozano

Grupo: 3
1 Semestre
RESUMEN
En las técnicas realizadas en el laboratorio logramos identificar estructuras
celulares de las células animales y vegetales, las cuales se ejecutaron a
través de los distintos proceso de fraccionamiento observándolas con el
microscopio en objetivos 4X, 10X, 40X, se hicieron maceraciones
(espinaca) con aplicación de solución de lisis y amortiguador de fosfato,
en las células animales utlizimaos caja de petri para analizar el fragmento
de hígado maceramos y se hicieron centrifugaciones y distintos
fracionamiento.

INTRODUCCIÓN
En el laboratorio ejecutado tuvimos la capacidad de aprender las
diferentes maneras de realizar, fraccionamientos subcelular obteniendo la
capacidad de visualizar la división y estructura de los diferentes
componentes que conforman la célula, la cual es obtenida por pequeñas
muestra proporcionadas por el proceso de lisis, maceración, la
centrifugaciones son obtenidas por un tiempo y condiciones determinadas,
teniendo como principal punto de enfoque entender las distintas formas de
separación e importancia de estos procesos .
OBJETIVOS
 Reconocer los diferentes tipos de lisis celular.
 Comprender la importancia de la ruptura mecánica de las células eucariontes.
 Aprender a estimar la eficiencia de la lisis celular por medio de la presencia
de la integridad de organelos.
 Establecer la importancia de los medios liq́ uidos en la lisis celular.
 Describir la técnica de fraccionamiento utilizada.
 Discutir formas alternativas que permitan realizar un fraccionamiento
celular.
 Identificar una o varias de las fracciones obtenidas en base a los siguientes
criterios:
a. Tipo de centrifugación usada
b. Tiempo y velocidad de centrifugación
c. Presencia o ausencia de la actividad de una enzima marcadora

METODOLOGIA

MATERIALES

 3 Cajas de Petri
 Mortero con pistilo
 Probeta de 50 ml
 micro pipeta con puntas de 20-200ul
 Láminas porta y cubre objetos
 Microscopio óptico
 Procesador de alimentos (licuadora)
 Cava con hielo
 1 pipeta de 1ml
 1 homogeneizador (mortero, licuadora)
 Inyectora, tubos de ensayos
  Hígado de pollo 100gr

PREPARACION DE LA MUESTRA

 Procedimos a lavar con agua las hojas de espinacas y con una tijera cortamos
las hojas de espinacas en fragmentos pequeños, luego procedimos a la
primera lisis se realizó con el mortero, hojas de espinacas y agua des
ionizada (solución de lisis 1); la segunda con el mismo procedimiento que se
emplea al amortiguador fosfato (solución de lisis 2) la tercera se emplea por
medio de cuchillas en este caso procesador de alimentos utilizando como
solución agua desionizada
 Fraccionamiento con mortero: Primeramente se adiciono 50ml de la
solución de lisis en el mortero juntos con los fragmentos de hojas de
espinacas y comenzamos triturando por 3 minutos temperatura ambiente y
colocamos 100 ul de la solución que se obtiene de la lisis de un portaobjeto
y realizamos un frotis suavemente, posicionamos el portaobjeto en la platina
del microscopio y observamos en los objetivos de 4X,10X,40X
Continuamos con la maceración de la muestra por otros 3 minutos más y
repetimos los pasos y así lo hicimos con otros tres minutos más y
observamos los cloroplasto y partes del tejido
 Fraccionamiento con cuchilla- procesador de alimento: Primeramente
colocamos 50 ml de la solución para proceder con la muestra que será lisada
y aplicamos en pulso con el equipo de las cuchillas (licuadora) por dos
minutos a temperatura ambiente y luego pusimos 100 ul de la solución que
se obtiene del lisis en un portaobjeto y realizamos un frotis , posicionando el
portaobjeto en la platina del microscopio observando en 4X,10X,40X
Repitiendo los pasos en 6 minutos y 9 minutos observando en 4X, 10X, 40X
FRACCIONAMIENTO CELULAR II
 Inicialmente pesamos las placas suministradas con la balanza y luego la
pesamos con el hígado de pollo asegurándose de haber cortado en trozos
pertenecientes al borde y debiendo tener entre 0,5 y 1,5 gramos de tejidos , el
peso optimo 1 gr
 Luego lavamos con NaCl M con la ayuda de una inyectadora profunda en el
tejido introduciendo la aguja de la inyectora en el tejido y pasando
suavemente la solución salina fría y repitiéndolo hasta que tenga un color
blanco e introducimos el tejido fragmentado en el homogeneizador y
lavamos la placa con Petri 1 ml de Nacl 0,15m agregando el homogeneizador
con 8 a 10 golpes fríos, Transferimos el homogénato a tubo de centrifuga
plástico de 10 ml

SEPARACION DE FRACCIONES MEDIANTE CENTRIGUGACION

 tomamos el resto del homogenato que se tiene en el tubo y centrifugar en

5.00oxg durante 10 minutos teniendo el segmento 1 y el sobrante 2
colocando el sobrante 1 en otro tubo de centrifuga y la centrifuga a 10.000
xg durante 20 m y observamos el tubo obteniendo segmento 2 sobrante 2 y
últimamente durante 30 minutos

CENTRIFUGACION POR GRADIENTE DISCONTINUO

 Colocamos de centrifuga con hielo en posición vertical y introduciendo 10

ml de sacarosa 45% en el fondo de cada tubo con cuidado de notar las
paredes
 agregamos con la pipeta 10 ml de sacarosa 15% teniendo cuidado dejando
caer la solución por las paredes del tubo y de la misma forma que se ha sido
agregada dejamos en reposo a 3 o 5 minutos obsevando las énfasis
observadas
RESULTADOS

Fracionamiento con mortero 3 minutos solución de lisis

Hojas de espinacas maceradas

ESPINACA QUE NO SE LOGRO

MACERAR

CLOROPLASTOS

Figura 1. Observación de maceración: se logra observar fragmentos de la hoja,

cloroplasto y la célula de esta observación 4X.

BURBUJAS DE JABON

CLOROPLASTOS

Figura 2. Observación de maceración, permite la observación de un tejido celular

y cada punto extremo conforma los cloroplastos, observación 10X.
 PARED CELULAR

CLOROPLASTOS

NERVIO CELULAR

Figura 3 observaciones de maceración, se puede observar el cloroplasto de la

célula y divisar su pared celular, observación 40X.

Fraccionamiento con mortero 6 minutos solución de lisis

CLOROPLASTOS

BURBUJAS DE JABON

NERVIO CELULAR

Figura 1 observación de maceración, se logra observar los cloroplastos y nervios

pertenecientes a la célula, observación 4X.
 PARTICULAS DE ESPINACAS QUE NO
SE PUDIERON MACERAR BIEN

CLOROPLASTOS DISPERSO
CLOROPLASTOS
EN LA MUESTRTA

BURBUJAS DE JABON
BURBUJAS DE JABON

CLOROPLASTOS DENTRO DE LA
Figura 2 observación de maceración, se logra hacer
PARED la observación de cloroplasto
CELULAR
y unidades celulares, 10X.

SUPUESTA PARED CELULAR

Figura 3 observación de maceración, se puede observar el cloroplasto, y pared

celular, observaciones 40X.

Fracionamiento 9 minutos solución de lisis

 CLOROPLASTOS DISPERSOS EN
LA MUESTRA

NERVIO CELULAR
CLOROPLASTOS DISPERSOS
ALREDEDOR DE LA MUESTRA
TEJIDO QUE NO SE LOGRO MACERAR
BURBUJAS DE JABON

Figura 1 observación de maceración, se observan los cloroplastos, logrando

detallar fragmentos de nervios celulares, observación 4X

NERVIO CELULAR

Figura 2 observaciones de maceración, se logra observar los cloroplastos y la

estructura de unión de los nervios, observaciónes 10X.
 CLOROPLASTOS

BURBUJA DE JABON

PARED CELULAR

Figura 3 observación de maceración, se puede observar los nervios celulares y

estomas, observación 40X.

3 minutos

Hojas de espinacas maceración con amortiguador de fosfato

BURBUJAS

CLOROPLASTOS DISPERSOS EN LA
MUESTRA

Imagen 1: Se observa que se mueve pero es la misma agua con jabón y vemos
diversas partículas que son burbujas, Observacion en 4X
 CLOROPLASTOS DISPERSOS DE LA
MUESTRA

BURBUJA

MUESTRAS DE ESPINACA QUE NO SE

LOGRO MACERAR

Imagen 2: Se observan burbujas y se logra observar el chloroplasts son los que se

encuentran dispersos en la célula y lo que se encuentra compacto son las hojas de
espinacas que no se pudieron maserar, Observacion en 10x

PARED CELULAR
CLOROPLASTOS DENTRO DE LA
PARED CELULAR

CLOROSPLASTOS DISPERSOS EN LA
MUESTRA

Imagen 3 : se logra observar el citoplasma y dentro de el se encuentra el los

cloroplasto, Observacion 40X

Fraccionamiento espinaca 6 minutos

 NERVIO CELULAR

FRAGMENTO DE ESPINACA QUE NO

SE LOGRO MACERAR

CLOROPLASTOS

Imagen 1: logramos observar fracciones de la espinaca que no se logró maserar

completamente, Observación 4X

PARTES DEL TEJIDO CELULAR

NERVIO CELULAR

CLOROPLASTOS

Imagen 2: Observamos parte del tejido los puntos negros son la parte del tejido y
se sigue viendo la parte de los cloroplasto disperso en la muestra, Observación 10X

CLOROPLASTOS DISPERSON EN TODA

LA MUESTRA

PARTES DEL TEJIDO CELULAR

Imagen 3: Logramos observar los cloroplastos, Observamos 40X

Fracionamiento espinaca 9 minutos

CLOROPLASTOS DISPERSOS EN LA
MUESTRA

Imagen 1: Se observa los cloroplastos dispersos en el agua con burbujas de agua,

Observamos 4X

CLOROPLASTOS DIRPERSOS EN LA
MUESTRA

RESIDUOS DE ESPINACA QUE NO SE

PUDIERON MACERAR

Imagen 2: Los cloroplastos dispersos en la muestra y lo más compacto los residuos

de espinacas que no se almacenaron completamente, Observamos 10X
 CLOROPLASTOS DISPERSOS EN LA
MUESTRA

PARED CELULAR

Imagen 3: Logramos observar el cloroplasto y probablemente la pared celular o

membrana plasmática, Observamos 40X

Fracionamiento con cuchilla- procesador de alemineto

(2 minutos) con amortiguador de fosfato

ESPINACA QUE NO FUE TRITURADA

CLOROPLASTOS

BURBUJAS

Imagen 1: Observamos burbujas y venis una parte concentrada de espinaca que no

fue totalmente licuada tambien y podemos observar los cloroplastos, Observamos
en 4X
 ESPINACA

CLOROPLASTOS DISPERSOS

BURBUJAS

Imagen 2: Se logra observar burbujas, pero se ve mayor cantidad de clocopasto

disperso en la muestra, Observamos en 10X

CLOROPLASTO DISPERSOS EN LA
MUESTRAS

PARED CELULAR

Imagen 3: Observamos la pared celular y dentro se ve lo cloroplasto lo que se

encuentra disperso, Observamos en 40X

4 (minutos)

CLOROPLASTOS

Imagen 1: se logra observar la estructura con dificultad la muestra con el objetivo

en 4x.
Imagen 2: se logra observar los cloroplastos celulares muy separados, observación
10X

Imagen 3: se logra observar cloroplasto celular y partes celulares observación 40X

CLOROPLASTOS DISPEROS EN LA
MUESTRA

PARED CELULAR
6 (minutos)

CLOROPLASTOS DISPERSOS EN LA
MUESTRA

BURBUJAS

Imagen 1: Se observa solamente burbujas y al esparcirla se puede notar el

cloroplasto, Observamos en 4X
CLOROPLASTOS DISPERSOS EN LA
MUESTRA

BURBUJA
S

Imagen 2: Podemos observar burbujas y cloplasto y se nota una celula que no

logro lisarse, Observamos en 10X

CLOROPLASTOS DISPERSOS EN LA
MUESTRA

PARED CELULAR

Imagen 3: Se observa a mayor escala Las burbujas y se logra ver una posible pared
celular que por dentro se logra ver esparcido el cloroplasto, Observamos en 40X
Fracionamiento celular II

Separación de ruptura y célula hepatica

Preguntas

1 ¿Para qué sirve conocer el fraccionamiento subcelular?

El fraccionamiento subcelular nos brinda la oportunidad de observar las diferentes

estructuras celulares las cuales la constituyen, así podemos a través de esto observar
el comportamiento de estos orgánulos. (1)

2¿La lisis celular se encuentra relacionada con la preparación de alimento?

Si, se utiliza un tipo de lisis mecánica, cuando maceramos o cortamos los alimentos,
por el choque osmótico también pues se expone la célula a medios hipertónico e
hipotónico rompemos su estructura de protección. (2)

3¿si las cuchillas rompen todo porqué se emplean instrumentos similares a una
licuadora?

Se utilizan instrumentos similares a la licuadora porqué necesitamos la sustancia

procedente del licuado para estudiar, ya que cortándola con una cuchillas no
obtendremos el mismo resultado de homogenización, en las licuadoras se trituran
con más eficiencia proporcionándonos así una mejor homogenización

4¿En qué voy a emplear el conocimiento del fraccionamiento subcelular en mi

actividad profesional como médico?

El conocimiento adquirido a través de este proceso será el reconocimiento de cómo

trabaja la célula o bien sea su funcionamiento celular, brindándonos la amplia
ventaja de saber cuándo algo está ocurriendo o afectando la célula por ejemplo:
alguna invasión agente patógeno.

5¿Qué características del tipo celular utilizado pueden afectar la ruptura y la

escogencia del método de ruptura?
6¿Qué propiedades de la solución en la cual se homogeniza se deben controlar
cuidadosamente? Explique

Preguntas

Bibliografía
1 http://izasascientific.com/es/fraccionamiento-subcelular(1)

2 http://www.ehu.eus/biofisica/pdf/practica_1.pdf(2)