INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA SUPERIOR DE MEDICINA

PRÁCTICA No° 10
LÍDIDOS
EXPERIMENTO 2. Extracción de lípidos de cerebro.

Los lípidos pueden extraerse de los medios biológicos- en general acuosos- por
homogenización con la mezcla 200:100:1 de cloroformo-metanol-ácido clorhídrico,
triturando el tejido (cerebro).

Después de gregar 2 mL de HCl 1N se centrifuga a 2000 rpm durante 10 minutos,

para poder separa la fase inferior clorofórmica del paquete celular y de la fase
superior metanólica.

RESULTADOS:
EXPERIMENTO 3. Identificación de fosfolípidos de cerebro por
cromatografía en capa fina.

Fundamento: Todos los sólidos finalmente pulverizados tienen el poder de adsorber

en mayor o menor grado otras sustancias sobre su superficie; y, similarmente todas
las sustancias pueden ser adsorbidas, unas con más facilidad que otras. Este
fenómeno de adsorción selectiva es el principio fundamental de la cromatografía.

La cromatografía se define como la separación de una mezcla de dos o más

compuestos por distribución entre dos fases:

Fase móvil llamada también activa, que transporta las sustancias que se separan y
que progresa en relación con la otra, denominada fase estacionaria. La fase móvil
puede ser un líquido o un gas y la estacionaria puede ser un sólido o un líquido;
Consiste en una mezcla de disolventes, más o menos polares, según la mayor o
menor polaridad de los lípidos que se desean separar.

Para esta cromatina se utiliza un soporte de silicagel extendido sobre una placa de
vidrio, este se encuentra con fase estacionaria manteniendo un pequeño espesor
constante en todo lo largo. El eluyente ascenderá, por capilaridad, por la placa y
arrastrará los componentes a lo largo de ésta produciendo "manchas" de los
componentes. El grado de elución de las sustancias depende tanto de su propia
polaridad como de la polaridad del eluyente utilizado.

Las distintas clases de lípidos se separan según los Rf que se indican al margen y
este Rf es el registro, es una relación de distancias, y se define como:
El valor de Rf depende de las condiciones en las cuales se corre la muestra (tipo de
adsorbente, eluyente, así como las condiciones de la placa, temperatura, vapor de
saturación, etc"). Tiene una reproducibilidad de t 20%, por lo que es mejor correr
duplicados de la misma Placa. Los lípidos menos polares tienen el Rf más alto.

El revelado de las manchas pueden con yodo, que tiñe a los lípidos de color pardo
sobre un fondo amarillentoo mediante reactivos más o menos específicos. Después
de su separación, los lípidos pueden eluirse del silicagel para su determinación
cuantitativa o para análisis de ácidos grasos.

Por que con ninhidrina y con yodo

EVIDENCIAS DE APRENDIZAJE:

1) Fotografíe las cromatoplacas reveladas incluyendo una regla transparente para

documentar su reporte.

En las imágenes se puede apreciar

las lecturas de los cromatogramas de
Yodo (color amarillo) y Ninhidrina
(color rojo), de manera detallada se
aprecian manchitas que usamos
como referencia para tomar el RF y
averiguar de que fosfoaminolipido se
trataba.
2) Mida los desplazamientos del frente de solvente y de cada una de las manchas
en las cromatoplacas reveladas para calcular el Rf de cada una de ellas e intente
identificar a qué lípido corresponde.

TABLA CON VALORES DE YODO

VALORES OBTENIDO RF [VALOR FOSFOAMINOLIPIDOS
DE
OBTENIDO/11] EN MANIFIESTO
CRONOGRAMA

0.6 0.0545 Lisofosfolipidos

1.8 0.1636 Lisofosfolipidos
2.6 0.2363 Lisofosfolipidos
5 0.4545 Fosfatidil serina
6.1 0.5545 Esfingomielina
10 0.90 Carotenos

TABLA CON VALORES DE NINHIDRINA

VALORES OBTENIDO RF [VALOR FOSFOAMINOLIPIDOS

DE
OBTENIDO/11] EN MANIFIESTO
CRONOGRAMA

1.2 0.10 Lisofosfolipidos

3.8 0.17 Fosfatidil serina
4.5 0.39 Fosfatidil serina
BIBLIOGRAFÍA

 LEAL, P. (2018), BIOQUIMICA MEDICA, CIUDAD DE MEXICO, MEXICO,

EDITORIAL LIMUSA
 McKee, Trudy; McKee, James R. 2014. Bioquímica. Las bases moleculares
de la vida. 5𝑡𝑎 edición. McGraw-Hill.
 http://organica1.org/1311/1311_6.pdf