IDENTIFICACIÓN DE AZÚCARES

INTRODUCCIÓN

Los azúcares constan de un esqueleto carbonado que porta un grupo carbonilo (aldehído
o cetona) y varios grupos hidroxilo.

En esta práctica se entregan cuatro disoluciones problema de azúcares al 5%. Pueden ser
cualquiera de los siguientes: glucosa, galactosa, sacarosa, lactosa o fructosa. La práctica
consiste en identificar de qué azúcares se trata. Para ello se utilizan diversas pruebas que
reconocen determinadas propiedades de los azúcares. El que una prueba sea positiva o
negativa nos informará acerca de las propiedades del azúcar.

A continuación se muestra un esquema de cómo pueden irse identificando los azúcares

con las diferentes pruebas. En ciertos casos es bueno efectuar varias pruebas similares
para asegurar aún más el resultado positivo a negativo de la prueba, que si no se realiza
con precisión podría dar resultados erróneos.

ELIMINACIÓN DE RESIDUOS: Los residuos generados en esta práctica deben de

ser recogidos en el bidón de residuos acuosos

PRECAUCIONES

Al trabajar con mecheros, en esta práctica noestá permitido el uso de guantes. Por lo
tanto, el manejo de los reactivos tiene que hacerse con especial cuidado

El calentamiento de las muestras hasta la ebullición se hace siempre en baño de

agua NUNCA se calentará directamente a la llama salvo que se indique lo contrario.
I. REACCIÓN DE MOLISCH
Esta reacción sirve para el reconocimiento de todo tipo de azúcares. Los azúcares, en
medio ácido fuerte se deshidratan formando furfurales. Estos furfurales al reaccionar con
el α-naftol originan complejos de intenso color.

Procedimiento:
Precaución: el ácido sulfúrico concentrado puede causar quemaduras graves en la
piel. Manejarlo con mucho cuidado.
1. Pipetear en un tubo de ensayo 2 ml de disolución de azúcar problema
2. Añadir 2 gotas de a-naftol al 1% y se mezclar bien.

3. Con una pipeta se dejan resbalar por la pared del tubo de ensayo 2 ml de ácido
sulfúrico concentrado con mucho cuidado procurando que no se mezcle para que forme
una capa bajo la disolución de azúcar.

En la superficie de separación de ambas capas se producirá la deshidratación del azúcar

y su reacción con el α-naftol formándose un anillo de color oscuro en dicha interface.
Molisch positivo: anillo oscuro.
II. REACCIÓN DE FEHLING
Esta prueba se utiliza para el reconocimiento de azúcares reductores. El poder reductor
que pueden presentar los azúcares proviene de su grupo carbonilo, que puede ser oxidado
a grupo carboxilo con agentes oxidantes suaves. Si el grupo carbonilo se encuentra
combinado no puede presentar este poder reductor.

Los azúcares reductores, en medio alcalino, son capaces de reducir el ión Cu2+ de color
azul a Cu+ de color rojo. Para ello el grupo carbonilo del azúcar se oxida a grupo
carboxilo. En medio fuertemente básico como en nuestro caso el NaOH el ión
Cu2+ formaría Cu (OH)2 insoluble por eso añadimos tartrato sódico potásico que actúa
como estabilizador al formar un complejo con el Cu2+.

2 Cu 2+ + R-CHO Cu2O¯ + R-COOH

(Azul) ( Rojo)

Procedimiento:
1. Mezclar en un tubo de ensayo:
Fehling A (CuSO4) 2 ml
Fehling B (Tartrato/NaOH) 2 ml
2. Agitar y calentar a ebullición (aproximadamente 1 min).
3. Añadir 1 ml de la disolución de azúcar y hervir durante un minuto.
Si se reduce el cobre se forma un precipitado de Cu2O de color rojizo.
Fehling positivo: color rojizo.

III. REACCIÓN DE BENEDICT

Esta prueba sirve para el reconocimiento de azúcares reductores.

Se basa en la reducción de Cu2+ a Cu+ en medio básico débil. Aunque es similar a la

reacción de Fehling, el medio básico débil (HNaCO3) y el estabilizante (citrato sódico)
usados hacen que este test sea más sensible y estable.
Procedimiento:
1. Pipetear en un tubo de ensayo 5 ml de reactivo de Benedict
2. Calentar a ebullición.
3. Añadir 1 ml de la solución de azúcar, mezclar bien y se volver a calentar a ebullición.
Si la reacción es positiva aparece un precipitado rojizo, aunque si la cantidad de azúcar
es pequeña puede dar color anaranjado o verdoso

IV. REACCIÓN DE BRAUN

Esta reacción sirve para el reconocimiento de azúcares reductores. Los azúcares

reductores en medio alcalino pueden reducir el picrato, de color amarillo, a picramato, de
color rojo en medio alcalino (Na2CO3).

Procedimiento:
1. Añadir en un tubo de ensayo:
- Disolución de azúcar 4 ml
- Ácido pícrico saturado 2 ml (OJO, MUY VENENOSO)
- Na2CO3 1M 2 ml
2. Calentar a ebullición.
Si el test es positivo, el color amarillo pasa a rojo.
V. PRUEBA DE BARFOED

Esta prueba sirve para el reconocimiento de monosacáridos. En medio ácido, tan sólo los
monosacáridos son capaces de reducir el Cu2+ a Cu+. El Cu+ así producido reduce al ácido
fosfomolíbdico a un complejo de intenso color azul oscuro.
Procedimiento:
1. Pipetear en un tubo de ensayo:

- Disolución de azúcar 1 ml
- Disolución ácida de cobre 1 ml
2. Calentar a ebullición durante 3 minutos.
3. Enfriar en agua durante 2 min
4. Añadir 1 ml del reactivo de fosfomolibdato.
Si la prueba es positiva aparece un color azul oscuro muy intenso.

VI. PRUEBA DEL ESPEJO DE PLATA

Esta prueba sirve para el reconocimiento de monosacáridos. Los monosacáridos son

capaces de reducir, en medio amoniacal, el ión Ag+ a Ago (plata metálica), que se deposita
en las paredes del tubo.
Ag+ + 2 NH3 → Ag (NH3)2+ + R-CHO → Ag0 + R-COONH4

Procedimiento:
1. Añadir en un tubo de ensayo:
- AgNO3 1% 1 ml

- NH3 30% 1 ml
- Disolución de azúcar 1 ml
2. Mezclar bien y se calentar durante 2 minutos.
3. Sacar y dejar reposar.
Si el ensayo es positivo la plata metálica, que precipita, se va depositando en la pared del
tubo formando un espejo (“espejo de plata”).

VII. PRUEBA DE SELIVANOFF

Esta prueba es específica para las cetosas. Las cetosas se deshidratan más rápidamente
que las aldosas, dando furfurales. Estos se condensan con el resorcinol produciendo un
complejo coloreado. Si el tiempo de ebullición se prolonga, puede dar también positivo
para otros azúcares.
Procedimiento:
1. En un tubo de ensayo pyrex se añadir:

- Reac. Selivanoff (resorcinol/HCl) 1 ml

- Disolución de azúcar 1 ml
2. Hervir durante 1 minuto en el baño a ebullición.

La aparición de un color rojo o un precipitado rojo es indicativa de la presencia de

cetosas.
VIII. PRUEBA DE TOLLENS

Esta prueba es análoga a la de Selivanoff, pero para el reconocimiento de galactosa y sus

derivados. La galactosa, algunas pentosas y el ácido glucurónico dan un color rojo con el
HCl y floroglucina. La glucosa da también un color rojo con la floroglucina, pero muy
opaco, en contraste con el color rojo transparente de la galactosa.

Procedimiento:
1. Añadir en un tubo:

- Disolución de azúcar 2 ml
- HCl (concentrado) 2 ml
- Floroglucina (Tollens) 0,1 ml
2. Calentar a ebullición. El color puede aparecer hasta 5 minutos después de calentar.

IX. HIDRÓLISIS ÁCIDA DE UN DISACÁRIDO

En el caso de que la disolución problema de azúcar fuese sacarosa o lactosa se hace una
comprobación. En primer lugar se hidroliza el disacárido en sus componentes (sus dos
monosacáridos) mediante una hidrólisis ácida

Procedimiento:
1. En un tubo de ensayo limpio añadir:

- Disolución problema 1 ml
- HCl 0,1N 1 ml
2. Hervir durante 1 minuto.
3. Realizar la prueba de Selivanoff si se trata de sacarosa o la reacción de Barfoed si se
trata de lactosa.
X. PRUEBA DEL AZUL DE METILENO
A una solución de glucosa en medio básico (20 g de glucosa y 25 g de KOH en 1 l ) se
le agregan unas gotas de azul de metileno al 1%. Agitar, observar su coloración y dejar
reposar unos minutos. Observar el cambio de color y agitar nuevamente. Repetir el
proceso numerosas veces.

Bibliografía: almez.pntic.mec.es/~mbam0000/paginas/LABORATORIOs/azucares.htm