RESPUESTA DE CRECIMIENTO EN DOS FASES

El reconocimiento de la importancia del marco temporal llevó al concepto de una respuesta de

crecimiento de dos fases a la salinidad. Esto es muy importante cuando se seleccionan las
plantas para la tolerancia a la sal. La primera fase de reducción del crecimiento es rápidamente
evidente y se debe a la sal fuera de las raíces. Es esencialmente una fase de estrés hídrico u
osmótica, para la cual hay sorprendentemente poca variación genotípica. La reducción del
crecimiento es presumiblemente regulado por señales hormonales procedentes de las raíces.
Luego hay una segunda fase de reducción del crecimiento, que lleva tiempo desarrollarse y
resulta de una lesión interna. Esto Se debe a que las sales se acumulan en las hojas que
transpiran a niveles excesivos, excediendo la capacidad de las células para compartimentar las
sales en la vacuola. Esto inhibirá el crecimiento de las hojas más jóvenes al reducir el
suministro de carbohidratos a las células en crecimiento.

La respuesta de crecimiento en dos fases se ha demostrado claramente para los cultivares de

maíz y trigo. Dos cultivares de maíz con diferencias de dos veces en las tasas de acumulación
de Na + en las hojas tuvieron la misma reducción de crecimiento durante 15 días en 80 mM de
NaCl. Además, otros dos cultivares de maíz, de nuevo con dos veces las diferencias en la
acumulación de Na +, tuvo la misma reducción de crecimiento durante 4 semanas en 100 mM
de NaCl, y no fue hasta 8 semanas que se vio claramente una diferencia de crecimiento. Se
encontraron resultados similares en trigo. Dos genotipos de trigo estrechamente relacionados
que diferían en las tasas de acumulación de Na + tuvieron la misma reducción de crecimiento
durante las primeras 4 semanas en 150 mM de NaCl, y solo en la quinta y sexta semana hubo
diferencias en la producción de peso seco entre los genotipos (Fig. 3) . Sin embargo, las
diferencias visuales aparecieron mucho antes de eso; El genotipo con la mayor tasa de
absorción de Na + mostró una senescencia foliar más rápida, apareciendo lesiones en la hoja
más vieja después de 2 semanas (Fig. 3). Más tarde, cuando la proporción de hojas muertas
aumentó por encima del 20% del total, la tasa de producción de hojas nuevas disminuyó
drásticamente y algunos murieron. Estos datos ilustran el principio de que la reducción inicial
del crecimiento se debe al efecto osmótico de la sal fuera de las raíces, y que lo que distingue a
una planta sensible a la sal de una más tolerante es la incapacidad para evitar que la sal
alcance niveles tóxicos. en las hojas transpirantes.

Con el arroz, también, se ha hecho una clara distinción entre los efectos iniciales de la
salinidad, que son recuperables y los efectos a largo plazo que resultan de la acumulación de
sal dentro de las hojas expandidas.

MECANISMOS DE TOLERANCIA DE SAL

Subyacente a todos los mecanismos está el descubrimiento temprano por los bioquímicos de
que las enzimas de halófitas (plantas adaptadas a hábitats salinos) no son más tolerantes a
altas concentraciones de NaCl que las de los no halófitos (también llamados glucófitos, o
plantas adaptadas al agua dulce). Por ejemplo, las actividades in vitro de enzimas extraídas de
los halófitos Atriplex spongeosa o Suaeda maritima fueron tan sensibles al NaCl como las
extraídas de frijoles o guisantes. Incluso Las enzimas de la alga rosada del lago salado
Dunaliella parva, que pueden crecer a salinidades 10 veces más altas que las del agua de mar,
son tan sensibles al NaCl como las de los glucófitos más sensibles. Generalmente, el Na +
comienza a inhibir la mayoría de las enzimas a una concentración superior a 100 mM. La
concentración a la que Cl– se vuelve tóxico está aún menos definida, pero probablemente esté
en el mismo rango que el del Na +. Incluso el K + puede inhibir las enzimas a concentraciones
de 100 a 200 mM.

Por lo tanto, los mecanismos para la tolerancia a la sal son de dos tipos principales: los que
minimizan la entrada de sal en la planta y los que minimizan la concentración de sal en el
citoplasma. Los halófitos tienen ambos tipos de mecanismos; "excluyen" bien la sal, pero
compartimentan eficazmente en las vacuolas la sal que inevitablemente entra. Esto les
permite crecer durante largos períodos de tiempo en suelo salino. Algunos glucófitos también
excluyen bien la sal, pero no pueden compartimentar la sal residual absorbida tan eficazmente
como los halófitos. La mayoría de los glucófitos tienen una capacidad pobre para excluir la sal,
y se concentra a niveles tóxicos en las hojas que transpiran.

Bajo transporte de sal a las hojas: el mecanismo conocido como "exclusión de sal",

La "exclusión de sal", funciona para reducir la velocidad a la que la sal se acumula en los
órganos transpirantes. Las plantas transpiran 30–70 veces más agua de la que usan para la
expansión celular, el valor depende en gran medida del clima prevaleciente. Esto significa que
los solutos en el suelo que no están excluidos por las raíces estarán 30-70 veces más
concentrados que en la solución del suelo. Esta concentración se puede evitar filtrando la
mayor parte de la sal. Por ejemplo, si una planta transpira 50 veces más agua de la que retiene
y deja entrar solo el 2% de la sal en la solución del suelo (es decir, excluye el 98%), la
concentración de sal en el brote en su conjunto nunca aumentará que en el suelo y la planta
podrían crecer indefinidamente en suelo salino.

Sin embargo, las hojas individuales no pueden protegerse indefinidamente. Las sales
transportadas en la corriente de transpiración se depositan en las hojas a medida que el agua
se evapora, y la sal se acumula gradualmente con el tiempo. Las concentraciones de sal en las
hojas más viejas son, por lo tanto, mucho más altas que en las hojas más jóvenes, en cualquier
momento. En las hojas más viejas, la concentración de sal eventualmente se vuelve lo
suficientemente alta como para matar las células.

Los mecanismos por los cuales la sal es excluida de las hojas son:

1 Selectividad de la absorción por las células de la raíz. Todavía no está claro qué tipos de
células controlan la selectividad de los iones de la solución del suelo. La absorción inicial de Na
+ y Cl– podría ocurrir en la epidermis, en la exodermis, o si la solución del suelo fluye
apoplásticamente a través de la corteza de la raíz, ocurriría en la endodermis.

2 Carga del xilema. Hay evidencia de una carga preferencial de K + en lugar de Na + por las
células estelares que está bajo control genético.

3 Eliminación de sal del xilema en la parte superior de las raíces, el tallo, el pecíolo o las vainas
de las hojas. En muchas especies, el Na + se retiene en la parte superior del sistema radicular y
en la parte inferior del brote, lo que indica un intercambio de K + por Na + por las células que
recubren la corriente de transpiración.

Se han revisado los mecanismos que confieren exclusión que operan a nivel celular y de toda la
planta, y con particular referencia a la selectividad para K + sobre Na +,. Algunos glucófitos
controlan el transporte de sal a las hojas razonablemente bien, al menos a salinidades bajas a
moderadas. Por ejemplo, el Na + y Cl– en el xilema en la cebada a 100 mM fue solo de
aproximadamente 5 mM, es decir, se excluyó el 95%. La exclusión de sal es también la
característica adaptativa más importante que regula la carga de sal interna de los halófitos,
incluso en especies que tienen glándulas o vejigas salinas. Como ejemplo, la concentración de
sal en la savia de xilema del manglar Avicennia marina se calculó como solo 9 mM para plantas
que crecen en NaCl a 500 mM, un grado de exclusión de sal del 98%. La exclusión es
particularmente importante para las plantas perennes, cuyas hojas pueden vivir durante un
año o más; existe una mayor necesidad de regular la carga de sal entrante durante un período
de tiempo mucho más largo que para las especies anuales, cuyas hojas pueden vivir solo un
mes.

Se puede obtener evidencia de la importancia de estos procesos en el control de la

acumulación de sal en las hojas, y en la determinación de la tolerancia a la sal de varias
especies, a partir de las publicaciones citadas anteriormente. La electrofisiología de los canales
iónicos y los transportadores que trabajan juntos para regular el movimiento neto de sal a
través de las membranas celulares es bien entendida, y los genes para estos canales y
transportadores están siendo identificados El estado de esta investigación a nivel
electrofisiológico y molecular se ha descrito ampliamente en varias revisiones recientes. Hay
características contribuyentes que funcionan para mantener bajas tasas de acumulación de sal
en las hojas. Brote alto: las relaciones de raíces y las altas tasas de crecimiento intrínseco
reducirán la velocidad a la que la sal ingresa a la corriente de transpiración y se acumula en el
brote, y la extensión de una vía apoplástica en las raíces también influirá en el movimiento de
sales a través de la raíz y hacia el xilema.

La exportación de hojas en el floema es otra característica que contribuye a mantener bajas

concentraciones de sal. Sin embargo, parece haber relativamente poca reasignación de sal de
las hojas, en relación con la importación en la corriente de transpiración. Esto se puede ver en
la presencia continua de sal en las hojas. mucho después de que se elimine la sal alrededor de
las raíces. Las mediciones de iones en la savia del floema han indicado que las especies más
tolerantes a la sal excluyen Na + y Cl – del floema en gran medida, mientras que las que son
menos tolerantes no tienen la misma restricción. La exclusión de la sal del floema asegura que
la sal no se redirija a los tejidos en crecimiento del brote. Otro mecanismo de exportación de
las hojas es la excreción a través de las glándulas de sal o las vejigas. Estos pueden ayudar a
mantener un equilibrio de sal constante en las hojas durante largos períodos de tiempo. Estos
tipos de celulas especializados están confinados a halófitas

Compartimiento de iones intracelulares

Idealmente, el Na + y Cl– deberían ser secuestrados en la vacuola de la célula. Que esto ocurre
en la mayoría de las especies está indicado por las altas concentraciones que se encuentran en
las hojas que todavía funcionan normalmente. Las concentraciones superiores a 200 mM son
comunes, sin embargo, estas mismas concentraciones inhibirán severamente la actividad
enzimática in vitro, como se mencionó anteriormente. La obtención de evidencia experimental
directa para la compartimentación es técnicamente difícil, pero el microanálisis de rayos X de
células de tabaco cultivadas que crecen en 430 mM de NaCl indicó que el Na + y las
concentraciones de Cl en la vacuola fueron de aproximadamente 780 y 625 mM,
respectivamente, mientras que las concentraciones citoplasmáticas de ambos iones fueron
inferiores a 100 mM. Si el Na + y Cl– están secuestrados en la vacuola de una célula, K + y
solutos orgánicos deben acumularse en el citoplasma y
orgánulos para equilibrar la presión osmótica de los iones en la vacuola. Los compuestos que
se acumulan más comúnmente son la prolina y la glicina betaína, aunque otras moléculas
pueden acumularse a altas concentraciones en ciertas especies. Todos estos compuestos se
acumulan bajo estrés hídrico y estrés salino, y se encuentran en altas concentraciones en
plantas adaptadas a suelos secos o salinos. Su papel en el equilibrio de la compartimentación
de iones intracelulares no está claro. Su acumulación en la hoja puede ser tan alta que
claramente no se limita a los compartimentos citoplasmáticos. Además, su nivel de
acumulación se relaciona más con el estrés osmótico que con cualquier efecto de sal
específico. Por ejemplo, la acumulación de prolina y glicina betaína fue similar en la cebada
tratada con PEG y NaCl en las mismas presiones osmóticas

AJUSTE OSMÓTICO, COSTOS DE ENERGÍA Y CRECIMIENTO

En relación con la fisiología comparativa del ajuste osmótico en solución salina versus suelo
seco, existe el problema de los costos metabólicos para el ajuste osmótico. Crecer o sobrevivir
en un suelo salino impone algunos costos; El costo de excluir la sal, de la compartimentación
intracelular y de excretarla a través de las glándulas de sal. Sin embargo, este costo es
relativamente pequeño en relación con el necesario para sintetizar solutos orgánicos para el
ajuste osmótico. El número de moles de ATP necesarios para usar un mol de NaCl como un
osmótico es aproximadamente 4 en las células de la raíz y 7 en las células de la hoja, mientras
que el número requerido para sintetizar un compuesto orgánico es un orden de magnitud
mayor. Raven evaluó el requerimiento de ATP para la síntesis o acumulación de solutos en las
hojas como 3,5 para Na +, 34 para manitol, 41 para prolina, 50 para glicina betaína y
aproximadamente 52 para sacarosa. (Estos valores suponen una producción de 0,5 moles de
ATP por fotón y nitrato como fuente de N).

Sin embargo, no está claro que las plantas produzcan menos solutos orgánicos cuando crecen
en solución salina que en suelos no salinos con el mismo potencial hídrico. Como se mencionó
anteriormente, la acumulación de prolina y glicina betaína fue similar en la cebada tratada con
PEG y NaCl a las mismas presiones osmóticas. Esto podría estar restringido a compuestos
metilados o que contienen nitrógeno, ya que una comparación de cuatro genotipos de tomate
mostró una acumulación mucho mayor de azúcares solubles en las hojas de las plantas
cultivadas en PEG que en NaCl a la misma presión osmótica, pero una acumulación similar de
aminoácidos.

Si la acumulación de solutos orgánicos requiere más energía que la acumulación de iones,

podría seguirse que las plantas crecen más rápido en solución salina que los suelos secos del
mismo potencial hídrico. Sin embargo, hay poca evidencia de esto. Los intentos de comparar el
crecimiento de plantas en NaCl con los de PEG u otra osmótica han producido resultados
equívocos. Comparaciones entre NaCl y PEG a la misma presión osmótica

mostró que la cebada creció mejor en PEG que NaCl; sin embargo, varios genotipos de tomate
crecieron igual o peor en PEG que en NaCl

Las comparaciones entre NaCl y sales mixtas concentradas (que no contienen NaCl) a la misma
presión osmótica mostraron que la cebada creció mejor en el medio sin NaCl, al igual que el
frijol. Sin embargo, todas estas comparaciones se ven comprometidas por la falta de Ca2 +
suplementario y la probabilidad de una deficiencia de Ca2 + inducida por NaC +. Como se
explicó anteriormente, la presencia de sal disminuirá la actividad de Ca2 +, el PEG no lo hará, y
las sales mezcladas fueron, de hecho, la solución concentrada de Hoagland, por lo que
incluyeron una mayor concentración de Ca2 +.
EL ENIGMA DE LAS RAÍCES

Se ha trabajado poco en las raíces con respecto al estrés salino o hidrico. Las raíces pueden
parecer la parte más vulnerable de la planta, ya que están expuestas directamente a la sal o al
suelo seco, pero son sorprendentemente robustas. Como se mostró anteriormente, su tasa de
crecimiento no se ve tan afectada como la de los brotes. Su estado iónico es relativamente
bueno; sus concentraciones de iones no aumentan con el tiempo, como en las hojas, y a
menudo tienen una concentración más baja de Na + y Cl– que la solución externa, lo que rara
vez ocurre en las hojas. Por ejemplo, en el trigo que crece en 150 mM de NaCl, el Na + en las
raíces fue de solo 20–40 mM, la variación se debe a diferentes genotipos. Hemos encontrado
valores igualmente bajos para Na + y Cl–, con un rango de genotipos de trigo y

salinidades de 50 a 150 mM de NaCl. El K + no hizo una gran contribución. Esto plantea la

interesante cuestión de los solutos orgánicos para el ajuste osmótico, ya que el K + es a
menudo más bajo en las raíces que en los brotes. Sin embargo, no hay evidencia de que los
solutos orgánicos sean más propensos a acumularse en las raíces; de lo contrario,A menudo
estos están más bajas e raíces que en los brotes.

Por ejemplo, las concentraciones de prolina y glicina betaína sobre una base de peso fresco
fueron cinco veces más bajas en las raíces que los brotes de cebada sobre 100–200 mM de
NaCl, aunque las concentraciones de Na + y Cl– fueron mucho más bajas en las raíces que en
los brotes. Los autores reportaron concentraciones similares en respuesta a PEG. Como el
ajuste osmótico es presumiblemente tan importante para las raíces como para los brotes, esto
sugiere que Solutos desconocidos están involucrados. Sorprendentemente, se sabe poco
acerca de la regulación metabólica de la presión osmótica en relación con la síntesis y
compartimentación de solutos orgánicos en respuesta a la salinidad, ya sea en brotes o raíces

SHOCK OSMÁTICO Y PLASMOLISIS - IMPLICACIONES PARA EL DESCUBRIMIENTO DE GENES

En experimentos de laboratorio que involucran salinidad, es difícil evitar dar a las plantas un
choque osmótico de algún grado; La presión osmótica de la solución alrededor de las raíces se
puede cambiar muy rápidamente. Es fácil dar una descarga lo suficientemente grande como
para causar un cese completo del crecimiento y una pérdida de agua de todas las células.

La turgencia de las células radiculares jóvenes es normalmente alrededor de 0 · 6 MPa. Las

presiones de turgencia en el rango de 0 · 5–0 · 7 se han medido con una sonda de presión en
maíz y trigo, posiblemente la variación asociada con la etapa de desarrollo de las células y las
condiciones de crecimiento de las plantas. La presión osmótica de una solución de 150 mM de
NaCl es de aproximadamente 0 · 7 MPa, por lo que las células con una turgencia menor que
esta se plasmolizarán si las plantas se transfieren en un solo paso a 150 mM de NaCl. Si la
turgencia celular es de solo 0 · 4 MPa, lo que es probable para las células más viejas en las
raíces, entonces una transferencia de un solo paso a una solución de100 mM de NaCl (0 · 5
MPa) plasmolizará las células. (Esto supone que la nueva solución también contiene la misma
concentración de nutrientes que la solución de crecimiento).

La plasmólisis ocurre en células que están en contacto con la solución, como en las tiras
epidérmicas, o en las células radiculares de plantas intactas que crecen hidropónicamente. La
plasmólisis comienza cuando la presión osmótica de la solución aumenta por encima de la de
las células, lo que hace que el protoplasto se encoja y la membrana plasmática se separe de la
pared (Fig. 4). Grandes espacios creados entre la membrana plasmática y la pared pueden
llenarse de solución y permitir una vía apoplástica artefactual para que las sales se muevan
radialmente a través de la raíz (Fig. 4 y 5). Durante este tiempo, la membrana plasmática se
estira en hebras que permanecen atadas a la pared en sitios particulares (Fig. 5). Las
membranas plasmáticas y los plasmodesmos pueden repararse, pero mientras tanto, se
produce un flujo no regulado de solutos dentro o fuera del protoplasto. Es probable que las
vías de transducción de señales que surgen de los flujos de calcio o protones a través de la
membrana plasmática no funcionen normalmente

El grado de daño y el tiempo de recuperación dependen del grado del cambio inicial. Esto
puede medirse a partir de los efectos sobre el crecimiento de las raíces, como se mencionó
anteriormente. Con la adición de 0 · 1–0 · 4 MPa (manitol o KCl), la recuperación del
crecimiento de las raíces del maíz se completó esencialmente en 1 h, pero con un shock
osmótico mayor (0 · 6 MPa) hubo poca o ninguna recuperación en tasa de alargamiento dentro
de 1 h

. El crecimiento de la raíz del trigo después de la adición de manitol 200 mM (similar en presión
osmótica a 100 mM de NaCl) aun estaba reducido un poco después de 24 h (Fig. 6), pero no al
grado después del tratamiento con manitol 300 o 400 mM (Fig. 6), este último
presumiblemente causando plasmólisis. Podría haber habido recuperación con períodos más
largos de tiempo: Rodríguez encontro que el crecimiento de las raíces de maíz tratadas con100
mMde NaCl se recuperó completamente después de 24 h, y después de 36 h con 150 mM de
NaCl. Estos autores también compararon los efectos de un shock de sal versus un aumento
gradual, y encontraron que la sal no tenía efecto sobre el crecimiento de la raíz a
concentraciones de hasta 100 mM de NaCl, siempre que la concentración se incrementara
gradualmente. Los efectos nocivos de un shock salino están presumiblemente asociados con la
plasmólisis de las células radiculares.

La expresión génica varía con el tiempo posterior a la aplicación del choque salino. Después de
que el arroz se expuso repentinamente a 150 mM de NaCl, los genes expresados en las raíces a
los 15 minutos fueron diferentes de los expresados después de 1 semana. Es probable que
muchos genes inducidos poco después de la aplicación de la sal estén relacionados con el
estrés hídrico y no específicamente con el Estrés salino. En las raíces de trigo, un gen
expresado en la fase temprana de la respuesta al estrés, 6 h después de la exposición
repentina a 250 mM de NaCl, se identificó como una proteína quinasa e inducido por el ácido
abscísico y la salinidad. Queda por investigar Si estos cambios en la expresión génica se
relacionan con la aclimatación a la tolerancia a largo plazo de la salinidad o del estrés hídrico.

Las células de la hoja no sufrirán el mismo trauma que las raíces después de un shock
osmótico. Si las células no están en contacto con la solución de plasmolización, y aun estaban
rodeadas de aire de manera normal, la pared colapsará alrededor del protoplasto encogible en
el fenómeno conocido como "citoresis". La integridad de la pared celular se ve afectada, pero
la membrana plasmática permanece unida, por lo que presumiblemente hay menos trauma en
la membrana plasmática que con la plasmólisis. Esto también se aplica a las células radicilares
en el suelo seco, o cuando se deshidratan en un banco de laboratorio. Se investigó el efecto de
la plasmólisis frente a la citorresis en los procesos de transporte de membrana y su
recuperación en Chara corallina para el transporte de HCO3 y OH. Cuando las células se
plasmolizaron con sorbitol, manitol o sacarosa, toda la actividad de transporte se perdió y
no se recuperó cuando las células se transfirieron nuevamente a la solución de control. En
contraste, cuando las células se secaron al aire a turgencia cero y se humedecieron
nuevamente, la actividad de transporte se recuperó por completo.

Los estudios sobre las vías de transducción de señales que se inician por el estrés salino o
hídrico podrían explotar los fenómenos de la plasmólisis y la citorresis para distinguir entre los
procesos inducidos por el daño de la membrana y los inducidos por el estrés mismo. Los
efectos dañinos no se limitan a las primeras horas o días posteriores a la imposición de la sal.
Los efectos sobre la acumulación y el crecimiento de sal se pueden ver semanas después. En
una comparación de plantas de trigo sometidas a aplicaciones graduales versus repentinas de
NaCl, se produjeron mayores concentraciones de Na + en brotes y mayores reducciones en las
tasas de crecimiento cuando la aplicación de NaCl fue repentino en lugar de gradual. Es posible
que las cantidades anormales de sal lleguen a los brotes a través de vías apoplásticas abiertas
por la plasmólisis. Esto fue indicado por un estudio de Storey & Wyn Jones sobre el
crecimiento y las relaciones iónicas de la cebada en 250 mM de NaCl cuando la aplicación fue
repentina en lugar de gradual

Dentro de los 2 días del choque repentino, los brotes contenían concentraciones de Na + y Cl–
de 3 a 5 mmol g − 1 DW, en comparación con solo 1 a 4 mmol g − 1 DW cuando la sal se
aplicaba gradualmente. Hubo un flujo muy grande de K + de las raíces, la concentración de la
raíz cayó cuatro veces. La sal extra transportada al brote puede ejercer un efecto tóxico
durante algún tiempo.

Una vez que la sal ha alcanzado el brote, puede haber pocas oportunidades para que se
elimine. Un shock repentino con un osmoticum no iónico puede ser tan perjudicial como un
shock salino.

Las plantas de cebada expuestas a PEG de presión osmótica equivalente como NaCl 250 mM se
marchitaron rápidamente y no sobrevivieron 4 días, mientras que las expuestas a NaCl 250
mM recuperaron su turbiedad después de 2 días y sobrevivieron. En resumen, el trauma
plasmolítico combina una eliminación repentina de agua con una membrana con fugas que
deja entrar cantidades anormales de sal en la célula raíz, o abre una vía apoplástica para que
cantidades anormales de sal se muevan a través del brote. Los tratamientos que lo causan
deben evitarse siempre que sea posible.