GUIA DE LA PRÁCTICA DE LABORATORIO No.

7: EXTRACCIÓN DE ADN DE
TEJIDOS VEGETALES Y MANEJO DE MICROPIPETAS
Tomado de: Guía de laboratorio de Biología Molecular. Universidad Francisco de
Paula Santander, Ocaña. Juliana Andrea Cuetia Londoño y Myriam Helena Arcos
Jiménez. Universidad Nacional de Colombia, sede Palmira.

Introducción.
El ácido desoxirribonucleico (ADN) fue identificado inicialmente en 1868 por
Friedrich Miescher en el núcleo de células, asignando el nombre de nucleina. Más
adelante, Frederick Griffith en 1928, sentó las bases para la identificación del ADN
como material genético con sus experimentos en la transformación de bacterias
denominada neumococo, ahora conocida como Streptococcus pneumoniaes y, en
1944 Oswald Avery, Colin, MacLeod, y Maclyn McCarty, descubrieron que el DNA
es el material de los genes y los cromosomas. (Weaver, 2012)

El ADN es un polímero que guarda la carga genética de las células existentes en

los seres vivos y la información para la síntesis de proteínas, fundamental para el
desarrollo y funcionamiento de los organismos vivos. Su estructura se caracteriza
por ser una doble cadena de bases complementarias formada cada una por
nucleótido y estos por una base de pirmidina o purina, una azúcar desoxirribosa y
un grupo fosfato. (TIPOS, s.f.)

Existen diferentes tipos de ADN, pero el objetivo de este laboratorio es el ADN

cromosómico que es la materia prima de los cromosomas y es el material del que
los genes están formados. (I.E.S., Juana de Pimentel, 2006)

Su ubicación en la célula varía dependiendo del tipo de célula, es decir, en las

células eucariotas el ADN se encuentra dentro del núcleo celular y en las
procariontes en el citoplasma (TIPOS, s.f.). Los estudios biomoleculares comienzan
con la extracción de los ácidos nucleicos los cuales necesitan ser aislados de
proteínas y otros componentes celulares para su posterior análisis pero, como
extraer ADN de un animal es un proceso relativamente tedioso y costoso, para la
experiencia de laboratorio lo extraeremos de algunos vegetales de forma clásica.
(Murguía, 2015) (University of UTAH Health Sciences, 2016).

1. EXTRACCIÓN DE ADN A PARTIR DE TEJIDO VEGETAL

OBJETIVOS

Capacitar al estudiante en el desarrollo de metodologías de extracción de ADN

Visualizar la molécula del ADN.

MATERIALESY EQUIPOS
 Un Erlenmeyer
 Un embudo de vidrio
 Una espátula
 Un asa bacteriológica
 Un filtro
 Una pipeta
 Un tubo Falcon
 Un mortero y pistilo
 Jabón
 Un banano
 Una varilla de vidrio
 Sal de cocina
 Etanol al 75%
 Ablandador de carne

METODOLOGÍA
Para la extracción de ADN a partir de banano, se debe preparar una solución con
sal, agua destilada y jabón realizando el siguiente procedimiento.
PROCESO DETALLES FUNCIÓN
Triturar Macerar medio banano en Separa las células.
un mortero, hasta que quede
lo más homogéneo posible.

Filtrar Filtrar el zumo obtenido de la Permite que los lípidos y las

maceración, con un medio proteínas de las membranas
para filtrar (tela), dejando sean separados del ADN por
que la solución drene por filtración.
algunos minutos hasta
obtener aproximadamente 2
ml de éste.
Adicionar Agregar al Erlenmeyer que Jabón: desintegra las
contiene el zumo de la fruta membranas celulares y
400 mg de sal, 300 mg de envolturas nucleares para
ablandador, 1 ml de jabón y liberar el ADN.
revolver lentamente con una Sal: aglutina proteínas y
varilla de vidrio evitando compuestos celulares e impide
formar espuma y déjelo que las cadenas de ADN se
reposar por 5 a 10 minutos. corten.
Ablandador de carne: corta las
histonas liberando el ADN.
 Transferir Traspasar el contenido del Actúan los ingredientes sobre
Erlenmeyer a un tubo las células de la fruta,
Falcon, con cuidado. permitiendo la liberación del
ADN.
Añadir Al tubo Falcon que contiene Elimina las proteínas y restos
la mezcla agregar celulares y precipita el ADN.
lentamente y por las
paredes del tubo, la misma
cantidad de la mezcla pero
en etanol frío al 75% y dejar
reposar por 2 a 3 minutos.
Es importante no batir el
tubo Falcon.
Observar. Con un asa bacteriológica, Se puede observar que el ADN
se puede facilitar la tiene la apariencia de mucus
visualización de la muestra blanco y fibroso, el cual se
de ADN resultante. precipita en la capa de alcohol.
Si se obtiene suficiente
cantidad de ADN puede
levantarse con una varilla de
vidrio o un asa en la que el ADN
se enrolla.

2. MANEJO DE MICROPIPETAS
OBJETIVO
Tener adiestramiento en el manejo de micropipetas.
MATERIALES Y EQUIPOS
 Micropipetas de diferente capacidad
 Puntas para micropipetas
 Tubos Eppendorf
 Beacker

METODOLOGÍA
1. Reconocimiento de las micropipetas: identifique cada una de las partes de la
micropipeta: reloj marcador, tornillo calibrador, embolo, botón expulsador.

2. Identifique el volumen y color que tiene cada una de las micropipetas en su

embolo, este le dirá el tipo de punta que debe utilizar, así:
a. Micropipetas azules: rango de volumen 100-1000uL, tipo de punta
azul
 b. Micropipetas amarillas: rango de volumen 20-200uL, tipo de punta
amarilla
c. Micropipetas amarillas: rango de volumen 10-100uL, tipo de punta
amarilla
d. Micropipetas amarillas: rango de volumen 2-20uL, tipo de punta
amarilla
e. Micropipetas gris: rango de volumen 1-10uL, tipo de punta
transparente
f. Micropipetas gris: rango de volumen 0,1-2uL, tipo de punta
transparente

3. Fíjese en que el volumen que marca el reloj coincida con el máximo volumen
de la micropipeta, mire de frente el reloj marcador manteniendo siempre la
pipeta en posición vertical y mueva el tornillo calibrador hacia la izquierda,
note el volumen disminuye y viceversa. No se debe sobrepasar los límites
máximo y mínimo de la pipeta porque se puede dañar.

4. Tome firmemente la pipeta con su mano y ponga el dedo pulgar sobre el

embolo, presiónelo suavemente hasta que encuentre el primer tope, si
presiona un poco más fuerte encontrará un segundo tope.

5. Procedimiento para pipetear una solución:

a. Calibre la cantidad que necesita pipetear.
b. Identifique el tipo de punta según la pipeta. Abra la caja de las puntas
estériles y presione firmemente la punta de la pipeta dentro de una de
las puntas. Remueva la punta y cierre la tapa de la caja para prevenir
contaminación.
c. Abra el tubo que contiene “H2O”. Presione el embolo hasta el primer
tope, sostenga el tubo al nivel de los ojos, y ponga el extremo de la
punta de la pipeta en la solución. El extremo de la pipeta debe estar
justo debajo de la superficie del líquido. Suelte lentamente el embolo
hasta que se detenga para adsorber el líquido.
d. Para expulsar el líquido presione lentamente el embolo hasta el primer
tope, si queda líquido en la punta presione un poco más fuerte hasta
el segundo tope. Sin soltar el embolo aleje la pipeta del sitio en donde
depositó el líquido. Si necesita desechar la punta presione el botón
expulsador.
RECOMENDACIONES
a. Cuando este pipeteando mantenga la pipeta en sentido vertical para evitar
que la solución entre en la pipeta y la dañe.
b. Después de utilizar una pipeta póngala en su mayor capacidad de volumen
y déjela en el porta-pipetas.

Bibliografía
ArgenBio. (2007). PQBio. Obtenido de
http://www.porquebiotecnologia.com.ar/adc/uploads/pdf/1Extraccion_ADN_
vegetal.pdf
I.E.S., Juana de Pimentel. (2006). La Ciencia a tu alcance II. Obtenido de
http://www.jpimentel.com/ciencias_experimentales/pagwebciencias/pagweb/
la_ciencia_a_tu_alcance_II/quimica/Experiencias_quimica_extraccion_de_a
dn.htm
Murguía, M. (03 de 2015). www.olimpiadn.educabarrie.org. Obtenido de
http://olimpiadn.educabarrie.org/wp-
content/uploads/2015/03/EXTRACCI%C3%93N-DE-ADN-MANUEL-
MURGU%C3%8DA.pdf
TIPOS. (s.f.). www.tipos.co. Obtenido de http://www.tipos.co/tipos-de-adn/
University of UTAH Health Sciences. (2016). Learn genetics. Obtenido de
http://learn.genetics.utah.edu/content/labs/extraction/
Weaver, R. F. (2012). Molecular Biology. New York: McGraw-Hill.