Tema:

FUNCIONAMIENTO DE UN ESPECTROFOTÓMETRO
Índice

Contenido Página

Objetivos…………………………………………………………………………...1

Marco teórico……………………………………………………………………...1

Conclusiones………………………………………………………………………15

Bibliografía………………………………………………………………………....16

Anexos……………………………………………………………………………...17
 Objetivos

Introducción

En esta práctica se aprendió a encontrar el pka de una solución, la cual se

procedió hacer obteniendo midiendo puntos máximos de longitud de onda, luego
se creó una sln buffer con la cual se desarrolló con ph cercanos al indicador.

Esta aplicación determinar el pka es muy útil, en esta práctica se desarrolló un

método para poder determinarlo prácticamente y poder llevarlo a acabo con
métodos matemáticos y analíticos.

Estos métodos le permite al analista a no obtener algunos problemas que pueden

desarrollarse mientras se realiza la práctica los cuales pueden intervenir en los
resultados de la práctica y podría generar un problema en la interferencia de estos
a la hora de hacer los cálculos respectivos
 Marco teórico

EXPERIMENTO No. 4
pKa DE UN INDICADOR ACIDO-BASE POR ESPECTROFOTOMETRIA

FUNDAMENTACION TEORICA

Primeramente se debe verificar la λmax de la forma del indicador con mayor

absorbancia, usualmente la forma básica, en el espectrofotómetro. Luego, se ajusta el
pH de una solución buffer-indicadora a valores centrados alrededor del pKa del
indicador y entonces se miden las absorbancias, A, de las soluciones resultantes. Se
llevan estas soluciones a pH bajos para generar la forma ácida pura del indicador, HIn,
y se mide su absorbancia, AHIn. Posteriormente se toma otra solución a un pH elevado
para generar la forma básica pura, In- , y se determina su absorbancia, AIn-. Usando la
ecuación pKa = pH + log10 [(A - AIn-)/(AHIn – A)], se calculan los pKa’s de las soluciones, o
equivalentemente, se grafican los datos de la función logarítmica vs. pH para encontrar
la intercepción en x, la cual es el valor del pKa.

Para ilustrar un aspecto del concepto de equilibrio químico, idealmente un

experimento de laboratorio debería:
1. resultar en un valor razonablemente exacto de la constante de equilibrio.
2. usar un número pequeño de soluciones que sean seguras de manipular, o al menos
ser familiar a los alumnos, y simple de desechar.
3. usar equipo usado comúnmente en un laboratorio de análisis instrumental, y
4. no exceder las habilidades de un alumno de análisis instrumental típico.

Para que el método descrito aquí funcione, sólo debe haber una forma ácida del
indicador (HIn) y una forma básica (In-) en el equilibrio:

HIn ⟺ H+ + In-

Si usamos concentraciones en lugar de actividades, la expresión para la constante de

equilibrio para la reacción es
La forma logarítmica para la ecuación es

La forma ácida del indicador tiene un color, tal como el amarillo, con su correspondiente
λmax a una longitud de onda, y la forma básica tiene otro color, tal como el azul, con su
correspondiente λmax a una longitud de onda diferente. Si la longitud de la trayectoria
de la celda se mantiene constante y todas las soluciones contienen la misma molaridad
total del indicador, el cociente ácido-base a la λmax de ya sea la forma ácida o básica viene
dado por:

Donde A es la absorbancia de la solución conteniendo una cierta concentración total de

la mezcla ácido-base, AIn- es la absorbancia de la forma básica a la misma concentración,
y AHIn es la absorbancia de la forma ácida a la misma concentración.

Sustituyendo la expresión para el cociente HIn - In- de la ec. 2 en la ec. 1,

El pKa de un indicador se puede determinar por dos métodos equivalentes, un método

algebraico o un método gráfico. En el método algebraico, conjuntos de pH y valores de
absorbencias se sustituyen en la ec. 3 y se calcula el pK a para cada conjunto. El pKa
reportado es el promedio de los pKa’s calculados. En el método grafico se graficará así:

de la ec. 4, y el pKa se obtiene como la intercepción en x. La línea debe tener una pendiente de -1.
OBJETIVOS

Utilizar la especrofotometría UV-VIS, para evaluar el valor de pKa para un indicador

ácido-base.

REACTIVOS
Azul de bromotimol, 0.1% en etanol (20%).
Na2HPO4, 0.10 M
KH2PO4, 0.10 M
HCl concentrado.
KOH, 4.0 M

MATERIALES
7 Balones volumétricos de 25 ml
4 Pipetas graduadas de 5 ml
Beaker de 100 ml
4 Pipetas graduadas de 1, 5, 10 ml
Agitador de vidrio
6 Frasco volumétrico de 125 ml

EQUIPO
Espectrofotómetro UV-VIS

PROCEDIMIENTO

PARTE A. OBTENCION DE ESPECTROS DE ABSORCION DEL AZUL DE BROMOTIMOL

A DIFERENTES VALORES DE pH.

En esta parte se obtendrán tres espectros de absorción completos para el indicador azul
de bromotimol a tres valores diferentes de pH: 1, 13 y 7 aproximadamente.

PROCEDIMIENTO A-1. VALOR DE pH~1

Pipetea cuidadosamente 1 ml de la solución stock de azul de bromotimol en un
frasco volumétrico limpio de 25 ml
Agrega unos cuantos ml de agua destilada, 4 gotas de HCl concentrado y finalmente
diluye a la marca con agua destilada.
 Mezcla adecuadamente la solución invirtiendo varias veces el frasco. Con esta
solución enjuaga una celda del spectronic.
Agrega 5 ml de la solución anterior a la celda y mide el %T o Absorbancia de ella
desde los 365 nm hasta los 575 nm, a intervalos de 10 nm.
Grafica la Absorbancia vrs Longitud de Onda (en nm) e indica el color de la solución.

PROCEDIMIENTO A-2. VALOR DE pH~6.9

Pipetea 1 ml del indicador en un frasco volumétrico limpio de 25 ml y agrega 5 ml
de solución 0.10M de Na2HPO4 y 5 ml de KH2PO4
Diluye a la marca con agua destilada y obtén el espectro siguiendo el mismo
procedimiento anterior.
Grafica la Absorbancia vrs Longitud de Onda (en nm) en la misma gráfica del
procedimiento anterior e indica el color de la solución.

PROCEDIMIENTO A-3. VALOR DE pH~13

A 1 ml del indicador en un frasco volumétrico limpio de 25 ml y agrega 12 gotas de
KOH 4M
Diluye a la marca con agua destilada y obtén el espectro como se ha hecho
anteriormente.
Grafica la Absorbancia vrs Longitud de Onda (en nm) en la misma gráfica del
procedimiento anterior e indica el color de la solución.
Las 3 gráficas deberán intersectarse en un mismo punto. A este punto se le
denomina punto isobéstico.

PARTE B. ABSORBANCIA DE SOLUCIONES CON DIFERENTE pH, A LONGITUDES DE

ONDA SELECCIONADAS.
Con referencia al gráfico que se ha construido, selecciona 2 longitudes de onda a las
cuales se efectuarán mediciones de Absorbancia.

Se deberá seleccionar una longitud de onda que se encuentre a la izquierda del

punto isobéstico y otra longitud que se encuentre a la derecha de dicho punto.
Selecciona las longitudes de onda donde la forma ácida y básica del indicador
muestren una diferencia máxima en su absorbancia.

Las mediciones se efectuarán en 7 soluciones con pH diferente, según se indica a

continuación, debiendo de ser pipeteadas las cantidades que se indican, en frascos
volumétricos de 25 ml y diluir cada una hasta la marca:
 Solución ml de indicador ml de H2PO4- ml de HPO4-2 pH
1 1.0 5.0 0.0 ~4.5
2 1.0 5.0 1.0 6.2
3 1.0 10.0 5.0 ?
4 1.0 5.0 10.0 ?
5 1.0 1.0 5.0 ?
6 1.0 1.0 10.0 ?
7 1.0 0.0 5.0 ~9.1

Mide la absorbancia de cada solución a las dos longitudes de onda seleccionadas.

(No olvidar la calibración del equipo siempre que se cambie de longitud de onda).
Calcula el pH de cada solución, partiendo del hecho que la segunda constante de
ionización para el H3PO4 es de 1.3x10-7 (pK2= 6.9)

PARTE C. TRATAMIENTO DE LOS DATOS

 Combina los valores de absorbancia a las dos longitudes de onda seleccionadas

(que se obtuvieron en la Parte A) con los datos obtenidos en la Parte B, grafica la
Absorbancia (verticalmente) vs. pH (horizontalmente) para cada una de las
dos longitudes de onda estudiadas.
 Conecta los puntos con una curva suave. El punto medio de cada curva corresponde
a las concentraciones equivalentes de las formas ácida y básica del indicador.
 A partir de cada gráfica determina el pKa del indicador. Los dos valores que se
obtengan podrán variar ligeramente.
 Dibuja dos líneas horizontales a través de cada gráfico A vs pH; una
línea corresponderá a la absorbancia de la solución con pH ~1 del indicador y la
otra corresponderá a la absorbancia de la solución con pH ~13 del indicador. La
primera línea (I) da la absorbancia cuando el indicador se encuentra en la forma
ácida totalmente. La segunda línea da la absorbancia, cuando el indicador está
presente en la forma básica totalmente.
 Considera en el ejemplo siguiente,
la lectura de absorbancia obtenida
a pH 6.2
Restando la Absorbancia a pH 6.2
de la Absorbancia a pH 1 (la línea
ácida I de la curva) puede
obtenerse una medida de la
cantidad de In- en la solución de
pH=6.2
Restando la Absorbancia a pH 13
(la línea básica II de la curva) de la Absorbancia a pH 6.2 puede obtenerse una
medida comparable de la cantidad de HIn en la solución de pH=6.2
La relación de In- a HIn, In-/HIn, se obtiene dividiendo los resultados de los dos
cálculos anteriores.

Determina la relación In-/HIn correspondiente a cada uno de los puntos que se han
graficado en uno de los gráficos de A vs pH y procede a graficar log In-/HIn vs pH
en otra gráfica. El punto en que la línea cruza el eje cero corresponde a las
concentraciones equivalentes de las formas ácida y básica del indicador.
A partir del pH al cual la línea cruza el eje cero en la gráfica determina el valor de
pKa del indicador.

NOTA.
El azul de bromotimol es un indicador monobásico, que se disocia según la ecuación general:
HIn = H+ + In-

La ecuación resultante está en la forma de una recta y = mx + b donde pKa es una

constante. Por tanto, al graficar el término “y’” vs el término “x”, se obtendrá una línea
recta con pendiente m=1.
Cuando [ In-] = [HIn] o el log (In-/HIn) iguale a cero, entonces el pH = pKa. De esa
manera
puede determinarse el valor de pKa para el azul de bromotimol.
 INSTRUMENTO UTILIZADO

Espectrofotómetro genesys 20

Marca: Thermo Scientific GENESYS 20

Diseño óptico: haz único

Ancho de banda espectral: ≤8 nm

Fuente de luz: tungsteno-halógeno

Detector: Fotodiodo De Silicona

1
 Datos y cálculos
Cálculos para la preparación de la solución
Preparación de la solución de Na2HPO4 al 0.10M (100 ml de solución)
𝑔
𝑃𝑀 𝑁𝑎2 𝐻𝑃𝑂4 = 142.0
𝑚𝑜𝑙
𝑀𝑉(𝐿) = 𝑚𝑜𝑙
𝑚𝑜𝑙
(0.10 )(0.10𝐿) = 𝑚𝑜𝑙
𝐿
0.01 𝑚𝑜𝑙 𝑑𝑒 𝑁𝑎2 𝐻𝑃𝑂4 = 𝑚𝑜𝑙
142.0 𝑔
0.01𝑚𝑜𝑙 𝑑𝑒 𝑁𝑎2 𝐻𝑃𝑂4 = 1.42 𝑔 𝑑𝑒 𝑁𝑎2 𝐻𝑃𝑂4
1 𝑚𝑜𝑙 𝑑𝑒 𝑁𝑎2 𝐻𝑃𝑂4
Preparación de 100 ml de solución 𝑁𝑎𝐻2 𝑃𝑂4 al 0.10 M
𝑔
𝑃𝑀 𝑁𝑎𝐻2 𝑃𝑂4 = 120.1
𝑚𝑜𝑙
𝑀𝑉(𝐿) = 𝑚𝑜𝑙
𝑚𝑜𝑙
(0.10 )(0.10𝐿) = 𝑚𝑜𝑙
𝐿
0.010 𝑚𝑜𝑙 𝑑𝑒 𝑁𝑎𝐻2 𝑃𝑂4 = 𝑚𝑜𝑙
120.1 𝑔
0.01𝑚𝑜𝑙 𝑑𝑒 𝑁𝑎2 𝐻𝑃𝑂4 = 1.20 𝑔 𝑑𝑒𝑁𝑎𝐻2 𝑃𝑂4
1 𝑚𝑜𝑙 𝑑𝑒𝑁𝑎𝐻2 𝑃𝑂4
Preparación de 50 ml de KOH al 4.0M
𝑔
𝑃𝑀 𝐾𝑂𝐻 = 56.1
𝑚𝑜𝑙
𝑀𝑉(𝐿) = 𝑚𝑜𝑙
𝑚𝑜𝑙
(4.0 )(0.05𝐿) = 𝑚𝑜𝑙
𝐿
0.20 𝑚𝑜𝑙 𝑑𝑒 𝐾𝑂𝐻 = 𝑚𝑜𝑙
56.1 𝑔
0.20 𝑚𝑜𝑙 𝑑𝑒 𝐾𝑂𝐻 = 11.22 𝑔 𝑑𝑒 𝐾𝑂𝐻
1 𝑚𝑜𝑙 𝑑𝑒 𝑁𝑎2 𝐻𝑃𝑂4
2
 Solución ml de indicador ml de H2PO4- ml de HPO4-2 pH
1 1.0 5.0 0.0 ~4.5
2 1.0 5.0 1.0 6.2
3 1.0 10.0 5.0 6.60
4 1.0 5.0 10.0 7.20
5 1.0 1.0 5.0 7.60
6 1.0 1.0 10.0 7.90
7 1.0 0.0 5.0 ~9.1

Calculo para encontrar Ph

𝑀1 𝑉1 = 𝑀2 𝑉2
𝑀1 𝑉1
𝑀2 =
𝑉2

ACIDO BASE
(0.10)(5.0𝑚𝑙)
(0.10)(10𝑚𝑙) 𝑀2 =
𝑀2 = (25𝑚)
(25𝑚)
𝑀2 = 0.02𝑀
𝑀2 = 0.04𝑀

𝑏𝑎𝑠𝑒
𝑝𝐻 = 𝑝𝑘𝑎 + 𝑙𝑜𝑔
𝑎𝑐𝑖𝑑𝑜
(0.02)
𝑝𝐻 = 6.9 + 𝑙𝑜𝑔
(0.04)
𝑝𝐻 = 6.60
pH numero 4

ACIDO BASE
(0.10)(10𝑚𝑙)
(0.10)(5.0𝑚𝑙) 𝑀2 =
𝑀2 = (25𝑚)
(25𝑚)
3
 𝑀2 = 0.02𝑀 𝑀2 = 0.04𝑀

𝑏𝑎𝑠𝑒
𝑝𝐻 = 𝑝𝑘𝑎 + 𝑙𝑜𝑔
𝑎𝑐𝑖𝑑𝑜
(0.04)
𝑝𝐻 = 6.9 + 𝑙𝑜𝑔
(0.02)
𝑝𝐻 = 7.20
PH numero 5

ACIDO BASE
(0.10)(5.0𝑚𝑙)
(0.10)(1.0𝑚𝑙) 𝑀2 =
𝑀2 = (25𝑚)
(25𝑚)
𝑀2 = 0.02𝑀
𝑀2 = 0.004𝑀

𝑏𝑎𝑠𝑒
𝑝𝐻 = 𝑝𝑘𝑎 + 𝑙𝑜𝑔
𝑎𝑐𝑖𝑑𝑜
(0.02)
𝑝𝐻 = 6.9 + 𝑙𝑜𝑔
(0.004)
𝑝𝐻 = 7.60
PH numero 6

ACIDO BASE
(0.10)(10𝑚𝑙)
(0.10)(1.0𝑚𝑙) 𝑀2 =
𝑀2 = (25𝑚)
(25𝑚)
𝑀2 = 0.04𝑀
𝑀2 = 0.004𝑀

4
 𝑏𝑎𝑠𝑒
𝑝𝐻 = 𝑝𝑘𝑎 + 𝑙𝑜𝑔
𝑎𝑐𝑖𝑑𝑜
(0.04)
𝑝𝐻 = 6.9 + 𝑙𝑜𝑔
(0.004)
𝑝𝐻 = 7.90
Preparación del indicador de azul de bromotimol
Se desea preparar 50ml de azul de bromotimol 0.1% en etanol 20%
𝑚 𝑔 𝑑𝑒 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑡𝑜
%( ) = 𝑥 100%
𝑉 𝑉𝑠𝑙𝑛
Se necesita preparar 50 ml de solución al 1%
𝑔 𝑑𝑒 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑡𝑜
1% = 𝑥 100%
50𝑚𝑙
(50𝑚𝑙)(1%)
𝑔 𝑑𝑒 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑡𝑜 = 𝑥 100%
50𝑚𝑙
𝑔 𝑑𝑒 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑡𝑜 = 0.50 𝑔𝑟𝑎𝑚𝑜𝑠 𝑑𝑒 𝑎𝑧𝑢𝑙 𝑑𝑒 𝑏𝑟𝑜𝑚𝑜𝑡𝑖𝑚𝑜𝑙
0.90(120ml) = 108 ml etanol + 12 ml de agua
50ml (0.20%) = 10 ml + 40 ml de agua
Se tomo 10 ml de alcohol 90% y se le añadieron 40 ml de agua para tener etanol al 20%

Análisis de resultados y conclusiones

Conclusiones.

5
REFERENCIAS

Skoog, Douglas A., FJames Holler y Stanley R. Crouch. Prinicipio de análisis

instrumental. Sexta edición