Informe-Laboratorio 8 de Noviembre

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA y a DISTANCIA
ZONA CENTRO BOGOTÁ – CUNDINAMARCA

CEAD JOSÉ ACEVEDO y GÓMEZ
ESCUELA Ciencias Básicas, Tecnologías e Ingenierías - ECBTI
CURSO: 100416
GRUPO: 100416_7
NOMBRE TUTOR TEORÍA: Nhury Castellanos, Paula Andrea Mendez
CORREO TUTOR TEORÍA: Carlosalopez@mad.edu.co
INFORME DE PRÁCTICA DE LABORATORIO

PRÁCTICA No. 8 – SEPARACIÓN DE PIGMENTOS VEGETALES POR
CROMATOGRAFÍA DE PAPEL
NOMBRE TUTOR PRACTICA: Carlos López

ESTUDIANTES:
Martha Liliana Jiménez Hurtado, Natalia Julieth Rodríguez Ruiz, Juan Carlos Latorre Basto,
Andrea Ramírez Romero, Luis Antonio Sierra Moreno
FECHA DE LA PRÁCTICA: 26 octubre de 2019
CIUDAD: Bogotá
FECHA DE PRESENTACIÓN INFORME: 8 noviembre del 2019
RESULTADO
OBJETIVOS
Conocer y aplicar los principios teórico-prácticos de la cromatografía de papel como un

método de separación de sustancias.
FUNDAMENTO TEÓRICO
La cromatografía en papel es una técnica utilizada en los laboratorios para realizar análisis
cualitativos de muestras, su procedimiento es sencillo, aunque su sensibilidad no es muy alta.
La separación de pigmentos fotosintéticos está constituida por tres fases: Muestra, fase
estacionaria, fase móvil.
Fase móvil es un solvente.
Fase móvil
(Sustancia química utilizada para ubicar
la fase estacionaria, para nuestra
separación de pigmentos vamos a
utilizar un disolvente orgánico).
(etanol)
La muestra se deposita en un extremo sobre una tira de papel colocando pequeñas gotas de
la muestra.
fases IMAGEN
Muestra
(espinaca)
Fase estacionaria: La fase estacionaria está constituida por una tira de papel cromatográfico
Fase estacionaria
(papel cromatográfico)
Para una buena cromatografía es importante el papel utilizado y la elección del

solvente, los cloroplastos presentan diferentes colores:
Clorofila
Verde intenso
Clorofila
verde
Carotenos
Amarillo claro
Xantofilas
Amarillo anaranjado
“Todas las sustancias presentan diferente grado de solubilidad en disolventes apolares, lo que
hace su separación cuando la solución asciende por capilaridad.
Las sustancias más solubles se desplazan a mayor velocidad, acompañan fácilmente al
disolvente a medida de su ascenso, las menos solubles avanzan más lento en la tira de papel
cromatográfico, por lo que a medida que avanza van apareciendo la diferente gama de
colores, que estarán más o menos alejados del disolvente según su mayor o menor solubilidad
de pigmentos. “
(Paula Andrea Méndez Morales, 2018)
PROCEDIMIENTO
instrucciones Imágenes
Maceramos la muestra
Mortero, espinaca
Adicionamos 5 ml de etanol
etanol
Filtramos la mezcla y realizamos la

separación
papel de filtro embudo
Papel Filtro, Embudo, Beaker 50ML

Papel de cromatografía le hacemos una

línea a unos 2 cm a lo ancho y colocamos
dos puntos centrados, para colocar con el
capilar las gotas unas 6 veces según sea
necesario.
capilar
Colocar el papel cromatográfico con la

muestra dentro del beaker que contiene la
fase móvil
Fase movil
DATOS EXPERIMENTALES
Se obtuvieron los cuatro colores en

diferente ubicación a lo largo del papel
cromatográfico.
ANALISIS Y DISCUSIÓN DE RESULTADOS
Pigmento Color Imagen

Clorofila verde oscuro
Clorofila - b Verde claro
Carotenos Amarillo
Xantofilas Amarillo naranjado
CUESTIONARIO
RESULTADOS Y CÁLCULOS PARA EL INFORME DE LABORATORIO
1. Registre los resultados

2. Indague sobre el uso y los diferentes tipos de cromatografía.
Respuesta:
Cromatografía:
El término se refiere al conjunto de técnicas basadas en la partición de las

moléculas que se analizarán entre una fase móvil y una
estacionaria. Químicamente es un proceso en el que se separan diferentes
componentes de una mezcla. Esto se logra pasando una muestra en un
solvente a través de alguna forma de material que proporcionará
resistencia en virtud de las interacciones químicas entre los componentes
de la muestra y el material.
TIPOS DE CROMATOGRAFÍA
El proceso se utiliza para averiguar de qué se componen las sustancias al

separar los compuestos. Por ejemplo; es útil para determinar qué
anticuerpos combaten diversas enfermedades y virus. También con éste

método se realizan diversas pruebas con alimentos así como los
fabricantes de bebidas utilizan esta técnica para garantizar que cada
botella de su producto sea exactamente la misma y controlar los niveles
de azúcar.
Por otra parte, también se utiliza para identificar con precisión cuales son
las sustancias que se encuentran en el torrente sanguíneo. Por ello esta
prueba se utiliza rutinariamente para evaluar a los atletas para evitar el
dopaje por drogas que mejoran el rendimiento. Igualmente es
ampliamente utilizado en pruebas forenses, por ejemplo la cromatografía
de gases se utiliza para analizar muestras de sangre y ropa en busca de
restos de ADN.
Cromatografía de gases
En esta prueba generalmente se utiliza un gas inerte como el helio o el

nitrógeno. El gas ayuda a transportar las moléculas de la muestra y ello
depende de la fuerza de adsorción, que a su vez depende del tipo de
molécula. Los diversos componentes de la mezcla de una muestra se
separan a medida que tienen contacto con el gas. Se utiliza un detector
para controlar la corriente de salida y por lo tanto, se puede determinar la
cantidad de ese componente. En general, las sustancias se identifican por
el orden en que emergen.
Una serie de detectores se utilizan en la cromatografía de gases y el más

utilizado es el de conductividad térmica (TCD). La principal ventaja que
posee es que puede detectar cualquier sustancia. Otros detectores son el
de ionización de llama (FID), el detector de electrones (ECD), el detector
fotométrico de llama (FPD), el detector de fotoionización (PID) y el
detector de conductividad electrolítica Hall.
En papel
Se procede a dejar caer una pequeña gota de la solución que contiene la

muestra a una tira de papel especial para esta táctica la cual se adsorbe.
Es muy útil y fácil ya que la muestra se puede poner en contacto con el
papel, sin embargo, hay sustancias que reaccionan al papel y no pueden
someterse a esta técnica. La técnica común consiste en tomar el papel y
sumergirlo en un disolvente como etanol o agua para luego guardarlo
dentro de un recipiente sellado.
Cromatografía de intercambio iónico
Funciona bien para separar moléculas porque cada tipo diferente presenta
una adherencia en particular. Para que esta funcione, el tipo de
adherencia que poseen las moléculas debe coincidir con el tipo de
adherencia de la superficie o material que se utilizará.
La unión iónica es la atracción de moléculas con cargas eléctricas

opuestas, son la atracción de moléculas hechas de cadenas de átomos de
carbono que llevan átomos de hidrógeno con ellas.
De líquidos
Es una técnica que se utiliza para separar una muestra por cada uno de
sus componentes. Esta separación se produce en función de las
interacciones químicas o físicas de la muestra. Debido a que hay muchas
combinaciones de fases estacionarias o móviles que pueden emplearse al
separar una mezcla, hay varios tipos que se clasifican según los estados
físicos de esas fases.
Se utiliza un líquido para poder transportar la muestra a través de una

fase estacionaria donde tiene lugar la separación, es muy útil porque
tiene la capacidad de separar muestras a temperaturas relativamente
bajas ya que por ejemplo la cromatografía por gases se puede hacer a
temperaturas más altas.
La técnica más utilizada consiste en una primera fase móvil líquida que se
filtra lentamente a través de la fase estacionaria sólida, trayendo consigo
los componentes separados. Cada componente de la muestra interactúa
de manera ligeramente diferente con el material adsorbente, por ello se
van observando diferencias en la cantidad de componentes que son
transportados.
Cromatografía líquida de alta resolución
Se usa frecuentemente en bioquímica. La muestra es sometida a una alta

presión, lo que disminuye el tiempo en que los componentes ya
separados permanecen en la fase estacionaria Los disolventes utilizados
incluyen cualquier combinación miscible de agua o varios líquidos
orgánicos como alcoholes, acetonitrilo, diclorometano y otros. A menudo,
se utiliza un gradiente para separar las mezclas.
A medida que el líquido va siendo adsorbido por el papel, empezará a

reaccionar con la mezcla previamente preparada. El experimento
generalmente se deja por algunas horas. Según la intensidad con la que
interactúan entre sí se determina un resultado.
Se puede comparar con otras pruebas para identificar calculando valores

R f. La cromatografía bidireccional de papel implica el uso de dos
disolventes y la rotación del papel entre 90 ° y medio. Esto es útil para
separar mezclas complejas de compuestos similares.
En capa fina
Esta técnica se compone de un material absorbente de capa delgada que

se encuentra sobre una superficie generalmente una placa de vidrio. El
absorbente el cual puede ser un gel de sílice o también extracto de sulfato
de calcio se unta sobre la superficie del vidrio y se somete a altas
temperaturas. El proceso es el mismo para la que es en papel.
De afinidad
En esta técnica se separan las moléculas en función de las diferencias en

su afinidad por medio de un tipo de resina. Este método ayuda a describir
cómo dos moléculas o sustancias se comportan entre sí además de
entender su composición. La de afinidad se basa en interacciones
biológicas entre dos moléculas como enzimas, anticuerpos y antígenos,
éstos últimos se producen en el cuerpo para combatir ciertos tipos de
infecciones.
Esta técnica ayuda a purificar una molécula en función de su actividad

biológica o estructura química individual y es la única técnica que puede
hacer esto. Es un excelente proceso de selectividad que es eficiente y
rápido para los laboratorios químicos.
Cromatografía hplc
Las siglas HPLC se refiere a “High-performance liquid chromatography” lo

cual se traduce como líquida de alta eficacia. Es uno de los métodos más
eficaces pero más complejos ya que se requiere de un detector y de un
cromatografo.
Este método identifica y cuantifica los componentes que se encuentran

disueltos dentro de un solvente líquido. Se puede utilizar gases como
helio o nitrógeno. Esta técnica es comúnmente utilizada en laboratorios
industriales y científicos para la elaboración de productos farmacéuticos o

para usos ambientales.
Básicamente se bombea una mezcla de la muestra en un disolvente a alta

presión a través de una columna que tiene material de empaque especial
cromatográfico. Con ello, la muestra es transportada por una corriente de
gas. Esta es la mejor para separar e identificar cada uno de los
compuestos que se encuentran presentes en cualquier muestra que pueda
disolverse en un líquido en concentraciones mínimas de partes por trillón.
Para su práctica es necesario tener en el laboratorio depósitos múltiples

donde colocar los solventes, una bomba de alta presión, una columna, un
sistema de inyección y el detector. Un depósito para el solvente, tiene
una capacidad de hasta 1000 cc y usualmente está equipado con un
difusor de gas a través del cual se puede burbujear el helio.
Se utiliza una bomba para generar un flujo específico, aunque la inyección

manual también se puede utilizar, pero ya existen múltiples métodos
automatizados y controlados por computadora. Se necesita un detector
para ver los compuestos que han sido separadas a medida que se diluyen
debido a la alta presión. La información se envía desde el detector a una
computadora que genera el cromatograma.
3. Responda:
a. La solubilidad en alcohol de los pigmentos es, de mayor a menor:

carotenos, clorofila a, clorofila b y xantofilas. Indicar qué pigmento
corresponde a cada banda.
Respuesta:
PIGMENTO COLOR
Clorofila A verde oscuro
Clorofila B Verde claro
Carotenos Amarillo
Xantofilas Amarillo naranjado
b. ¿Por qué se emplea éter etílico para extraer la clorofila?

Respuesta:
 La molécula de la clorofila tiene una compleja estructura, compuesta por

cadenas orgánicas, que le confiere un elevado carácter “hidrófobo”. En
consecuencia, se debe realizar la extracción con un solvente orgánico
donde la clorofila tenga una elevada solubilidad como es el caso del éter
etílico pero también es muy soluble en otros solventes orgánicos
c. ¿Qué pigmentos son los más abundantes?

Respuesta:
El pigmento más abundante es la clorofila, la cual da un color verde y

verde intenso. También existen otros pigmentos como son los carotenos
que dan un color amarillo, y xantofilas que da color amarillo-anaranjado
4. Analice sus resultados teniendo en cuenta la información de los puntos 2 y

3.
Respuesta:
Analizando los resultados encontramos que hay una partición de las

moléculas que se analizaron entre una fase móvil y una estacionaria; en
donde se separan las diferentes bandas de una mezcla, apreciando los
distintos componentes de la espinaca
CONCLUSIONES
 La cromatografía en papel no requiere ningún tipo de equipamiento y es un proceso

muy utilizado para los análisis cualitativos en la separación de sustancias.
 En el experimento las sustancias más solubles se desplazan a mayor velocidad y
acompaña al disolvente a medida que este asciende.
 Por medio de esta técnica se pueden observar los cloroplastos que son los orgánulos
celulares que se ocupan de la fotosíntesis, mediante la mezcla de pigmentos en
diferentes tonalidades de color.
REFERENCIAS
 Méndez P (2018). Guía componente practico. Bogotá.
 Machado A. (2014), Separación de pigmentos vegetales por

cromatografía sobre papel filtrado, recuperado de la página:
https://prezi.com/5hwf_v0a7kd0/separacion-de-pigmentos-vegetales-
por-cromatografia-sobre-pa/
 OCIO RANK S. (2018), ¿Qué es la cromatografía y qué tipos existen?,

Centro de Estudios Cervantinos, recuperado de la página:
https://www.centroestudioscervantinos.es/que-es-la-cromatografia/

Informe-Laboratorio 8 de Noviembre

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ZONA CENTRO BOGOTÁ – CUNDINAMARCA

INFORME DE PRÁCTICA DE LABORATORIO

NOMBRE TUTOR PRACTICA: Carlos López

Conocer y aplicar los principios teórico-prácticos de la cromatografía de papel como un

Fase móvil es un solvente.

Para una buena cromatografía es importante el papel utilizado y la elección del

Filtramos la mezcla y realizamos la

papel de filtro embudo

Papel Filtro, Embudo, Beaker 50ML

Papel de cromatografía le hacemos una

Colocar el papel cromatográfico con la

Se obtuvieron los cuatro colores en

ANALISIS Y DISCUSIÓN DE RESULTADOS

Pigmento Color Imagen

Clorofila - b Verde claro

Xantofilas Amarillo naranjado

RESULTADOS Y CÁLCULOS PARA EL INFORME DE LABORATORIO

1. Registre los resultados

El término se refiere al conjunto de técnicas basadas en la partición de las

El proceso se utiliza para averiguar de qué se componen las sustancias al

anticuerpos combaten diversas enfermedades y virus. También con éste

En esta prueba generalmente se utiliza un gas inerte como el helio o el

Una serie de detectores se utilizan en la cromatografía de gases y el más

Se procede a dejar caer una pequeña gota de la solución que contiene la

Cromatografía de intercambio iónico

La unión iónica es la atracción de moléculas con cargas eléctricas

Se utiliza un líquido para poder transportar la muestra a través de una

Cromatografía líquida de alta resolución

Se usa frecuentemente en bioquímica. La muestra es sometida a una alta

A medida que el líquido va siendo adsorbido por el papel, empezará a

Se puede comparar con otras pruebas para identificar calculando valores

Esta técnica se compone de un material absorbente de capa delgada que

En esta técnica se separan las moléculas en función de las diferencias en

Esta técnica ayuda a purificar una molécula en función de su actividad

Las siglas HPLC se refiere a “High-performance liquid chromatography” lo

Este método identifica y cuantifica los componentes que se encuentran

industriales y científicos para la elaboración de productos farmacéuticos o

Básicamente se bombea una mezcla de la muestra en un disolvente a alta

Para su práctica es necesario tener en el laboratorio depósitos múltiples

Se utiliza una bomba para generar un flujo específico, aunque la inyección

a. La solubilidad en alcohol de los pigmentos es, de mayor a menor:

b. ¿Por qué se emplea éter etílico para extraer la clorofila?

 La molécula de la clorofila tiene una compleja estructura, compuesta por

c. ¿Qué pigmentos son los más abundantes?

El pigmento más abundante es la clorofila, la cual da un color verde y

4. Analice sus resultados teniendo en cuenta la información de los puntos 2 y

Analizando los resultados encontramos que hay una partición de las

 La cromatografía en papel no requiere ningún tipo de equipamiento y es un proceso

 Méndez P (2018). Guía componente practico. Bogotá.

 Machado A. (2014), Separación de pigmentos vegetales por

 OCIO RANK S. (2018), ¿Qué es la cromatografía y qué tipos existen?,

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