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Artículo de revisión

reacción en cadena de la polimerasa:

Un molecular
herramienta de diagnóstico en
periodoncia
Rajendran Maheaswari, Jaishree Tukaram Kshirsagar, Nallasivam Lavanya

Departamento Abstracto:
de Esta revisión describe los principios de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) y su aplicación
Periodoncia, como herramienta de diagnóstico en periodoncia. El MEDLINE y PubMed relevante indexan revistas se
Tamil Gobierno Nadu buscaron manualmente y electrónicamente escribiendo PCR, las aplicaciones de PCR, PCR en
Colegio Dental y el periodoncia, estudios de polimorfismo en periodontitis, y técnicas moleculares en periodoncia. Las
Hospital, Chennai, búsquedas se limitan a artículos en idioma Inglés y los artículos que describen proceso de PCR y su
relación con la periodoncia fueron recogidas y utilizadas para preparar un diccionariorevisión. PCR se ha
Tamil Nadu, India
convertido en una herramienta de diagnóstico y de investigación estándar en periodoncia. Varios estudios
revelanque su sensibilidad y especificidad permiten como un método rápido y eficiente de la detección,
identificación y cuantificación de organismo. Different inmune y los marcadores inflamatorios pueden ser
identificados en el nivel de expresión de ARNm, y tambiénla determinación de polimorfismos genéticos,
proporcionando así la visión más profunda de los mecanismos subyacentes a la enfermedad periodontal.
palabras clave:
Aplicaciones de la reacción en cadena de la polimerasa, la identificación de organismos
periodontales, las técnicas moleculares en
periodoncia, la expresión de ARNm, reacción en cadena de la polimerasa

mail: drmaheaswari @
yahoo.com
INTRODUCCIÓN
Acceder a este artículo en Sumisión: 30-09-2015
línea diagnostico clinico de la enfermedad
Sitio web:
www.jisponline.com
U Aceptado: 16-12-2015
periodontal se realiza mediante la medición
de la pérdida de
DOI:
10.4103 / 0972-124X.176391 N fijación del tejido conectivo en la superficie de
la raíz (pérdida de inserción clínica) y la pérdida
Código de Respuesta de hueso alveolar (pérdida ósea radiográfica).
Rápida:
A [1] Sin embargo, el diagnóstico clínico no
indica la causa, patogenia, evolución clínica, el
progreso y el pronóstico de la enfermedad.
Además de la exploración convencional,
diversos métodos de diagnóstico desempeñan un
papel vital en la confirmación del diagnóstico
clínico.

Los métodos de cultivo tradicionales tienen

ventajas inherentes, pero tienen inconvenientes,
incluyendo la necesidad de preservar la vitalidad
bacteriana, la incapacidad para detectar un
número bajo de microorganismos con un
promedio de límite de detección 103-104
células bacterianas, intensidad de trabajo,
necesidad de personal con experiencia, muestreo
estricta, condiciones de transporte, y un período
Dirección prolongado de tiempo antes de los resultados
para la [2]. Otros exámenes microbiológicos tales como
correspondencia microscopía de campo oscuro no son capaces de
:
detectar el patógeno periodontal no móviles, y
Dr. Rajendran Maheaswari,
No. 5, Poes 4º los métodos de inmunodiagnóstico como
Calle, Teynampet, citometría de flujo, ensayo de
Madrás - 600 018, inmunofluorescencia, etc., y ensayos
Tamil Nadu, India. E- enzimáticos pueden conducir a resultados falsos
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positivos y reacciones
cruzadas. [3] variaciones en las secuencias de ADN
homólogas; era laborioso, lento, caro y se
Las técnicas de necesita gran muestra. La sonda de ácido
biología molecular nucleico, una molécula de ácido nucleico
analizan ácido sintetizada y etiquetada para la detección de
desoxirribonucleico un organismo específico artificialmente tiene
(ADN), ácido la limitación de la reactividad cruzada. [3] La
ribonucleico (ARN) y hibridación se refiere al apareamiento de
proteínas. Restricción hebras complementarias de ADN para
de longitud de los producir el ácido nucleico de doble cadena y la
fragmentos tecnología de hibridación DNA-DNA de
polimórficos (RFLP) tablero de ajedrez utilizado para la
fue el perfilado de la investigación epidemiológica, y los estudios
DNA técnica genética ecológicos requerir equipos de laboratorio
que explotaba sofisticados y experiencia. [3] reacción en
cadena de la polimerasa (PCR) supera las
limitaciones anteriores y es capaz de detectar
incluso una copia del dianas de ADN buscado
a partir de muestras microbiológicas clínicos.
[4]

La microbiota subgingival en pacientes con

periodontitis es complejo y la diferencia en la
composición de la placa sirve como la base
para la aplicación clínica de técnicas
microbiológicas en el control de diagnóstico y
la terapia

Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los

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Cómo citar este artículo: Maheaswari R,

Kshirsagar JT, reacción en cadena de la
polimerasa Lavanya N.: Una herramienta de
diagnóstico molecular en periodoncia. J Indian
Soc Periodontol 2016; 20: 128-35.
128 © 2016 Sociedad India de Periodontología | Publicado por Wolters Kluwer - Medknow
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Maheaswari, et al .: PCR: Una herramienta de diagnóstico molecular

en periodoncia PRINCIPIOS DE
LA POLIMERASA
de formas progresivas y refractarios de periodontitis. [5] El REACCIÓN EN CADENA
desarrollo de la PCR ha generado grandes beneficios en el
análisis genético para el estudio de la expresión génica y el PCR, una técnica in vitro, permite la amplificación y el
diagnóstico de enfermedades genéticas. El análisis genético estudio de
usando PCR para la identificación de la susceptibilidad de un genes y sus transcritos de ARN obtenidos a partir de
individuo a la periodontitis ayudará en la determinación del diversos tejidos
tipo y la frecuencia del tratamiento. Los estudios basados en
PCR para la determinación de la expresión de ARNm de
diversos marcadores inmunes e inflamatorias son útiles en la
comprensión de la patogénesis de la periodontitis.

Las bases de datos MEDLINE y PubMed Se realizaron

búsquedas manualmente y electrónicamente en idioma
Inglés por tipificación PCR, las aplicaciones de PCR, PCR
en Periodontics, los estudios de polimorfismo en la
periodontitis, y técnicas moleculares en periodoncia. Fuera
de 248 artículos buscados, 88 artículos que describen proceso
de PCR y su relación con la periodoncia se utilizaron para
preparar una revisión concisa. El objetivo de esta revisión es
discutir los principios, ventajas, aplicaciones y limitaciones
de la PCR en el campo de la periodoncia con sus
perspectivas de futuro.

HISTORIA DE LA POLIMERASA REACCIÓN EN

CADENA

El campo de la genética humana comenzó en cuando el ADN

fue aislado por primera vez por Johann Friedrich Miescher
en 1869. [6] Watson y Crick en 1953 describen la estructura
de doble hélice del ADN. [6] En 1975, la tecnología de
transferencia de Southern se utilizó para el análisis genético.
Su adaptación RFLP fue desarrollado en 1980 por Ray
White. [7]

Una de las técnicas más importantes de revolucionarios la

biología molecular, la PCR, se introdujo por Mullis en el
1983, y ganó el premio Noble de Química en 1993 por su
descubrimiento. Ellos desarrollaron como un procedimiento
rápido y 2 veces sensible que la transferencia de Southern
estándar para la detección de la mutación de células
falciformes, que es la primera aplicación de PCR en el
campo de la medicina. [8] Esta técnica molecular, inventado
hace tres décadas, ha revolucionado diversos campos. En
odontología, ya en 1992, la PCR se usa para identificar el
ADN de tejido de la pulpa del diente humano para uso en
odontología forense. [9]

PCR se utilizó para la identificación de periodontal patógeno

Porphyromonas gingivalis (Pg) en muestras de placa orales
en 1993. [10] Varios derivados de PCR convencionales
incluyendo anidados PCR, multiplex-PCR, la transcriptasa
inversa PCR (RT-PCR), PCR alelo-específico, y PCR
cuantitativa (Q-PCR) o PCR en tiempo real se desarrolló
posteriormente jugar un papel significativo en el campo de la
periodoncia. [11-15]

En 2005, se utilizaron PCRs de composición abierta para

genoma mapeo de todo el espectro de bacterias en la muestra
de placa. [16] Más tarde, la base de datos de Microbiome
oral humana y base de datos central para todo el catálogo las
especies bacterianas encontradas en la cavidad oral fueron
desarrollados. [17] Recientemente, la PCR se utiliza en el
análisis de microarrays de ADN para la determinación
semicuantitativa rápida de alrededor de 10 patógenos
periodontales. [18]
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Maheaswari, et al .: PCR: Una herramienta de diagnóstico molecular
en periodoncia
fuentes, incluyendo sangre periférica, piel, saliva, fluido
crevicular gingival, semen, y el cabello. [19,20] Cada
ensayo requiere la presencia de ADN molde, los cebadores,
nucleótidos, y la ADN polimerasa.
El ADN molde es la secuencia diana conocida que necesita
ser amplificada, y que se extiende de 100 a 1000 pares de
bases de longitud. Los cebadores son secuencias cortas, de
una sola hebra de ácido nucleico (oligonucleótidos)
seleccionado para específicamente hibridan con un ácido
nucleico diana particular. [21] Los pares de cebadores que
contienen adelante y cebador inverso, se utilizan cada 16-20
pares de bases de longitud. [22] ADN polimerasa es la ADN
en replicación enzima clave que enlaza nucleótidos
individuales juntos para formar el producto de la PCR y por
lo tanto para amplificar secuencias diana de ADN.
El ácido nucleico se extrae primero de la muestra clínica por
el calor, químicos o métodos enzimáticos. Una vez extraído,
se añade ácido nucleico diana a la reacción de la mezcla que
contiene cebadores, componentes para la actividad de
polimerasa a optimizar (es decir, tampón, cationes [MgCl2],
sales y desoxinucleótidos) y las enzimas en un tubo de
ensayo o placa de 96 pocillos y luego se coloca en un
ciclador térmico que permite ciclos de amplificación de
ADN repetido que se produzca en los siguientes tres pasos
básicos [Figura 1].
1. ADN desnaturalización - Separación de las cadenas
dobles de ADN en dos hebras individuales se realiza
calentando a 94 ° C
2. recocido primario - A 50-58 ° C, cuando el par de
cebadores se mezcla con el ADN diana desnaturalizado,
recocidos cebador directo a un sitio específico en un
extremo de la secuencia diana de una cadena diana, y los
recocidos cebador inverso a un sitio específico en el
extremo opuesto de la otra hebra diana complementaria
Diario de Sociedad India de Periodontología - Vol 20, No. 2, Mar-Apr 2,016 mil
3. Extensión de la secuencia de ADN cebado - La enzima
ADN polimerasa sintetiza nuevas hebras
complementarias por la extensión de los cebadores a 72 °
C.[22] Taq polimerasa se utiliza comúnmente debido a su
capacidad de funcionar de manera eficiente a
temperaturas elevadas.
Automatizadas termocicladores programables llevan la
mezcla de PCR a través de cada etapa de reacción a la
temperatura precisa y por una duración óptima.
En general, el proceso se repite 30 veces. Al final de 30
ciclos, la mezcla de reacción contiene alrededor de 230
moléculas del producto deseado. [22] Una vez se ha
producido la reacción de amplificación, una variedad de
métodos manuales y automatizados están disponibles para
detectar el producto amplificado conocido como amplicón,
de los cuales el más simple es para identificar el producto
por tamaño después de la migración a través de electroforesis
en un gel de gel o poliacrilamida de agarosa teñido con
bromuro de etidio . Los productos aparecen como una única
coincidencia de banda con el tamaño de la secuencia y emite
fluorescencia amplificada cuando es iluminado por luz
ultravioleta. [21]
TIPOS DE LA POLIMERASA REACCIÓN EN
CADENA
reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa
Es un enfoque en el que se controla la acumulación de
amplicón, ya que es generada por el etiquetado de los
cebadores, sondas de oligonucleótidos, o amplicones con
moléculas capaces de fluorosing. [21] Las sondas
fluorescentes pueden ser aquellos que implican la unión de
un colorante fluorescente no específica a ADN de doble
cadena (por ejemplo, SYBER® Green I) o que se unen
específicamente
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Maheaswari, et al .: PCR: Una herramienta de diagnóstico molecular

en periodoncia

PRINCIPIOS DE PCR

secuencia

Ciclo 1 Target
3'
5'
Plantilla de ADN (de doble cadena)

5' 3'
desnaturalización

Plantilla de ADN (de cadena sencilla)

Los cebadores se unen al ADN

Recocido Adelante Cebador cebador de una sola hebra plantilla
inverso

nueva ADN
ADN polimerasa añade nucleótidos al
Extensión
nueva ADN extremo 3' de cada cebador

Nueva ADN

ADN molde

2Dakota del Norteciclo

produce 8 copias
3rdciclo produce 16 copias
amplificación
exponencial

35º ciclo produce 236 copias

Figura 1: Principio de la reacción en

cadena de la polimerasa

reacción, evitando la
a la diana de interés (por ejemplo, TaqMan®). Estas sondas
producen un cambio en la señal fluorescente tras su
interacción directa con o hibridación con el amplicón que se
mide por el sistema óptico de fluorescencia captura y
software de ordenador capaz de recibir y procesar los datos.
los valores de fluorescencia se registran durante cada ciclo y
representan la cantidad de producto amplificado. [23,24]

reacción en cadena de la polimerasa anidada

Implica el uso secuencial de dos conjuntos de cebadores; el
primer conjunto se utiliza para amplificar una secuencia
diana y el amplicón obtenido se usa entonces como la
secuencia diana para una segunda amplificación usando
cebadores internos a los de la primera amplicón. [21]

reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real

Amplifica una diana de ARN. Se trata de dos pasos, primero
RNA se transcribe inversamente en ADNc utilizando una RT
y luego el cDNA resultante se utiliza como plantillas para la
posterior amplificación por PCR usando cebadores
específicos para uno o más genes.

reacción en cadena de la polimerasa Multiplex

Usos múltiples conjuntos de cebadores dentro de una única
mezcla de PCR para amplicones producto de diferentes
tamaños que son específicos para diferentes secuencias de
ADN. Por lo tanto, tiene la capacidad de búsqueda de
diferentes dianas, organismos o genes utilizando una
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la identificación
Maheaswari, et al .: PCR: Una herramienta bacteriana
de diagnóstico molecular mediante secuenciación de genes
El uso de múltiples recipientes en
deperiodoncia
reacción y minimizar el
16S rRNA. [25]
volumen de la muestra requeridos. [21]
reacción en cadena de la polimerasa de arranque en caliente
reacción en cadena de la polimerasa alelo-específica
Mejora la especificidad y el ADN rendimiento de la técnica
Es una técnica de diagnóstico o de clonación para identificar
de PCR mediante la reducción de la amplificación no
o utilizar polimorfismos de un solo nucleótido (SNP). Se
específica en la configuración inicial etapa de la PCR y la
utiliza cebadores cuyos extremos 3' abarcar el SNP y sólo se
inhibición de la actividad de la polimerasa a temperatura
hibridan con secuencias que coincidan perfectamente, una
ambiente.
sola falta de coincidencia de ser suficiente para prevenir la
hibridación en condiciones apropiadas.
reacción en cadena de la polimerasa Digital
Límites de dilución de los objetivos de la plantilla. Se separa
reacción en cadena de la polimerasa Colonia
muestras de ácido nucleico individuales dentro de un solo
Es una técnica en la cual se toman las muestras para PCR
espécimen en separada
utilizando una pipeta estéril de las colonias bacterianas para

130 Diario de Sociedad India de Periodontología - Vol 20, No. 2, Mar-Apr 2,016
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Maheaswari, et al .: PCR: Una herramienta de diagnóstico molecular

en periodoncia la inmunodeficiencia humana [VIH], virus de la hepatitis B),
regiones o gotitas y cuantifica dianas de ácido nucleico la capacidad para amplificar ARN usando RT-PCR facilita la
iniciales raras, importantes en áreas tales como el cáncer y el prueba de diagnóstico basada en el laboratorio a estos agentes
diagnóstico prenatal. infecciosos en un grado mayor [21]. Identificación de los
criminales ha sido posible mediante el ensayo de PCR en
método de reacción-clonación secuenciación cadena de la forense
polimerasa
Es un tipo de PCR de composición abierta en la que los
genes de ARNr 16S se amplifican directamente de muestras
y amplicones obtenidos son luego clonado y secuenciado
mediante el método tradicional Sanger. [26]

VENTAJAS DE LA POLIMERASA
REACCIÓN EN CADENA

La facilidad de la cuantificación, mayor sensibilidad, análisis

rápido, precisión, reproducibilidad, control de calidad, y
menos contaminación son las principales ventajas de PCR
[27]. También permite la identificación precisa de las cepas
bacterianas con fenotipo divergente. Un gran número de
muestras se puede medir a 1 hora. Como la viabilidad celular
no es un impedimento a la técnica de PCR, es ventajoso en el
estudio de las infecciones estrictamente anaerobias, en la que
podría ocurrir la muerte celular durante el muestreo y el
transporte.

Como PCR permite varios millones de veces amplificaciones

de ADN o ARN, es posible utilizar tan pocas como 1-100
células, y 0,1 l de sangre o de células tomadas por raspado
de la mucosa bucal para el análisis; exhibe excelentes límites
de detección. [28]

Q-PCR tiene la capacidad de cuantificar el número real de

dianas presentes en la muestra clínica. Multiplex PCR tiene
la capacidad de búsqueda de diferentes organismos o genes
en una reacción. [21] Nested PCR facilita la detección de
ADN bacteriano presente en niveles muy bajos. RT-PCR es
un método sensible para la detección de virus y los niveles
de expresión de mRNA. [21,29] Colonia PCR se utilizó para
la identificación de bacterias a partir de colonias bacterianas.

APLICACIONES DE REACCIÓN CADENA

DE LA POLIMERASA

Detección y caracterización de los microorganismos en los

diversos campos de la medicina de la bacteriología,
micología, parasitología, virología, y odontología ha sido
revolucionada por la técnica de PCR [24]. El clínico y el
investigador utilizan la técnica de PCR para la detección de
microorganismos, el diagnóstico de enfermedades, la
clonación y secuenciación de genes, y la realización de
estudios cuantitativos y genómicos de una manera muy
rápida y sensible. PCR tiene una amplia aplicación en varias
áreas, incluyendo el análisis genético, aplicaciones médicas,
y en la investigación.

La capacidad de cuantificar “carga infecciosa” usando Q-

PCR tiene enormes implicaciones para estudiar y
comprender el estado de enfermedad (por ejemplo, SIDA),
pronóstico de ciertas infecciones, y la eficacia de la terapia
antimicrobiana. Genotipado permite el estudio de bacterias
tales como Mycobacterium tuberculosis (Mt). Por lo tanto, la
detección temprana y el tratamiento optimizado son
favorecidas para la salud pública. [30]

Como los virus clínicamente importantes han genomas

compuesto de ARN en lugar de ADN (por ejemplo, virus de
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Maheaswari, et al .: PCR: Una herramienta de diagnóstico molecular
en periodoncia
medicina. Es una prueba sensible para la tipificación de
tejidos y juega un papel esencial en el trasplante de órganos.
[31]
La presencia de mutación de la enfermedad genética se
puede detectar en muestras por PCR. Las mutaciones en
oncogenes y genes supresores de tumores son estudiados
por pruebas basadas en la PCR, y los resultados se pueden
utilizar para personalizar la terapia.
En odontología
PCR juega un papel importante en varios campos de la
odontología. La placa subgingival, saliva, enjuague bucal,
sangre, tejido gingival, y el raspado la mucosa bucal se
utilizan en la PCR para identificar microorganismos,
polimorfismos genéticos, y la expresión génica de ARNm
de diversos mediadores inflamatorios en odontología.
[20,28,32-35] La conocimiento de la ecología de la cavidad
bucal ha sido bien entendido utilizando estudios de PCR
[36].
Los estudios epidemiológicos basan en la microbiología de
enfermedades dentales, polimorfismos genéticos, y su
relación con enfermedades sistémicas pueden establecerse.
caries dentales patógenos pueden ser identificados por PCR,
y también explica el progreso de la caries dental. [37] Los
microorganismos responsables de se pueden identificar
infecciones endodónticas. [38,39]
Los marcadores genéticos para cánceres orales son
identificados por la técnica de PCR, y se utilizan en el
diagnóstico y la predicción del resultado y respuesta al
tratamiento. [40]
Diario de Sociedad India de Periodontología - Vol 20, No. 2, Mar-Apr 2,016 mil
APLICACIONES EN PERIODONTOLOGÍA
Identificación de patógenos microbianos
La técnica de PCR es una técnica más precisa, sensible y
rápido para la detección, identificación y cuantificación de
bacterias periodontales. [5,12,41]
Q-PCR o PCR en tiempo real con cebadores específicos de
especie proporcionan la cuantificación exacta de las especies
microbianas individuales y recuento total de bacterias en
muestras de placa dental. [15] Este método preciso y sensible
sirve como una herramienta útil para estudios sobre la
etiología de las enfermedades periodontales.
Varios putativo perio-patógenos tales como Pg, Aggregatibacter
actinomycetecomitans (Aa), Tannerella forsythia (Tf),
Prevotella intermedia (Pi), nigrescens Prevotella, Parvimonas
micra (Pm), Eubacterias, Campylobacter rectus (Cr),
Capnocytophaga sputigena, Capnocytophaga ochracea y
Capnocytophaga gingivalis se han detectado en muestras de placa
subgingival.[15,20,42-45] Pg y AA mostraron recuentos similares en
pacientes con periodontitis agresiva y controles, pero sólo Aa se
encontró que estar relacionado con la enfermedad. [46]
También se utiliza para identificar Mt en agrandamiento
gingival y osteomielitis.[47,48] Ciertas nuevas especies
microbianas como oralis Methanobrevibacter
identificados en las enfermedades periodontales utilizando
PCR aún no han sido cultivadas. [45] Recientemente, la PCR de
composición abierta / técnicas de secuenciación se utilizan
para detectar bacterias Gram-positivas organismos
Peptostreptococcus y Filifactor, géneros Megasphaera y
Desulfobulbus, especies o filotipos de Atopobium, Campylobacter,
Catonella, Deferribacteres, Dialister, Eubacterium, Selenomonas,
Streptococcus, Tannerella, y Treponema, que son elevados en la
enfermedad periodontal.[dieciséis]
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Maheaswari, et al .: PCR: Una herramienta de diagnóstico molecular

en periodoncia En medio de un ambiente oral desregulado, los factores
PCR se utiliza para fines de investigación para determinar la desencadenantes de biopelícula subgingivales la liberación de
prevalencia de virus herpes simplex, virus del papiloma citoquinas pro-inflamatorias y enzimas derivadas del huésped
humano, VIH, citomegalovirus humanos, y el virus de que causan la descomposición del tejido. PCR se ha
Epstein-Barr de tipo I y II (1 y 2) en el fluido crevicular convertido en el soporte principal en la detección de proteínas
gingival de los individuos con diversas formas de en
periodontal enfermedad. [13,49,50] se encontró usando
caliente comenzar PCR que el virus herpes puede causar
daño directo o poner en peligro la resistencia del periodonto
para permitir el crecimiento excesivo subgingival de
bacterias patógenas en periodontitis agresiva. [51]

Los niveles microbianos pueden ser evaluados después de

varias modalidades de tratamiento y por lo tanto, puede ser
un indicador de la eficacia del tratamiento en la periodontitis
crónica y agresiva. [52-56] La influencia negativa de
consumo de alcohol en los parámetros microbiológicos
fueron estudiados por PCR en tiempo real. [57]

También se utiliza para estudiar la asociación de las

enfermedades sistémicas tales como la enfermedad
coronaria, complicaciones del embarazo, diabetes,
enfermedad renal crónica, osteoporosis, y enfermedad
respiratoria con periodontitis mediante la identificación de
los niveles de patógenos periodontales en varias muestras de
tejido tales como la placa subgingival, trombos ,
endarterectomía carotídea, la placa coronaria aterosclerótica,
válvulas aórticas, placenta, tejido de seno maxilar / muestras
de lavado. [34,50,58-65]

Las pruebas de diagnóstico tales como la Prueba

MicroDent®, kits ParoCheck®, prueba MyPerioPath® y
DNA® oral usando esquema de PCR múltiple están
disponibles comercialmente para evaluar la microbiota en
muestras de placa subgingival y dan información crucial para
una estrategia de prevención para los pacientes sanos y
planes de tratamiento para los pacientes “en riesgo”. [17]

reacción en cadena de la polimerasa como herramienta

de diagnóstico en la periimplantitis
patógenos periodontales Aa, Pg, Pi, Td, y Tf se han detectado
en los focos de periimplantitis utilizando PCR.[66] Los
organismos de hongos especies como Candida fueron
identificados en la periimplantitis y sitios de implante sanos,
y ellos co-colonizados con Pm y Tf.[67] Los filos inculto
Chloroflexi, synergistetes, Tenericutes y la organismos Pm,
Pseudoramibacter alactolyticus, estomatitis Peptostreptococcus, y
también se identificaron Solobacterium moorei asociado con
periimplantitis.[68]

Esta técnica también juega un papel en la detección de

bacterias que causan periimplantitis antes de la colocación
del implante para evitar el riesgo de periimplantitis. [69]

Q-PCR ha detectado patógenos oportunistas tales como E.

faecalis en el entorno peri-implante de implantes enfermas
que sugieren la eliminación de la prótesis y la
descontaminación de rutina de superficie del implante y la
conexión del pilar del implante. [70]

El éxito de los implantes dentales se asocia principalmente

con un TGP negativo (prueba genética para periodontitis)
que determina los polimorfismos de -. 889 gen IL1A y +
3,953 gen IL-1B utilizando PCR mientras que no éxito
estaba relacionado con un resultado positivo [71]

Inmune y los marcadores inflamatorios identificación

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Maheaswari, et al .: PCR: Una herramienta de diagnóstico molecular
en periodoncia
Periodontics, con especial importancia a los antígenos
microbianos, proteínas de matriz extracelular, y detección
de citoquinas. La expresión genética de los factores de
virulencia Pg se estudió usando Q-PCR. [72] la expresión
del ARNm de la molécula de adhesión (ICAM-1) en
periodontopathogen Eikenella corrodens (Ec) infecta las
células epiteliales se determinaron usando PCR en tiempo
real, y se encontró a aumentar después de la exposición a la
adhesión N-acetil-D-galactosamina lectina de Ec. [ 73]
El uso de la expresión génica PCR semicuantitativa de
activador del receptor de NF-KB ligando (RANKL) para
osteoprotegerina se encontró relación (OPG) que
aumentarse en periodontitis. [74] se encontró usando la
expresión Q-PCR de metaloproteinasas de la matriz y
RANKL que se correlaciona con la expresión de la
interleucina-1 , TNF- , IF-gamma, reacción inflamatoria
intensa y la pérdida ósea alveolar, pero IL-4, IL-10, TIMPs,
y expresión de OPG redujo la infiltración celular y la
pérdida ósea alveolar. [33]
Fumar estaba asociado con la expresión de ARNm de IL-1












estudios de polimorfismo genético
132
mil
la susceptibilidad del individuo a la periodontitis se atribuye
a factores genéticos [78]. La correlación de polimorfismos
genéticos conocidos con fenotipos para ciertos grupos de
pacientes actualmente parece proporcionar la aplicación más
prometedores de los determinantes genéticos en el
tratamiento de periodontitis.
Los polimorfismos genéticos afectan a la enfermedad
periodontal con un número de SNPs que se producen en el
gen que codifica para citoquinas, receptores, y las células
inmunes se asocia con la gravedad y la susceptibilidad de la
periodontitis. Se utilizó PCR para identificar un gen
modificado en el cromosoma 11 que causó una disminución
en la actividad de la catepsina C y dio como resultado el
síndrome de Papillon-Lefevre. [79]
PCR se ha utilizado en la vinculación y la segregación
análisis de estudios genéticos en la enfermedad periodontal.
Varios estudios se han llevado a cabo utilizando PCR
explorar el papel de la IL-1 polimorfismo del gen como un
factor de gravedad de las enfermedades periodontales en
diversos población y los grupos étnicos. [80-82]
Se encontró TLR-4 polimorfismo del gen de estar asociado
con periodontitis crónica, mientras TLR-9 no se asoció. [83-
86] polimorfismos en Fc gen del receptor gamma y MPO-
463G / A gen se estudiaron usando alelo-específica y RT-
PCR , respectivamente, que se han encontrado estar
relacionado con periodontitis agresiva. [87,88] Varios otros
polimorfismos, incluyendo IL-10 gen, quimioquinas ligando
(CCL5 y CCR5) de genes, y el gen OPG se han asociado con
periodontitis utilizando la amplificación por PCR. [89 -92]
Limitaciones de la reacción en cadena de la polimerasa
El enorme coste de la técnica de PCR muy precisa es un
impedimento a su amplia aplicación en diagnóstico de rutina
Diario de Sociedad India de Periodontología - Vol 20, No. 2, Mar-Apr 2,016
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cebadores a las secuencias similares de la plantilla de ADN.
La ADN polimerasa utilizada en la reacción PCR es
propenso a errores que pueden conducir a mutaciones en el
fragmento generado.

En el cuantitativa en tiempo real PCR, la señal fluorescente

no puede discriminar específica frente a productos
amplificados no específicos. En la PCR multiplex mezcla de
diferentes cebadores puede causar alguna interferencia en la
amplificación. [21] Un alto número de resultados falsos
negativos se ha informado cuando se usó la PCR anidada
para la identificación de ADN de los patógenos
periodontales, y también es capaz de contaminar otros viales
de reacción. [21,36] El método basado en PCR 16 S rRNA
no es capaz de distinguir entre y también especies altamente
recombinantes estrechamente relacionados, por ejemplo,
Neisseria y cierta Streptococci.

Perspectivas futuras
Identificación de patógenos microbianos asociados con la
etiología de la periodontitis es el primer paso hacia el
desarrollo de enfoque terapéutico periodontal eficaz. PCR
pronto puede convertirse en el método de detección ideal
para patógenos periodontales, debido a su capacidad
inherente de sensibilidad y especificidad. Prueba para las
enfermedades de la cavidad oral probable puede combinar
heredado polimorfismos con perfiles microbianas orales y
podría incluir también ensayos de la expresión génica y los
datos proteómicos medidos en la saliva o de otros tejidos
orales.

CONCLUSIÓN

La PCR es un revolucionario de las cuencas hidrográficas en

los campos científicos y médicos y ahora se ha convertido en
una herramienta de diagnóstico e investigación estándar en la
periodoncia. La comprensión de la patogénesis implicados en
la aparición, progresión y resolución de las enfermedades
periodontales podrían en gran medida ayuda en el
establecimiento de las maneras eficaces para la prevención y
el tratamiento además de reducir el factor de riesgo de
enfermedades sistémicas relevantes. El futuro de la PCR es
prometedor en la producción de penetración mayor a partir
de la identificación de patógenos periodontales a enfoque
terapéutico eficaz.

Reconocimiento
Los autores reconocen la ayuda inmensa recibido de
los autores cuyos artículos se citan y se incluye en
referencias de este manuscrito. Los autores también
agradecen a los autores / editores / editores de todos los
artículos, revistas y libros de donde la literatura para este
artículo ha sido revisado y discutido.

El apoyo financiero y patrocinio

Nulo.

Conflictos de interés
No hay conflictos de interés.

Referencias
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Maheaswari, et al .: PCR: Una herramienta de diagnóstico molecular

en periodoncia

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