Unidad 3: REPLICACION

Replicación del DNA

2011

Qué es la replicación?
Es el proceso mediante el cual a partir de
una molécula de DNA progenitora se
sintetiza un nueva, originándose dos
moléculas de DNA hijas de secuencia
idéntica a la del DNA original.

Aspecto esencial del metabolismo del DNA

•  Recombinación o reordenamiento de la información

•  Mutación o alteración de la secuencia
•  Reparación de las alteraciones o daños del DNA

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La replicación se produce en forma coordinada con el ciclo
celular

Concretamente en la Fase S

® Mitosis (2 células hijas)

® Meiosis (4 células)

®  El inicio de la replicación del DNA obliga a la célula a dividirse

®  El final de la replicación constituye posiblemente una señal para la división
®  La replicación se lleva a cabo sin la necesidad de una separación completa de
la cadena progenitora

Ensamblaje del complejo de pre-replicación

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 Características de la Replicación del DNA

® Es semiconservativa, al final cada molécula de DNA

presenta una hebra original y una hebra nueva.
® Es bidireccional, a partir de un punto dado, la duplicación
progresa en dos direcciones.
® La replicación avanza adicionando mononucleótidos en
dirección 5’ → 3’
® Es semidiscontinua (hebra guía y hebra atrasada)
® La replicación comienza en un sitio específico de la cadena
de DNA denominado origen de replicación.

Posibles modelos de replicación del DNA

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 Meselson y Stahl s (1958)

Características de la Replicación del DNA

1) Es semiconservativa, al final cada molécula de DNA presenta una
hebra original y una hebra nueva.

2) Es bidireccional, a partir de un punto dado, la duplicación progresa en

dos direcciones.

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Características de la Replicación del DNA
3) La replicación avanza adicionando mononucleótidos en
dirección 5' → 3'

4) Es semidiscontinua

5) La replicación comienza en un sitio específico de la cadena de DNA

denominado origen de replicación

Bidireccionalidad del proceso

 Lareplicación de muchos DNAs procede en ambas direcciones a

partir del origen de replicación, se forman dos horquillas de
crecimiento que se mueven en direcciones opuestas

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 Dirección de la síntesis de DNA

La DNA polimerasa I adiciona mononucleótidos en dirección 5’ → 3’

® La DNA polimerasa I cataliza la

formación de un puente fosfodiéster entre
el 3 -OH de la desoxirribosa y el fosfato
5 del dNTP.

® La energía para esta reacción es

derivada de la liberación de dos de los
tres fosfatos.

® La DNA polimerasa I encuentra el

dNTP complementario correcto .

® Dirección de síntesis es de 5 a 3

Mecanismo de reacción

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 Replicación semidiscontinua

® Síntesis de DNA es de 5ʹ′ a 3ʹ′

® Sin embargo, la hebra de DNA es antiparalela
® La replicación es continua en la hebra guía y discontinua en
la otra hebra (hebra retrasada)

La replicación comienza en una región específica del

DNA
Eucariontes: inicio multifocal Procariontes: inicio monofocal

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 Eucariontes: múltiples orígenes de replicación

Requerimientos de la reacción de síntesis de DNA

® Cebador: La síntesis no puede comenzarse a partir de dos

nucleótidos sino que requiere un fragmento iniciador
denominado cebador que aporte un grupo 3’-OH libre.
® Sustratos: dNTPs (dATP, dCTP, dGTP, dTPP)
® Cofactores: Mn2+ (in vitro), Mg2+ (in vivo)
® Molde o plantilla: hebra de DNA

Descubrimiento DNA polimerasa

1959: Arthur Kornberg y Severo Ochoa

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 Enzimología de la Replicación

®  DNA polimerasa: Adiciona dNTPs para el crecimiento de la cadena

y participa en la replicación y reparación del DNA
®  Topoisomerasas: Rompe los enlaces fosfodiéster relajando el
superenrrollamiento del DNA
®  DNA Helicasa: Rompe los puentes de hidrógeno entre las pares de
bases, separando las hebras de DNA para que cada una actúe como
molde
®  RNA Primasa: Sintetiza el RNA cebador usando como molde una
hebra del DNA
®  Proteína de unión a hebra simple (SSB): Se une al DNA y
mantiene las hebras separadas
®  Nucleasas: rompen una de las hélices, dando lugar a un origen de
replicación, reparan lesiones del DNA
®  DNA Ligasa: unen fragmentos de DNA adyacentes a través de
enlaces fosfodiester.

DNA polimerasa procariótica

®  DNA pol I, DNA pol II y DNA pol III

®  Las tres coexisten en E. coli
®  Además de su actividad polimerasa
presentan actividades exonucleasas
-  Exonucleasa 3’ 5’ hidroliza el
nucleótido situado en el extremo
3’ (actividad correctora de pruebas)
-  Exonucleasa 5’ 3’ permite hidrolizar
DNA o RNA a partir del extremo
5’ (actividad de reparación)
®  Los centros activos polimerasa y
exonucleasa son diferentes

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 DNA polimerasa III

Actividad polimerasa y exonucleasa

"  Lee la cadena molde y sintetiza la cadena

complementaria.
"  Cataliza la formación de Puentes de
Hidrógeno entre cada nuevo nucleótido y
los nucleótidos de la cadena molde.

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RNA
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DNA Polymerase Primer
Nucleotide

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 DNA polimerasa eucariontes

® DNA pol α: Síntesis y elongación de un RNA cebador

® DNA pol δ y ε: Elongación de ambas hebras (3’ exonucleasa)
® DNA pol β: Reparación de errores
® DNA pol γ: Síntesis DNA mitocondrial (3’ exonucleasa)
Al parecen carecen de actividad 5’ exonucleasa

DNA Primasa

Síntesis de RNA cebador y es necesaria

para la iniciación de cada fragmento de
Okazaki

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 DNA Ligasa
Sella el espacio entre los fragmentos de Okazaki mediante un
enlace fosfodiester

Etapas en el Proceso de Replicación

® Iniciación
-Orígenes de replicación
-Proteínas de iniciación
-Conexión entre iniciación y elongación

® Elongación
-Asimetría de la replicación en ambas hebras
-Mecanismo de elongación
-Maduración de los fragmentos de Okasaki

® Terminación
-Final de la Elongación
-Replicación de los telómeros

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 Iniciación

® Intervienen un grupo de enzimas y proteínas, cuyo conjunto se

denomina replisoma
® Apertura de la doble hélice en el origen de replicación
-Helicasas, facilitan en desenrrollamiento
-Girasas y topoisomerasas, eliminan la tensión
-Proteínas SSBP, mantienen las hebras separadas.
® Creación de dos horquillas de replicación
® Síntesis de los cebadores

Iniciación

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Organización en la horquilla de replicación

Organización en la horquilla de replicación

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 Elongación de la cadena

® Avance de una de las horquillas de replicación

® La síntesis de la hebra conductora es simultánea a
la síntesis discontinua de la hebra retardada, en
fragmentos de Okasaki
® En la hebra conductora se sintetiza un único
cebador como punto de partida (extremo 5 ) DNA pol α y
® En la hebra retardada se esta sintetizando el DNA pol δ y ε
primer fragmento de Okasaki a partir del RNA
cebador
® Gracias a que la hebra retardada forma un bucle,
la síntesis puede realizarse en dirección 5 a 3 a
la vez que continua la horquilla

Elongación de la cadena

§  Actúan las ADN polimerasas para sintetizar las nuevas hebras en
sentido 5´-3´
§  Intervienen las ADN polimeras I y III, que se encargan de la
replicación y corrección de errores.
§  Actúa la ADN polimerasa II, corrigiendo daños causados por agentes
físicos.
§  La cadena 3´-5´ es leída por la ADN polimerasa III sin ningún tipo de
problemas. La cadena 5´-3´ no puede ser leída directamente, esto se
soluciona leyendo los fragmentos de Okazaki que crecen en el sentido
5´-3´, los cuales se unirán mas tarde.
§  La ADN polimerasa III es incapaz de iniciar la síntesis por sí sola,
para esto necesita un cebador (ARN) que es sintetizado por una ARN
polimerasa (=primasa). Este cebador es eliminado posteriormente.

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 Elongación de la cadena

Elongación de la cadena (asimetría)

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Elongación de la cadena

Fragmentos de Okasaki

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 Terminación

® Finalización de la elongación de la cadena por la DNA

polimerasa cuando las dos horquillas de replicación de
cada replicón alcancen a las horquillas de los replicones
adyacentes
® Se realiza el relleno de espacios y la unión de los dos
tramos de la nueva hebra
-ADN polimerasas I que rellenan correctamente el
espacio.
-ADN ligasas que unen los extremos corregidos
®  La enzima principal es la ADN polimerasa III, que
corrige todos los errores cometidos en la replicación o
duplicación

Terminación

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 Corrección de errores

Replicación de telómeros
No puede llevarse a cabo mediante la
elongación de la DNA polimerasa

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 Partes de un cromosoma humano
(Contiene 1 o mas genes)

Estabilidad y actividad
del cromosoma

(Aseguran la segregación correcta de

los cromosomas)

(Podrían constituir el origen de replicación)

Qué son los Telómeros?

Son secuencias repetitivas de DNA no codificante localizadas en

los extremos de los cromosomas eucarióticos

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 ® Los telómeros son estructuras
dinámicas

A) Elongación de los telómeros

B) El largo de los telómeros no permanece
constante durante el desarrollo

Problema: Acortamiento de las regiones teloméricas

® Este acortamiento, calculado entre 50-200 pb por cada

división celular, supone la disminución progresiva del largo
del cromosoma a lo largo de las divisiones celulares con el
consiguiente problema para la perpetuación del mensaje
genético.

® Este problema se puede resolver en la célula gracias a la

actuación durante la fase S del ciclo celular de un nuevo tipo
de enzima conocida como Telomerasa que alarga los
telómeros, compensando la pérdida anterior.

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 La Telomerasa
®  Contiene proteínas y RNA complementario a la secuencia
repetida del telómero, se une al extremo del telómero y
cataliza la adición de nuevos repetidos.

La Telomerasa

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 Quienes tienen telomerasa activa ?

® Eucariotas unicelulares
® Células germinales
® Pocas células somáticas
® Casi todas las células tumorales

Síntesis de DNA telomérico por la telomerasa

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Síntesis de DNA telomérico por la telomerasa

Replicación del DNA eucariótico

Semejanzas con Procariontes

® Semiconservativa
® Bidireccional
® Semidiscontinua
® Mecanismo general

Diferencias con Procariontes

® Velocidad menor
® Múltiples orígenes
® Rondas no solapadas
® Fragmentos de Okazaki mas cortos
® Control mas complejo

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 Diferencias entre los modelos

Carácter Replicación del Replicación del Replicación del

genoma nuclear en genoma genoma
eucariontes mitocondrial de procariótico
eucariontes
Semiconservativa Sí Sí Sí

Simultánea en Sí No Sí
ambas hebras
Secuencial Sí Sí Sí

Bidireccional Sí No Sí

Origen Múltiples Dos, uno para cada Único (monofocal)

(multifocal) hebra (bifocal)
Semidiscontinua Sí No (continua en Sí
ambas hebras)

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