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PERMcABlLlTi MEMBRANAIRE

ET R&ISTA CE AUX ANTIBIOTIQUES


CHEZ LE BACTiRlES A GRAM NiGATIF
Jean-Marie Pages a,*, Eric Garnotel b

RBsum6 1,
--~
Un des facteurs cl&s intervenant dans I’activit6 antibactkienne des
hez les bactkies B Gram nbgatif, i’enveloppe comprend deux
antibiotiques est la concentration intracellulaire atteinte sur la cible.
C membranes, la membrane externe et la membrane cytoplasmique
Chez les batteries g Gram nbgatif, I’enveloppe comprend la mem-
ou interne (figure 7). Elles constituent a la fois une barri&e de pro-
brane externe et la membrane cytoplasmique ; la permkabilit6 de tection contre les agents toxiques presents dans le milieu, et une struc-
ces deux structures joue un r6le majeur dans la sensibilitk Elle ture complexe qui contient divers mkanismes protbiques assurant le
peut en effet moduler la diffusion (passive) de I’antibiotique lors de transport d’&ments indispensables B la survie et & la croissance bac-
son entree, et reguler son expulsion (active). Les porines sit&es t&ienne. Cactivitb des diverses familles d’antibiotiques est fortement
dans la membrane externe et les pompes d’efflux qui forment Ides dependante de ces mkanismes de transport membranaire, puisqu’ils
interviennent en modulant la concentration intracellulaire de la molk-
complexes protkiques intra- et intermembranaires sont parmi les
cule antibactkienne. Avec l’emergence d’une rksistance croissante
voies principales de ce transport. Les Bv6nements gknetiques et
aux antibiotiques [19] et la disskmination de souches MDR (muitidrug
biochimiques qui conkBlent I’expression fonctionnelle de ces divers
resistance, resistantes a plusieurs types d’antibiotiques), la connais-
canaux membranaires sont des questions importantes de la physio- sance des mkcanismes qui sont impliqu6.s dans la physiologie mem-
logie bactbrienne ; plusieurs de ces mecanismes cellulaires sont branaire est devenue un enjeu crucial. La caractkisation des bases
impliquk en clinique, dans la manifestation et le niveau de r&is- mokulaires, gknktiques, biochimiques et structurales des systbmes
tance aux antibiotiques. de transport membranaire associk B ces mkcanismes de ksistance
est maintenant indispensable. Ces connaissances permettront :
Bact&ie Gram nhgatif - rksistance aux antibiotiques -
- d’blaborer de nouvelles m&hodes de diagnostic et d’identification
porines - pompe tl’offlux.
des mkcanismes de resistance ;
- d’entreprendre la recherche d’alternatives thkapeutiques face aux
Summary
r&istances.
Intracellular concentration of active antibiotic molecules reaching the
target is a key factor for the expression of antimicrobial activity. The
envelope of gra,m-negative bacteria includes the outer membrane
and the cytoplasmic (inner) membrane ; the permeability of both
structures plays a major role in bacterial susceptibility to antibiotics.
The permeabili(v can modulate antibiotic entry by regulating passive 2,’ L Vembrane exterre et ~3c~‘i-w
diffusion process and can also control active transport (expulsion)
La membrane externe des bactkies & Gram nkgatif (figure 1) est
of the antibiotic. The outer membrane porins and the effux pumps
constitu6e de phospholipides, de lipopolysaccharide (LPS) et de pro-
that form intra- and intermembrane complexes are the main mecha-
t6ines [33]. Elle protege la bacterie contre des agressions physiques
nisms involved in drug transport. Genetic and biochemical events telles qu’un choc mkanique ou une variation de tempkrature, chi-
that control the functional expression of these various membrane miques comme les sels biliaires, les acides ou les antibiotiques, et bio-
channels have large consequences on the bacterial physiology ; logiques telles que les dbfensines, les bactkiocines ou les anticorps.
in clinical practice, many of these cellular mechanisms are involved La membrane externe, avec le LPS et les phospholipides, est ainsi le
in the expression and /evei of antibiotic resistance. premier obstacle aux mokules hydrophiles chargbes devant pi?&-
trer la bact&ie pour la d&ruire. De la mBme mankre, la densit des
Gram-negative bacteria - antibiotic resistance - porins - sucres et des chaines latitrales du LPS organise un filtre efficace pour
efflux pump. les autres mokules. Plusieurs revues documentees dkrivent le rBle
de ces structures membranaires [l, 12, 31, 341.
a EA2197-Enveloppe bact&ienne, perm&abiiit& et antibiotiques Chez les bactkies B Gram nkgatif, une classe de protbines mem-
Facult6 de m6decine
branaires particuli&es, les porines, organise des canaux membranaires
27, bd Jean-Moulin
13385 Marseille cedex 05 capables d’assurer la p&&ration des nutriments. Ces systkmes de
b Service de biologie transport passif (qui ne nkessite pas une source d’bnergie) consti-
HBpital d’lnstruction des Armees Laveran tuent une grande famille de protbines de la membrane externe : OmpF.
13998 Marseille Armkes
OmpC, OmpD, PhoE, LamB, OmpA, OmpK36 et Omp36, dkrites
??Correspondance chez Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter aerogenes.
Jean-Marie.Pages@medecine.univ-mrs.fr
Salmonella typhimurium [I 2, 17,34,42, 431. Cette superfamille des
article recu et accept6 se 26 mars 2003. porines prbsente une certaine conservation dans leur sequence pro-
tbique, et notamment pour les regions intramembranaires I> 5, 441.
0 Elsevier, Paris.

Revue Francake des Laboratoires. aw 2003, N” 352 57


Rksistance aux antibiotiques : aspects techniques

MILIEU EXTRACELLULAIRE

ME

PE

Ml

CYTOPLASME
MI : membrane interne ; PE : espace pkplasmique ; ME : membrane externe ; ipp : lipoprot&x ; LPS : lipcpolysaccharide ; PL : phospholipides ; PG :
peptldoglycane ; OmpF : porine OmpF ; OmpA : protkine OmpA ; P : proteines ; PLP : prot6ines de liaison aux p6nicillines. MBcanisme d’efflux : pompe,
AcrB ; fusion, AcrA ; canal, TolC.

Les parametres physicochimiques et electrophysiologiques des divers


canaux ont ete determines par differentes methodes : gonflement des
En clinique, les etudes extensives realisees sur divers isolats des genres
liposomes, mesures d’accumulation d’un sub&rat radiomarque ou fluo-
Klebsiella, Enterobacter, Proteus, Pseudomonas ou Serratia, ont ainsi
rescent, bicouches lipidiques (membrane artificielle), ou plus recem-
montre que la chute d’expression des porines, associee a la produc-
ment patch clamp des liposomes [91.
tion d’enzymes, est un element cle dans la resistance aux p-lactamines.
Les travaux realises par differentes equipes utilisant ces diverses
approches sur les porines purifiees ont permis de definir trois types D’un autre c&e, le role des porines dans la sensibilite aux fluoroqui-

de canaux localises dans la membrane externe : nolones a Bte etabli ; par exemple, chez Enterobacter cloacae, le type
de porine produit, F, est associe au niveau de sensibilite a cette classe
- des porines non specifiques, avec OmpF comme representant et
d’antibiotiques [4].
comprenant OmpC, OmpF, OmpD, 0mpK36 et Omp36 ;
Chez Pseudomonas aeruginosa, les etudes realisees sur la poke D
- des porines plus selectives, impliquees dans la diffusion de sucres
ont clairement montre le lien entre la sensibilite a l’imipeneme et I’ex-
ou de metaux, comme LamB pour le saccharose, ScrY ou FhuA ;
pression de cette proteine [36,46]. Par ailleurs, les dipeptides, substrat
- des proteines qui forment des canaux pour I’entree ou la sortie de
nature1 de ce canal, sont capables de modifier le niveau de sensibilite
diverses molecules, telles que TolC pour I’hemolysine ou les antibio-
a ce carbapeneme [47]. Cexistence de porines qui seraient directement
tiques, OmpA.
associees a la penetration d’une classe particuliere d’antibiotiques nest
Dans le cas des porines non specifiques telles que OmpF ou OmpC,
pas demontree chez les enterobacteries. II semble que les capacites
on peut iilustrer la topologie de la proteine a partir des donnees
de permeabilite membranaire, plus elevees chez E. co/i, K. ,oneumoniae
structurales (figufe 2). Le tonneau en feuillets /3 antiparalleles est for-
et E. aerogenes, et les parametres physicochimiques des pokes pro-
tement ins&e dans la membrane externe et menage un canal
duites chez les batteries n’aient pas amene I’intervention d’une porine
hydrophile avec une region de restriction sit&e a mi-hauteur.
speciale pour le transport de molecules de p-lactamines particulieres,
Cette constriction organise un champ electrostatique avec deux
a I’oppose de ce qui se produit chez F1 aeruginosa.
croissants, l’un de charge negative (venant de la boucle 3) et I’autre
de charge positive (venant des acides amines de la paroi) ; cette Ces donnees sont a rapprocher des resultats acquis dans le domaine
structure du canal definit la selectivite et la conductance (ccporosite )>) de la permeabilite membranaire comparee chez E. co/i, P. aeruginosa
de la porine. et les mycobacteries [20].

Revue Franqaw des Laboraroires, avril 2003 No 352


II est admis que la diminution de synthese des porines joue un role
dans la resistance [12, 31 I ; la mise en place de la barriere enzyma- MILIEU EXTERIENR
tique vient completer efficacement cette impermeabilite, comme cela
est rapporte dans de nombreux cas. La principale question demeure
domaines exposds
le mecanisme de controle responsable de la disparition des porines.
k la surface
Recemment, la regulation rapide et efficace de I’expression de la porine
d’f. aerogenes a ete mantree chez un patient colonise soumis a un
traitement par I’imipenbme ; la prescription du carbapeneme amene
la disparition de la porine et une resistance par impermeabilite, alors
que I’arret du traitement cause sa @apparition chez la bacterie rede-
venue sensible [:2]. Chez plusieurs batteries, la regulation negative fait domaine membranairc
intervenir I’operon mar qwi via micf destabilise I’acide ribonucleique (membrane externe)
messager (ARNm) de la porine [22], et ce conjointement a I’expres-
sion des pornpets d’efflux [l, 61. De meme, le systeme ompR-envZqui
module la synthese des porines OmpC-OmpF chez E. co/i [28, 291,
pourrait aussi jouer un role chez des isolats resistants. Par ailleurs, la
production de la protelne OmpX est associee a une chute d’expres- r&ion p6riplasmique
sion des porines chez E. co/i, E. aerogenes, E. c/oacae et K pneu-
moniae par un mecanisme inconnu ace jour. D’autres processus fai-
sant intervenir des cascades de regulation genetique (via so,&, ramA, ESPACE PERIPLASMIQUE
IHF) sont aussi associes a la diminution de la synthese des porines.
A tote de ces mecanismes lies a la regulation genetique, I’influence
Les dimensions des diffkrentes r&gions du canal, embouchure, restriction, et
de facteurs structuraux associes, comme le role du LPS dans I’as- d6bouch6 dans le p&iplasme sent identiques sur le dessin ; en partie droite sont
semblage membranaire, les chaperons, le transport et I’insertion, peu- illustrks la topologie et les divers domaines de la poke, expos&s B la surface, ink%
gr&s dans la membrane, CJU du c&k pkriplasmique.
vent avoir un effet determinant sur la quantite de porines presente dans
la membrane. Les facteurs externes (pH, osmolarite, source de car-
bone, concentration en 0,) peuvent aussi intervenir en fonction du site
de colonisation ou du traitement, et ainsi moduler la synthese de
represseurs inhibant I’expression de la porine. La description de souches cliniques produisant des porines modifiees
Plusieurs equipes ont decrit des souches cliniques d’enterobacte- donne un nouvel eclairage sur le role des charges portees par I’anti-
ries qui presentent un profil similaire a celui d’un phenotype d’im- biotique et celles appartenant au acides amines situ& dans le pore.
permeabilite avec une synthese normale de porines. La premiere ana- Ces observations et les resultats r&cents etablissent les bases mole-
lyse d’un isolat d’E. aerogenes de ce type en 1998 1231 a permis culaires du transport des antibiotiques, et par la ouvrent des pers-
de caracteriser les bases moleculaires de ce mecanisme de resis- pectives sur le design des nouvelles molecules.
tance original : l’s remplacement d’un residu de glycine par un aspar-
tique dans la boucle 3 irlduit le retrecissement du canal et I’altera-
tion du champ electrostatique [8]. Chez Neisseria gonorrhoeae, des
cas similaires ont ete decrits avec des mutations identiques dans
l’equivalent de la boucle 3 des porines ; la participation d’un sys-
teme d’efflux appara’it necessaire dans ce cas afin de completer la
resistance aux fl-lactamines [48]. Par ailleurs, il est interessant de
3:‘. Ef3ux et rf5sistance
mentionner I’existence d’un residu Tyr supplementaire dans la region
interne du canal de 0mpK37 de K pneumoniae : ce residu tree une Les systemes d’efflux actifs (dependants de l’energie) son: des meca-
restriction de la taille du canal via sa chaine laterale, qui, rejetee dans nismes de transport membranaire presents dans toutes les cellules euca-
le lumen, ralentit la penetration des p-lactamines [lo]. Ainsi, la bac- ryotes ou procaryotes. La fonction essentielle de ces systemes est iden-
terie pourrait exprimer une porine naturellement inefficace pour la tique malgre leur diversite structurale et leur source d’energie ; ils
diffusion de certains antibiotiques. Ces observations posent le pro- s’opposent a I’accumulation intracellulaire de divers substrats : metaux
bleme de la selection possible de souches produisant des porines lourds, antibiotiques, composes aromatiques, detergents, etc. [37].
modifiees sous I’effet d’une pression antibiotique, ceci a c&e de bac-
Canalyse des genomes a montre la large redondance des genes
teries depourwes de porines.
codant pour des systemes d’efflux potentiels ; chez E. co/i, il existe
Avec la resoluti~on de la structure 3D du canal de certaines porines 37 pompes distinctes [35]. Toutefois, il semble qu’un petit nombre seu-
et I’identification d’acldes amines impliques dans le canal [161, de lement de ces systemes soit actif, ou que les conditions de leur expres-
nouvelles notions (champ electrostatique, interaction electrostatique),
sion ne soient pas connues a ce jour. A partir de I’analyse des
ont emerge afin d’elucider les facteurs impliques dans la diffusion
sequences et de I’activite de ces pompes, cinq grandes familles ont
de la molecule clans le canal. La localisation des charges sur la mole-
ete constituees [38, 401 :
cule d’antibiotique devient aussi un parametre cle du dialogue entre
les deux partenaires. Nestorovich et al. [30] font ainsi intervenir les - ABC (AT? binding cassette) transporteurs ;
residus de la zone de constriction de la porine OmpF (Glu, Arg) et - RND (resistance nodulation celi division) ;
les charges de i’ampicilline lors du transit dans le canal. Les etudes - MFS (ma,ior facilitator superfamily) ;
realisees par les memes auteurs ont montre que la presence d’un
- SMR (small multidrug resistance) ;
antibiotique genere des modifications des caracteristiques physi-
cochimiques du pore QmpF. - MATE (multiantimicrobial extrusion).

Revue Fran&e de!; Laboratoires, av7il 2003, N” 352 59


Rksistance aux antibiotiques : aspects techniques

le transfert 8. une proteine de la membrane externe qui lib&e la drogue


& I’ext&ieur. Le dernier composant, TolC ou OprM, d’une taille d’en-
viron 50 kDa, constitue le canal externe ; la structure montre une orga-
nisation en feuillets p organisant un tonneau p homotrim&ique conte-
nant un seul canal pour le transport des solut8s. La figure 7 est une
illustration de la pompe AcrABITolC chez f. co/i.
Un tel mecanisme d’efflux est identifib chez de nombreux isolats cli-
niques et prend en charge des classes d’antibiotiques ayant une
structure aussi diverse que celles des t&acyclines, des quinolones,
des ph&icol&s ; certaines P-lactamines pourraient stre prises en
charge a la surface de la membrane cytoplasmique en fonction de
leur degr& d’hydrophobie [32, 341. Un m&me mbcanisme (parfois la
m&me pompe) assure aussi la resistance B I’egard des polymyxines,
des macrolides et des peptides antimicrobiens. II est ainsi plus facile
de parler des diffbrents transporteurs plutBt que de reelles specifici-
t&s pour le substrat. Diffbrents inhibiteurs sont d&rits [5, 21, 24 1:
carbonylcyanide m-chloroph&ylhydrazone (CCCP), ph6nylala-
nine-arginine-P-naphtylamide, pyridoquinolines. II est interessant de
noter que I’effet de ces inhibiteurs est pl&iotropique, et qu’il restaure
une activitb pour diffbrentes familles d’antibiotiques. Certains
d’entre eux peuvent ainsi inhiber I’activite de differentes pompes
d’efflux, comme cela a Bti! montrb avec le ph&ylalanine-arginine-p-
EFFLUX IMPERMiABILiTE
naphtylamide chez P. aeruginosa [21]. Toutefois, leur utilisation
est contraignante et difficile & mettre en ceuvre en clinique, Btant
Dans la cascade de rkgulation, I’activation est pr&ente en noir avec f, la kpres-
sion est symtjoli&e en grise avec -. Cactivation de la pompe se traduit par I’ex- donnb leur toxicit et les contre-indications, leur durbe de vie et
puision des antibiotiques, et la repression de la synthese des porines am&ne le les faibles informations disponibles actuellement sur leur activitb
phenotype impermeable (pour les p-lactamines, par exemple). (site et affinitb).

Un transport (antiport) de proton a BtB decrit pour RND, MFS et SMR,


La regulation du processus est plus ou moins bien d&rite suivant
d’ion Na+ pour MATE, et une hydrolyse de I’ATP pour ABC ; ces el&
le systeme d’efflux impliqu& ; le mieux document6 actuellement est
ments fournissent I’(?nergie au systi3me.
le rbgulon mar BtudiB intensivement par diverses Bquipes [l , 6, 71.
Corganisation gitnique (figure 3) du locus montre trois genes trans-
crits dans le m&me sens (marR, A, B) et un de sens oppose (marCI.
Ce processus, qui induit une modification de la sensibilite aux anti- Le rbpresseur, code par marR, reprime de mani&re constitutive I’ex-
biotiques, fait intervenir au moins deux criteres : pression de I’op&on en se fixant sur le site opbrateur 0 et bloque
- la mobiiisation d’une pompe et I’organisation d’un canal trans- la transcription. Plusieurs mutations dans le gene marR induisent son
membranaire qui expulse l’agent toxique ; inactivation et amenent I’expression de I’op&on et de la resistance,
par exemple dans le cas des isolats d’E. co/i resistants aux quino-
- le niveau d’expression (constitutif, inductible) des complexes d’ef-
lones [25]. Certains inducteurs tels que le salicylate peuvent dbpla-
flux.
cer la proteine MarR et ainsi libitrer I’op&on du blocage [7, 261. Une
Chez les bactbries & Gram nbgatif qui possedent une enveloppe com- fois la lecture engagee, MarA est synth&is& Ce regulateur (marA)
plexe, on rencontre un systbme tripartite comprenant : est I’activateur du systeme ; il possede le motif h&ice-boucle-hblice
- une protbine ins&&e dans la membrane cytoplasmique qui fournit (helix-turn-helix), caracteristique des protbines affines pour I’acide
I’t?nergie au transport ; d&soxyribonucl&ique (ADN). II induit la transcription de I’op&on mar
- une lipoprot&ne p&iplasmique qui assume la liaison/fusion avec ainsi que d’autres loci dans lesquels des sites mar (mar box) ont Bt&
decrits ; on trouve ainsi les genes de pompes d’efflux (acrAB) ou de
- ie canal protbique dans la membrane externe lib&ant la mol&ule
rbponse au stress (fpr). II faut mentionner qu’il existe une conservation
dans le milieu (figure 7).
Blevee entre divers rbgulateurs decrivant une famille des homologues
Ce systbme B trois composants prothiques, comme par exemple MarA distribues parmi les batteries [l 1, 271.
MexABlOprM de /? aeruginosa ou AcrABlTolC d’E. co/i, montre une
De tr&s fortes homologies ont &t8 d&rites entre les protbines MarA d’E.
organisation complexe 1381. Dans le cas de la pompe AcrAB/TolC 118,
co/i, de S. typhimurium et de K pneumoniae, ce qui reflbte une stra-
291, les riicentes analyses de structure 3D par cristallographie indi-
tbgie conservbe dans le contr6le de I’efflux. Une d’entre elles coordonne,
quent une organisation en trim&e de la pompe AcrAB associ&e B un
via marA, I’expulsion des drogues et inhibe la synthese des porines [I].
homotrim&e TolC generant le canal externe (figure I). Cassociation
Chez E. co/i et E. aerogenes, on observe deux effets de MarA :
fonctionneile des composants se produit par des domaines sp&i-
fiques, tels que les boucles p&iplasmiques chez AcrAB ; la fixation - activation du mbcanisme d’efflux via AcrAB/TolC ;
du substrat transport6 sur des sites donn&s induirait un changement - diminution de la synthese des porines via la production de micF et
de conformation qui libererait I’antibiotique a I’extbrieur en empruntant OmpX.
ie canal TolC.
Cette cascade g&&ique assure une protection par impermBabilit6
Fe transporteur AcrB ou MexB est une proteine de 100-l 30 kDa avec (blactamines ou certaines quinolones) et par expulsion @tracyclines,
une douzaine d’hblices a qui assurent I’insertion dans la membrane quinolones). Cefficaciti! des m&anismes mis en jeu explique la des-
cytoplasmique. La proteine de liaison intermembranaire AcrA ou MexA, cription d’isolats cliniques ayant un large spectre de rbsistance, conci-
une lipoproteine d’enviror; 40 kDa, traverse le p&iplasme et couple liant I’imperm&abilit8, I’efflux ou la presence d’une &phalosporiqase

66 Revue Fran~a~sedes iaboratwes, av:i! 2003. N” 352


’E. co/i Porine + 0,06 0,03 0x1

E. coii Porine - 1 1 0,25/0,5

i E. aerogenes Porine + 1 1 0,5/l

’f. aerogenes Porine - 32164 16164 41%

K. pneumoniae Porine + 0,l 0,25 0,l IO,25

K. pneumoniae Poke - 8 >4 0,511


Mesures de la CMI de quelques p-lactamines chez diverses ent&obact&ries synth&isant ou non les porines.

/ 6%aerogenes 256 512 16


I
’ E. aerogenes + 64 64 075

E. aerogenes / efflux - - 16 32 < 0,25

16 32 512

Mesures de la CMI de divers antibiotiques en pr&sence d’inhibiteurs d’efflux ou dans une souche d’fnterobacteer
aerogenes dGt6e des composants du syst&me d’efflux (AU-TOI).

d&prim8e. En suppkment B ces facteurs, la bactkrie peut p&en-


ter des mutations dans les cibles ou, par acquisition de cassettes d’&-
ments mobiles, synthbtiser diverses enzymes de detoxification (a&-
tylase, transfkrase).

II est intkressant de noter que ia modification de la permbabilitk mem-


branaire reprbsente uln Bvknement important dans la rksistance bac-
tkrienne aux antibiotiques [13, 31 j. Cimpact, soit de la disparition des
porines, soit de I’expression d’un mkcanisme d’efflux, se traduit par une
augmentation notable des CMI mesurees chez des isolats cliniques
(tableaux I, II). Si B cette modification vient s’ajouter un autre m&a-
nisme, production d’enzyme ou si?lection de mutations, une multi&
sistance A des niveaux Blew% est rapidement atteinte.
Le tableau / montre que l’activit8 des fi-lactamines est modifike par bacth-ie d6pourvue de porine
_Is-e--
la disparition des porines chez les ent&obact&ies BtudiBes. __*.._.4--*
Cefficacitb de p&+tration de I’antibiotique est fortement alt&r&e, I I I 1
d’oti une reduction de 10 k 15 fois de la vitesse d’augmentation de 50 100 150 200
la concentration de I’antibiotique dans la bacterie dbpourvue de
porines (figure 4). La quantitb rbduite de P-lactamines internalisbe Temps (secondes)
peut i%re dkgra.dke par les enzymes pitriplasmiques, mais aussi
induire une synthese de c&phalosporinase inductible [231. Par
Cinetique de p&&ration d’une p-lactamine dans une ent6robactkrie synthbti-
ailleurs, la biodlsponibilit& de l’antibiotique sur le site infectieux, sant la porine majoritaire (trait plein) OL! d&pourvue de porine (trait pointilk).
associke A des dkfauts de p&&ration, peut favoriser I’acquisition

Revue Francaise des Laboratows. avrii 2003. N” 352 61


RBsistance aux antibiotiques : aspects techniques

la bacterie contre le choc de pH [41]. Les polyamines peuvent aussi blo-


quer la penetration des antibiotiques [41]. La synthese de ce type
d’agents bloquants peut aussi intervenir in vivo dans un site de coloni-
sation et conferer une resistance efficace, sans alterer les caracteris-
tiques genetiques et biochimiques de la bacterie isolee.

bad&rie sensible En ce qui concerne I’efflux, son role dans la resistance multiple peut etre
mis en evidence, soit en inactivant les genes codant pour les differents
/F composes, soit en utilisant des inhibiteurs de la pompe. Le tableau II
indique les resultats concernant differents isolats cliniques. Les diffe-
rences obtenues entre les CMI sont fortement significatives, et montrent
I’impact des pompes d’efflux dans la resistance concernant des mole-
cules structuralement differentes, comme les fluoroquinolones, le chlo-
ramphenicol et la tetracycline. II faut toutefois mentionner que, dans les
e
, + inhibiteur deux cas, destruction ou inhibition des pompes, on ne restaure pas com-
/ *
I pletement la sensibilite, car les mecanismes additionnels, impermeabi-
I lite, enzymes ou mutation, demeurent actifs.
/ I ___-m-m-._.__I--*-.--
_*_____-------
J La f;gure 5 illustre la concentration intracellulaire d’un antibiotique pris
_.-e.- bact&rie expritnant
_,I- en charge par les pompes d’efflux selon que la bacterie exprime ou non
_.-- un q&me d’efflux
I I I
le mecanisme, ou en presence d’un inhibiteur. La concentration intra-
300 400 600 bacterienne d’antibiotique est regulee par la pompe. Les variations de
la concentration en antibiotique en absence ou en presence d’un inhi-
Temps (secondes) biteur refletent I’activite intrinseque de la pompe, et indiquent I’efficacite
de ce systeme de transport. Nous avons montre que 80 % a 90 Vo des
lnhibiteur et concentration intracellulaire de i’antibiotique. Les concentrations intra- molecules ayant pen&e sont susceptibles d’etre expulses par ce meca-
cellulairesd’un antibiotique correspondent a lasituation obtenue avec une bac-
nisme [23].
tene sensible (trait fin), une bactke exprimant le systeme d’efflux (trait pointill4,
et la m&e bacterie en pr&ence d’un inhibiteur additionnb au temps indique II est interessant de noter que ce mecanisme d’efflux est implique dans
par la flG.che (trait pointilk? Bpais).
la resistance aux sels biliaires [45] ; ce resultat laisse penser que la
flore residente de I’appareil digestif exprime ces pompes a un niveau
significatif, et possede deja une resistance de base pour des mole-
de mecanismes de resistance par transfert genetique (plasmides, cules susceptibles d’etre effluees.
transposons).
La resistance naturelle peut provenir de la juxtaposition de ces modi-
Une etude portant sur 45 souches d’Enterobacter aerogenes pos- fications touchant la permeabilite membranaire. En effet, I’expression
sedant une resistance elevee aux cephalosporines a montre qu’envi- de porines a diffusion reduite ou la synthese de faibles quantites de
ron 40 % d’entre elles presentaient un defaut de porine (disparition porines [3, 141, associee a la presence d’un efflux actif [13, 20, 311
ou chute significative de I’expression) associe a la barriere enzyma- peut induire une baisse de la sensibilite a certains antibiotiques tels
tique 133. que les p-lactamines ou les fluoroquinolones ; ce mecanisme peut, a
Le probleme cl& est la rapidite d’adaptation de la bacterie en presence terme, favoriser l’emergence ou l’acquisition d’autres types de resis-
de I’antibiotique. Apres quelques jours de culture en presence d’imi- tance complementaire par la bacterie.
pet&me, des batteries avec une production tres reduite de porines II est egalement important d’identifier I’impact d’autres elements tels
sont selection&es [2]. Si le stimulus disparait de I’environnement, la que les analgesiques (salicylate) ou les antiseptiques (ammonium qua-
porine est a nouveau synthetisee. Dans ce cas, la regulation ferait inter- ternaire), les transferts genetiques entre batteries partageant la meme
venir micFet peut-etre des regulateurs de type ompR-envZou I’ope- niche ecologique, les modifications du LPS ou les sites de colonisa-
ron mar, voire des elements inconnus ace jour. Cette adaptabilite nest tion, sur I’acquisition et la modulation de la resistance associee a la
pas reservee a Enterobacter et, &ant donne la conservation au niveau permeabilite de I’enveloppe.
genetique des cascades de regulation, les enterobacteries ont cer- Par ailleurs, la gestion de la permeabilite membranaire intervient aussi
tainement la capacite d’apporter le meme type de reponse sous la dans la colonisation in situ (secretions de toxines, d’enzymes ou d’ad-
m&me pression d’antibiotique [22]. La mise au point de sondes gene- hesines). II est ainsi necessaire d’analyser ce grand processus de la
tiques permettra d’evaluer I’existence de represseurs/activateurs dans physiologie bacterienne, afin d’apprehender son influence dans la colo-
ces batteries, et ainsi de suivre I’evolution des isolats en situation cli- nisation et la resistance.
nique sous la pression antibiotique.
Un autre point concerne la production de molecules qui peuvent induire
un encombrement des porines a I’origine d’une impermeabilite. Un Remerciements
exemple recent est la protection apportee par les polyamines. A pH acide, Nous remercions A. Favard pour son aide pendant la redaction du
E colisecrete la cadaverine qui, en obstruant la porine OmpC, protege manuscrit.

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