Métodos de tinción

1. tinción de wirtz conklin

Fundamento

Algunos géneros bacterianos, entre los que destacan Clostridium y Bacillus, producen en su interior
formas de resistencia denominadas endosporas

Las endosporas poseen unas cubiertas exclusivas que las hacen resistentes a los factores ambientales
adversos. Además, estas cubiertas hacen que las esporas aparezcan en el microscopio óptico como
estructuras refringentes y de difícil tinción. La tinción específica de esporas requiere dos colorantes:

1.- Verde malaquita: capaz de teñir las esporas en caliente.

2.- Safranina: colorante de contraste que tiñe las formas vegetativas.

Las endosporas, tras la primera tinción, no perderán el colorante en el lavado con agua, y sí lo harán las
formas vegetativas, que quedarán teñidas con el segundo colorante.

Procedimiento

1.Preparar el frotis bacteriano que se va a teñir.

2.Colocar un trozo de papel de filtro, del tamaño de la extensión, encima de ella.

3.Añadir el colorante verde malaquita para que cubra bien la extensión.

4.Pasar la preparación por encima de la llama del mechero bunssen para fijar el colorante, durante cinco
minutos.

5.Retirar el papel de filtro y lavar con agua destilada para eliminar el exceso de colorante.

6.Teñir la preparación con safranina, para el contraste, durante un minuto.

7.Lavar con agua destilada hasta eliminar el exceso de colorante.

8.Secar la preparación al aire, o entre dos papeles de filtro, teniendo especial cuidado en el segundo
caso para no arrastrar la extensión.

9.Observar al microscopio óptico y anotar los resultados.

Ventajas.- Nos permite observar esporas en bacterias del género Bacillus y Clostridium

Desventaja.- No son fáciles de teñir debido a sus múltiples cubiertas impermeables, el costo que implica
realizar la tinción.

Aplicación

-Sirve para distinguir bacterias del género Bacillus y Clostridium al ser los únicos géneros que producen
esporas, Las esporas se observan verdes, mientras que las formas vegetativas se ven de color rojo

(Rodriguez, 2017)
 2. TINCIÓN DE GRAM

Fundamento

Es la más importante en bacteriología . La Composición de la pared celular de las bacterias, las bacterias
G+ está compuesta por varias capas de peptidoglicanos, las bacterias G- tienen una membrana externa
con un componente estructural único que son los lipopolisacáridos. Las bacterias G+ retienen el cristal-
violeta después de la decoloración y aparecen de color azul intenso (purpura), las bacterias G- no son
capaces de retener el cristal-violeta después de la decoloración y son teñidas de rojo con safranina.

Procedimiento

1.Preparar un frotis bacteriano.

2.Teñir el frotis de cristal violeta durante 1 minuto.

3.Lavar con agua destilada hasta eliminar el exceso de colorante.

4.Cubrir la preparación con lugol durante 1 minuto.

5.Colocar alcohol/acetona 30 s.

6.Teñir la preparación con safranina durante 1 minuto.

7.Lavar con agua destilada hasta eliminar el exceso de colorante.

8.Observar al microscopio e identificar los microorganismos como grampositivos o gramnegativos.

Ventaja.- Esta tinción general se observa como la más simple, menos costosa y más útil entre los
métodos rápidos que se utilizan ampliamente en microbiología para la diferenciación preliminar,
identificación y clasificación de organismos microbiológicos.

Desventaja.- Si bien se usa principalmente para hacer una identificación morfológica preliminar o para
establecer si existe una cantidad considerable de bacterias en las muestras clínicas, este método no
podrá identificar las bacterias a nivel de especie.

Aplicación

Se utiliza para diferenciar las especies de bacterias en dos grupos principales, a saber, las bacterias gram-
positivas y gramnegativas. Las diferencias entre estos grupos de bacterias se consideran importantes para
determinar los tratamientos adecuados para las infecciones.

(Hernández , 2014)

3. Tinción de Moeller (esporas)

Fundamento

Las esporas permiten a las bacterias pasar a un estado latente en condiciones ambientales adversas. Su
principal componente es Ca2+ fijado a ácido dipicolínico. El calor después de la tinción con carbol-fuscina
con permite que rompa la estructura que protege la espora para que así pueda penetrar el colorante. Con
el lavado de agua se retira todo tinte que se adhirió a la bacteria, para después teñirse con azul de
metileno.

Procedimiento

1.-Se prepara el extendido de la muestra

2.Se deja secar y se fija con calor

3.Se tiñe con carbol-fuschina hasta llenar por completo el portaobjetos

4.Pase un mechero por debajo de la placa calentando hasta que vea que se emiten vapores y sin dejar
que hierva por 3 minutos. Si la placa se va secando, ir agregando más tinte hasta cumplir el tiempo. (Se
calienta el tinte para que penetre la espora que contiene dipecolinato de calcio)

4. Se enjuaga con agua y se coloca ácido sulfúrico al 1% por 2 minutos (decolorante

para retirar el carbol-fuchina)

6. Se enjuaga con agua y se tiñe finalmente con azul de metileno por 1 minuto

7. Dejar secar y luego observar al microscopio.

Ventaja.- Es un método de coloración que es capaz de atravesar la gruesa estructura de la espora para
teñirla.

Desventajas.- La utilización de estos métodos especiales conlleva un costo más elevado para poder
realizar las debidas tinciones, por lo que no todos los laboratorios lo realizan.

Aplicación

La coloración de esporas brinda una información muy valiosa y útil para la identificación del patógeno,
pues la presencia de la misma, su forma, ubicación dentro del bacilo y la capacidad de deformar la célula
vegetativa o no, son datos que pueden orientar sobre la especie involucrada dentro de un determinado
género. Sirve para distinguir bacterias del género Bacillus y Clostridium

(Martín, 2014)

Bibliografía
Melissa Hernández-Durán. (marzo, 2014) Las tinciones básicas en el laboratorio de microbiología.
Obtenido de http://www.medigraphic.com/pdfs/invdis/ir-2014/ir141b.pdf

Ana Martín.(2010). Técnicas básicas de Microbiología, Observación de bacterias. Obtenido de

http://revistareduca.es/index.php/biologia/article/view/819/834

Rodriguez, F. (27 de Octubre de 2017). Tinción de esporas mediante técnica de Wirtz. Obtenido de
Laboratorio Clínico y Biomédico: https://www.franrzmn.com/tincion-de-esporas-mediante-
tecnica-de-wirtz/#Fundamento