Métodos Ópticos

Lós métodos ópticos de análisis incluyen todos aquellos

métodos que involucran la interacción de la radiación
electromagnética con la materia.
Dicha radiación puede ser absorbida por la materia o emitida.

La información que se obtiene (señal de absorción,

fluorescencia, etc. vs. longitud de onda = “Espectro”) sirve
para el análisis cualitativo (estructura de la molécula,
interacciones con el entorno) y cuantitativo (concentración
del analito en la solución).
 La radiación electromagnética (REM):
comportamiento y propiedades

La REM es energía que se transmite por el espacio a altas

velocidades. No necesita de un medio de apoyo como el
sonido.

Tipos: luz UV o vis., calor o radiación infrarroja, radiación

gamma, rayos X, microondas y radiofrecuencias

Muchas propiedades como la reflexión, refracción y difracción

se explican por el “modelo clásico” de onda sinusoidal
(propiedades ondulatorias) del la REM. Otras, como el efecto
fotoeléctrico, necesitan del “modelo corpuscular”: la REM en
este modelo se comporta como un flujo de partículas
discretas denominadas “fotones”.
1) Métodos espectroscópicos: existe un intercambio de energía entre la
REM y la materia. Ocurren transiciones electrónicas entre distintos
niveles energéticos. Se obtienen espectros.

Absorción niveles moleculares: UV-vis, IR, microondas

niveles atómicos: Rayos X, absorción atómica

niveles moleculares: fluorescencia, fosforescencia

Emisión niveles atómicos: espectrometría de emisión, fotometría
de llama, ICP, fluorescencia de rayos X, fluorescencia
atómica.

2) Métodos no espectroscópicos: no existe intercambio de energía

REM -materia. Ocurren cambios en la dirección o propiedades físicas de
la REM.
Dispersión: turbidimetría, nefelometría
Refracción: refractometría, interferometría
Difracción: rayos X, de electrones
Rotación óptica: polarimetría, dicroísmo circular
 REM polarizada en el plano

Energía de un fotón: E = h ν ecuación de Einstein-Planck

ν es la frecuencia, o número de ciclos por segundo (seg -1 o Hz)

que depende únicamente de la fuente emisora y no del medio
en que se propaga la onda.
ν = c/ λ (2,998x1010 [cm/s] / [cm])
ν = 1/ λ es el número de onda (cm-1)
c = velocidad de propagación de la luz en el vacío.
v = veloc. en cualquier otro medio (donde habrá átomos o
moléculas).
La velocidad es menor debido a la interacción de la REM con
los electrones que existen en el medio material.
La proporción que disminuye la velocidad de la luz al pasar del
vacío al medio i, es reflejada por el índice de refracción de
ese medio.
El índice de refracción para líquidos oscila entre 1,3 y 1,8 y
para sólidos entre 1,3 y 2,5.

ηi = c/vi
Como la frecuencia solo depende del emisor:
Como ηi >1, λ > λi
ηi = c/vi= ν λ / ν λi= λ / λi
la longitud de onda se
acorta en un medio material
 ηi = λ / λi

Como ηi > 1 λ > λi

El espectro electromagnético
Longitud de
Onda (m)

frecuencia (s -1 )
Energía
Electronica Electrónica Rotaciones;
Tipo de transición (valencia)
Vibraciones espin Espin nuclear
(capa interna) moleculares electrónico

Región Espectral Rayos γ Rayos X Microondas Ondas de radio

Espectroscopía UV-vis

Longitud de
Onda (nm)
violeta azul verde amarillo naranja rojo
Los colores de los objetos dependen de la luz que ellos reflejan.
Un objeto blanco refleja todas las longitudes de onda y uno
negro absorbe todas las longitudes de onda. Un objeto que
absorbe la radiación de la zona de 400-435 nm (color violeta) se
ve de color amarillo-verdoso, etc.
 La espectroscopía sólo es posible si la interacción de los fotones con la
muestra produce un cambio en una o más de las siguientes propiedades de la
REM: energía, frecuencia, velocidad, amplitud, polarización, ángulo de
fase y dirección de propagación.

Niveles rotacionales
Diagrama de energía de
una molécula

Niveles vibracionales

Estado electrónico
excitado
Absorción posible
Emisión

Niveles rotacionales

Absorción imposible

Niveles vibracionales

Estado electrónico
fundamental
Energía de una molécula: La energía electrónica es el
Energía traslacional potencial asociado a la distribución
Energía electrónica de cargas negativas (electrones)
Energía vibracional Energía Interna en relación al núcleo
Energía rotacional

Eint = Er + Ee + Ev Una molécula no tiene una distribución contínua

de energías. La radiación se absorbe cuando
su energía coincide con algunas de las Eint
disponibles para la molécula (estados permitidos).
átomo vibrando en
el plano de la página átomo vibrando
lateralmente
al átomo central
La absorción es
“selectiva”

átomo vibrando hacia Modos vibracionales del CO 2

el átomo central
 Tipos de espectros

Espectro atómico del Ni. Espectro IR del ácido esteárico

Se absorbe E

Espectro NMR del acetato de butilo

Espectro Raman del CO

Se absorbe B
 Espectroscopía UV-vis

Benceno La estructura fina

en hexano (vibracional) se pierde con
201 nm (Є=46500)
204 nm
(Є=8800) la polaridad del solvente
247 nm y la complejidad de la
(Є=17000)
254 nm molécula
(Є=250)

Bifenilo
en hexano
H H

La posición de las bandas

O
depende:
1) de la polaridad del solvente
2) de la transición que refleje, es Transiciones que
decir si el estado excitado es mas se observan en la
región UV-vis.
o menos polar que el
fundamental.
 Corrimiento hipsocrómico: Los Є de cromóforos sencillos (-C=0, -OH,
-C=C-) oscilan entre 10 y 100 M-1 cm -1.
aumento de polaridad del solvente El Є (461 nm) del β-caroteno = 139.000 en
hexano

Corrimiento batocrómico:
Utilidad cualitativa de la espectroscopía UV-vis: en general es limitada,
depende de la cantidad de componentes de la muestra, la información
que tenemos de ella y el perfil del espectro (cantidad y forma de las bandas).

Ejemplo: la vitamina B12 (Rivoflavina) tiene un espectro característico, pero

el espectro que se muestra en la Figura, será el de Rivoflavina??
 Ley de Lambert-Beer

A + hγ A* A + calor

Bouger-Lambert Transmitancia

Po = 100 P1 = 50 P1 = 25
50% 50%
absorbida absorbida Número de celdas

Absorbancia
P
T Transmitancia
P0
 log T  A Absorbancia Número de celdas

A=kb
 Ley de Beer

C1

C1 C2 C3 C4

A=kC
La combinación de las dos:
Ley de Lambert-Beer
C1 C2 C3 C4
A=kbC Concentración
Postulados fundamentales de la LLB
1) La única interacción REM-materia es la absorción (IR, visible, UV).
2) Radiación monocromática
3) Centros absorbentes independientes (C<0,01M)
4) La REM atraviesa únicamente el camino óptico b.

dn moléculas dP dS
Superficie S  
P S
Fracción Probabilidad
absorbida de captura fotónica

α = área de captura +
N N
fotónica
H
H
dS = α dn Suma de las áreas de captura de
las dn moléculas
 dPx n  .dn
P
P  .n
P0 Px   0 S  ln 
P0 S

n (moléculas)
2
.( factor ??)  C (mol / lt ) ln = 2,303 log
S (cm ) Absorbancia, A.

n (moléculas) 1000(cm3 / lt )
2
)  C (mol / lt )
S (cm ) b(cm) N A (molec / mol )
Coeficiente de extinción molar
n b.N A N A .b.C Absortividad molar, Є
 C. A  .
S 1000 2,303.1000

A=ЄbC Є depende del analito, λ, solvente y T.

 P  bC
A   ln  bC P  P0 .10
P0
Colorimetría Visual

Medida de la muestra
Analito + matriz Acorr= Amuestra – Ablanco

Medida del blanco

matriz

Espectrofotómetro de
Cortador
simple haz
de haz

fuente monocromador muestra Procesador

de señal

blanco
 Desviaciones de la LLB

*La gráfica de Acorr vs. C (curva de calibración)

debería ser una línea recta.
*Antes de cuantificar, se debe verificar que Cx se
encuentre dentro del rango lineal (interpolación)
Єb

Error fotométrico

dC 0,434.dT

C T . ln T

Tipos de desviaciones:

1) Reales: (Tipo I), que se producen cuando se violan los postulados.

2) Aparentes: (Tipo II), las que se producen cuando la ley se aplica mal.
Postulados fundamentales de la LLB
1) La única interacción REM-materia es la absorción.
2) Radiación monocromática
3) Centros absorbentes independientes
4) La REM atraviesa únicamente el camino óptico b.
 cambios de η Є= η/(η2+2)2 Є´
A) “Físicas” (TI) pérdidas por reflexiones
fluorescencia
Correcciones: Emplear soluciones diluídas, el blanco con el mismo solvente y celdas
idénticas para la referencia y la muestra.

Pérdidas de radiación por reflexión, dispersión y refracción

Cuando la radiación cambia de un 2
P  1   2 
medio a otro de diferente η f    
P0  1   2 

Cuando las moléculas son demasiado grandes o hay

una solución microheterogénea (agregados, micelas)

Las pérdidas totales de REM son

a lo sumo de un 7-8 %
Qué postulados se violan?
1) La única interacción REM-materia es la absorción.
2) Radiación monocromática
3) Centros absorbentes independientes
4) La REM atraviesa únicamente el camino óptico b.
 B) Desviaciones “Instrumentales” radiación policromática
(TI) radiación espúrea o parásita

Radiación Policromática
Haciendo el cociente entre Po y P y tomando
logaritmos:

Si Є1 = Є2 , lo que ocurre sólo en la zona

del máximo de la banda
A = Є1 b C

Si Є1 ≠ Є2 , no se cumple la LLB
(desviaciones positivas o negativas)
Abs

λ (nm) Conc.

Radiación espúrea
Ps
Fuente Monocromador
Po P
Ps
100 Muestra
Po
Espectro de Ce(IV) en un equipo
con óptica de vidrio (A) y óptica de
cuarzo (B). El falso pico en A surge
de la radiación parásita de
longitudes de onda mas largas.
Qué postulados se violan?
1) La única interacción REM-materia es la absorción.
2) Radiación monocromática
3) Centros absorbentes independientes
4) La REM atraviesa únicamente el camino óptico b.
 C) “Químicas” (TII) por reacciones químicas del analito

Ca α
En el punto isosbéstico: A(415nm) = ε415 . b. Ca
Punto isosbéstico
A cualquier otra long. de onda la absorbancia
corresponde a una mezcla:
A = AA- + A HA
 = c. α

Corrección: Si se trabaja a una λ donde solo absorba una de las especies,

considerar la concentración real de esa especie en el equilibrio
(Considerar el grado de disociación y el pH).

Si se trabaja a una λ donde absorban tanto A- como AH, entonces:

A total = A AH + A A- = ЄAH b CAH + ЄA-b CA-

Qué postulados se violan?
1) La única interacción REM-materia es la absorción.
2) Radiación monocromática
3) Centros absorbentes independientes
4) La REM atraviesa únicamente el camino óptico b.
 Análisis de mezclas
Consideremos 2 sustancias absorbentes X e Y que no están en equilibrio entre si.
El camino óptico se mantiene constante.
-Si no hay interacción o reacción de Y y X con el solvente, P´X = P´Y = P.

En este caso, las absorbancias son aditivas y cada componente

cumple con la LLB (la suma de los valores teóricos coincide con los
experimentales).
- Si no hay aditividad, se debe diluir o corregir según el caso y proseguir
con el análisis. De lo contrario la mezcla no podrá resolverse.

Para resolver una mezcla de n componentes (b= 1 cm):

1
Atot   11 C1   21 C2  ...   n1 Cn
2 2 2 2
Atot   1 C1   2 C2  ...   n Cn

n
Atot   1n C1   2n C2  ...   nn Cn