09/11/2010

Inmovilización de Biocatalizadores
CONFINAMIENTO FÍSICO DE UNA ENZIMA O CÉLULA EN UNA DETERMINADA
REGIÓN DEL ESPACIO, MANTENIENDO LA ACTIVIDAD O VIABILIDAD

La inmovilización es el proceso por  k
Operación continua
el que las enzimas y las células 
pueden transformarse en 
catalizadores heterogéneos k

El biocatalizador se confina a una 
región determinada a través de la 
cual se pasa la solución del
cual se pasa la solución del  Reutilización
substrato, que sale como un 
producto, libre de catalizador.

Heterogéneo: uso continuado

Inmovilización de Biocatalizadores
Ventajas Desventajas

Sistemas continuos – Reutilización Costo adicional de soportes,

de llos bi
d biocatalizadores
li d reactivos
i y operación
ió d
de
inmovilización.
> productividades

Mayor concentración Pérdida de actividad

Mayor estabilidad Limitación de la actividad por

Efluentes libres de catalizadores
Menor costo de mano de obra e
instalaciones
problemas de difusión de los
sustratos
Perdida por lixiviación de la
enzima o por atrición del soporte.

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Inmovilización de Biocatalizadores

Aplicaciones Analíticas:
Diseño de biosensores
Reactores enzimáticos

Enzimas inmovilizados

Aplicaciones Médicas Aplicaciones

Tratamiento con
enzimas inmovilizados
Industriales
Industria farmacéutica
Industria alimentaria
Industria química

Soportes

Un soporte para inmovilización debe tener las siguientes

propiedades:

• Elevada resistencia mecánica, química y biológica

• Alta área superficial (área/volumen).
• Ser fácilmente separable de medio líquido para su reutilización.
• Bajo costo

Estos materiales difieren en tamaño, densidad, porosidad y forma,

aunque generalmente nos los encontramos en forma de cilindro,
h
hojas, fibras
f y más
á corrientemente en forma
f de esferas
f

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Soportes

Soportes inórganicos. Dentro de este grupo tenemos una gran variedad

de soportes, que pueden ser naturales (arcillas como la bentonita, piedra
pómez sílice,
pómez, etc.)) o materiales manufacturados (óxidos de metales y
sílice etc
vidrio de tamaño de poro controlado, vidrio no poroso, alúmina, cerámicas,
gel de sílice, etc.)
• Mayor regenerabilidad
• Mayor resistencia
• Propiedades físicas (ej. porosidad) controlables
Soportes órganicos. Se pueden clasificar en: Polímeros naturales: polisacáridos
(celulosa almidón,
(celulosa, almidón dextranos,
dextranos agar
agar-agar
agar, agarosa
agarosa, alginatos,
alginatos quitina,
quitina chitosan,
chitosan etc)
y Polímeros sintéticos: Poliolefinas (como el poliestireno) o Polímeros acrílicos
(poliacrilatos, poliacrilamidas, polimetacrilatos, etc.)
• Buena relación área/volumen
• Muy flexibles en su configuración
• Bajo costo en algunos casos (residuos orgánicos)

Métodos de inmovilización

Retención física Inmovilización química

Atrapamiento o
Adsorción Unión covalente Entrecruzamiento
inclusión

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Inmovilización por Adsorción

Interacción física, no específica (puentes de hidrógeno

i t
interacciones
i s hidrofóbicas,
hid fóbi s interacciones
i t i s iónicas,
ió i s iinteracciones
t i s
de van der Waals) entre la solución de enzimas o la suspensión de
microorganismos y el soporte.

9 El método más sencillo

9 De aplicación general
9 Costo moderado

Uniones
R
Reversibles
ibl 9 Estabilidad limitada, se requiere un control
No covalentes
riguroso de las condiciones de trabajo para
evitar pérdidas de enzima por desorción.

Alumina, carbón activo, vidrio

Resinas

Retención física Inmovilización química

Atrapamiento o
Adsorción Unión covalente Entrecruzamiento
inclusión

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Inmovilización por Enlace Covalente

Formación de enlaces covalentes entre el enzima y grupos funcionales del soporte
insoluble.

9 Se aplica preferentemente a enzimas.

enzimas En el caso de las células podría afectar
negativamente si viabilidad y actividad.
9 El método es relativamente costoso al igual que los procedimientos empleados.
9 El enlace estable entre el soporte y la enzima minimiza la perdida de la enzima.

El tipo de soporte determina la química de la inmovilización

Natural: celulosa,
agarosa
Sintetico: poliestireno,
policriamida, cerámicos,
vidrios

Métodos de inmovilización

Retención física Inmovilización química

Atrapamiento o
Adsorción Unión covalente Entrecruzamiento
inclusión

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Atrapamiento o inclusión

Atrapamiento o inclusión en un gel, polímero o matriz porosa

Consiste en la retención física del biocatalizador en las cavidades de una matriz

sólida porosa. Se forma una matriz en la cual el biocatalizador queda atrapado.
Mas utilizado en la inmovilización de células.

Tipos de matrices

Poliméricas sintéticas: Geles naturales

Se polimeriza el soporte
el presencia de las
células por cambio de
temperatura, por ej.
policrilamida
Se solidifica el soporte
mediante una
precipitación con otro
agente (alginato de
sodio)

Microencapsulación y Membranas

Atrapamiento por microencapsulación

Se atrapa la enzima en microcápsulas (1-100

µm diámetro) dentro de
membranas semipermeables de polímeros que
permiten la difusión de
sustratos y productos pero no de la proteína.

Retención del biocatalizador en una membrana

Membranas performadas en las cuales se

introduce el catalizador en su interior (fibras
huecas). Las membranas permeables
al producto final, permeables o no al sustrato
inicial y obviamente impermeables a la enzima

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Retención física Inmovilización química

Atrapamiento o
Adsorción Unión covalente Entrecruzamiento
inclusión

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Entrecruzamiento

9 Generación de partículas sólidas sin la intervención

de una soporte sino mediante la interacción directa
entre enzimas o células.
9 Formación de enlaces covalentes intermoleculares
(entre moléculas de enzima) se logra mediante grupos
funcionales como el glutaraldehído.
9 Las redes de moléculas entrecruzadas que se forman dificultan el
acceso del sustrato al centro activo Æ Pérdidas de actividad tras
la inmovilización

Reactivos bifuncionales más utilizados

CHO O O
H H
(CH2)3 N2 N2 ICH2 C N (CH2)6 N C CH2I

CHO
Glutaraldehido Diazobenzidina Hexametileno-bis(iodoacetamida)
O O O
O
N O C (CH2)2 S S (CH2)2 C O N

O O
Bis(N-hidroxysuccinimidyl)ditiopropionato

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Características Adsorción Enlace Inclusión en Retención por

covalente matrices Membranas

P
Preparación
ió Si l
Simples difi il
dificil difi il
dificil Si l
Simples

Costo bajo elevado moderado elevado

Fuerza de variable fuerte flaca fuerte

ligación
Liberación de si no si no
enzima
Aplicabilidad amplia selectiva amplia Muy amplia

Problemas en la elevados bajos elevados elevados

utilización
tili ió
Efectos de la si si si no
matriz
Restricciones no no si si
difucionales
Protección no no si si
microbiana