CINETICA MICROBIANA

VELOCIDAD DEL CRECIMIENTO MICROBIANO rx

VELOCIDAD DEL CONSUMO DE SUSTRATO rs
VELOCIDAD DE LA FORMACION DE PRODUCTOS rp

DR. BLGO. CARLOS E. VILLANUEVA AGUILAR

MICROBIOLOGIA INDUSTRIAL Y BIOTECNOLOGIA MICROBIANA

CINETICA MICROBIANA : conceptos

¿Con qué velocidad se lleva a cabo el Bioproceso ?

Mecanismos de Reacciones Biológicas Básicas
en un Proceso Fermentativo
 LA CINÉTICA DE LA FERMENTACIÓN :

I. ESTUDIA LA:
VELOCIDAD CRECIMIENTO MICROBIANO rx (
REPRODUCCIÓN ), TIEMPO
VELOCIDAD CONSUMO DE SUBSTRATO rs RESPECTO O
(ALIMENTACION) AL CONDICIONES
VELOCIDAD FORMACIÓN DE PRODUCTOS rp EXCRETA QUE LO
DE SUSTANCIAS) MODIFICAN

II. SE RELACIONA FUNDAMENTALMENTE CON LA MEDICION DE:

Velocidades volumetricas Velocidades especificas

(CÁLCULOS DE CONSTANTES DE VELOCIDAD)

rx, rs, rp u , qp , q s

III. SE DESCRIBE LA CINÉTICA MICROBIANA EN CULTIVO BATCH.

CINETICA DEL CRECIMIENTO
MICROBIANO

2.1. DESCRIPCION QUIMICA

2.2. DESCRIPCION BIOLOGICA
2.3. DESCRIPCION MATEMATICA
2.4. TIPOS DE MODELOS MATEMATICOS
 CRECIMIENTO MICROBIANO

DESCRIPCION QUIMICA

ACaHbOc + BO2 + DNH4OH E CH O N + FCO2 + GH2O

 DEFINICIÓN QUÍMICA DEL CRECIMIENTO MICROBIANO
Serie de reacciones químicas en cadena que conducen a la síntesis de
masa celular (biomasa) obtenida al final del proceso

 Se traduce en una reacción química estequiométrica generalizada para

el crecimiento:

ACaHbOc + BO2 + DNH4OH E CH O N + FCO2 + GH2O

Fuente de Fuente de Fórmula bruta
Carbono Nitrógeno de la materia
y energía celular seca.
A, B, D, E, F y G: moles de los compuestos respectivos

 Se aplica cuando la biomasa es el único producto formado

Globalmente el bioproceso obedece al:

“ Principio de la conservación de la materia ”

BIOMASA MICROBIANA: C H O N

 Deriva del análisis elemental de la MASA MICROBIANA producida

 Variable según: tipo de cepa microbiana y composición del medio de cultivo

 Fórmulas brutas propuestas:

Levaduras C6H11O3N ; C6H1OO3N ; C5H7O2N ; C6H10,9O3,6N1,03

 Representa; 90% de la biomasa efectivamente producida en la reacción.

 NO incluye cenizas, de aprox. 10% de la materia seca.

C6H11O3N Peso molecular (fracción orgánica ) = 145

Si la célula tiene 90% orgánica y 10% cenizas

El peso de la fórmula total de una unidad celular será:

145 / 0.9 = 161 .

De la relación estequiométrica
A CaHbOc + B O2 + D NH4OH E CH O N + F CO2 + G H2O

S O x

 Se establece las relaciónes:

X/S = coeficiente rendimiento celular

[ rendimiento de células sobre el sustrato carbonado ]

x masa celular formada

s masa de sustrato consumido

X/O = [ rendimiento de células sobre el requerimiento de oxígeno ]

O masa de oxigeno consumido
CRECIMIENTO MICROBIANO

DESCRIPCION BIOLOGICA
 DEFINICIÓN BIOLOGICA DEL CRECIMIENTO MICROBIANO

Crecimiento a nivel de individuos Crecimiento a nivel de población

(Ciclo celular o Crecimiento celular) (Ciclo de crecimiento o Crecimiento
poblacional)
Aumento en el tamaño Aumento en la cantidad
de la célula, seguido de células
de su división Los microorganismos
Los microorganismos unicelulares se
unicelulares aumentan desarrollan principalmente
de tamaño y luego se como poblaciones de
dividen en dos por células.

fisión binaria o gemación

En cualquier sistema biológico: es el aumento ordenado

de todos los componentes químicos de un organismo

En los organismos unicelulares: es el aumento en el

número de individuos en la población

La mayor parte del estudio sobre crecimiento microbiano

se refiere a:
crecimiento poblaciónal más que a crecimiento celular
Crecimiento Poblacional
Puede darse en:

1. Sistemas cerrados
No se añade al cultivo nuevas sustancias nutritivas,
ni se extrae para eliminar algún producto terminal
del metabolismo.
Cultivo discontinuo
(batch, estático, cultivo por lote
o intermitente)

2. Sistemas abiertos

Cultivo lote alimentado Cultivo continuo

 CRECIMIENTO POBLACIONAL EN SISTEMA CERRADO
( CULTIVO DISCONTINUO O BATCH )

Ciclo de crecimiento y Curva de Crecimiento

 Ciclo de crecimiento
 Secuencia de eventos característicos
de la población microbiana
 Se inicia cuando una solución nutritiva
se inocula con un microorganismo.

 Curva de crecimiento
 Gráfica que describe el ciclo de crecimiento
 Se obtiene:
graficando el peso celular seco (X, g L-1)
o concentración celular viable (N, células L-1)
respecto al tiempo de incubación ( t, horas )
CRECIMIENTO MICROBIANO

DESCRIPCION MATEMATICA
 DEFINICIÓN MATEMATICA DEL CRECIMIENTO MICROBIANO

1. ¿ Como se define el crecimiento?

Se define como un incremento en el número de células microbianas [dN ] en una población, lo cual
también puede ser medido como un incremento en la masa microbiana [dX ] .

2. ¿ Como se define la velocidad de crecimiento?

Es el cambio en el número de células o masa celular por unidad de tiempo:

rx = dN/dt o rx = dX/dt

La velocidad de aumento
de microorganismos en un
tiempo dado …… es
proporcional a la masa de
bacterias ( X ) o al número
de bacterias ( N ) o a
cualquier otro componente
( Z ) presentes en ese
tiempo
 MEDICION DEL
CRECIMIENTO MICROBIANO

¿ COMO PUEDE MEDIRSE EL CRECIMIENTO POBLACIONAL ?

MEDICION DEL CRECIMIENTO
¿ COMO PUEDE MEDIRSE EL CRECIMIENTO POBLACIONAL ?

CAMBIO
 Métodos de Medición de Poblaciones Microbianas
¿CÓMO DETERMINAR EL NÚMERO DE CÉLULAS (N) O LA MASA CÉLULAR (X) ?

PROCEDIMIENTO GENERAL:
1. Tomar muestras del caldo de fermentación
(suspensiones homogéneas de células)
2. Determinar:
 Numero de células N ( ufc/ml )
 Masa celular X ( g/ml )

Hay varios métodos para:

contar células N o
estimar su masa X

3. Determinar los parámetros

 Métodos
para contar células y
estimar masa celular

NÚMERO DE CÉLULAS

NUMERO TOTAL DE CELULAS

NUMERO DE CELULAS VIABLES

MASA CELULAR

METODOS DIRECTOS

METODOS INDIRECTOS
RECUENTO TOTAL EN PLACA (ufc)

CONTEO DEL NUMERO DE COLONIAS (UFC)

METODO DE LA PLACA ESTRIADA

METODO DE LA PLACA VERTIDA

METODO DE LAS DILUCIONES
 Parámetros de Medición de Poblaciones Microbianas

Numero células Masa celular

DEFINICIONES (RECUENTO) (PESO SECO)

Concentración celular Densidad celular

Por unidad de volumen N X
(ml) (no células / ml) (g / ml)

Tasa de División Tasa de Crecimiento

Duplicaciones
v 
por unidad de tiempo
(horas -1) (horas -1)

Intervalo de tiempo Tiempo de generación Tiempo de duplicación

entre dos duplicaciones g td
(horas) (horas)
NATURALEZA Y EXPRESION CUANTITATIVA

DE LOS PARAMETROS DE MEDICION

Tasa de División (v) y Tiempo de Generación (g)
No N

n
 EJERCICIO 1:

Si una suspensión celular pasa en 10 horas de crecimiento de 103 a

109 células, la tasa de división (v) y tiempo de generación (g) será:

Datos:

No = 103 células
N = 109 células v = log N - log No / log 2 (t - to)
t = 10 horas
= log 109 - log 103 / 0.3010 (10)

= 6/3
= 2 h-1

g = 1/v

= 1/2
= 0.5 h
 EJERCICIO 2

Calcular el tiempo de generación de un microorganismo en un cultivo

que pasa de 2 x 104 ufc/ml a 7 x 10 5 ufc/ml en 2.5 h.

Datos:

No = 2 x 104 ufc/ml v = log N - log No / log 2 (t - to)

N = 7 x 105 ufc/ml
t = 2.5 horas
g = ?
= log 7 x 10 5 - log 2 x 104 / 0.3010 (2.5 )
= 5.85 – 4.30 / 0.7525
= 1.52 / 0.7525
= 2 duplicaciones x hora

g = 1/v
= 1/2
= 0.5 h
 EJERCICIO 3

Si partimos de 104 ufc/ml en un cultivo que tiene un tiempo de generación (g) de 2 h

¿cuántas células tendremos al cabo de 4, 24 y 48 h de cultivo ? Grafique la curva de
crecimiento
Datos:
Formula
No = 104 ufc/ml log N = log No / n log 2
g = 2 horas g = t/ n
N = ? Reemplazando n por t / g :
t = 4 , 24, 48 horas log N = log No / t / g (log 2)

Calculo de N a 4 horas Calculo de N a 24 horas Calculo de N a 48 horas

log N = log No / t / g (log 2) log N = log No / t / g (log 2) log N = log No / t / g (log 2)

= 104 / 4/2 (log 2)
= 4 / 2 (0.3010)
= 4 / 0.602
= 6.65
N = antilog 6.65
N = 4.4 x 106 ufc/ml
= 104 / 24/2 (log 2)
= 4 / 12 (0.3010)
= 4 / 3.612
= 1.11
N = antilog 1.11
N = 12 x 106 ufc/ml
= 104 / 48/2 (log 2)
= 4 / 24 (0.3010)
= 4 / 7.224
= 0.546
N = antilog 0.546
N = 35 x 106 ufc/ml
 Tasa de Crecimiento () y Tiempo de Duplicación (td)

TASA DE CRECIMIENTO () : ECUACIÓN DIFERENCIAL

La población microbiana en crecimiento

es un sistema que se multiplica
autocatalíticamente de modo que:

La velocidad de crecimiento, rx es proporcional a

rx = µ X la densidad celular X, ya presente y sigue la
cinética de una reacción de primer orden.

dx / dt = µ X Describe la velocidad de crecimiento, rx durante

la fase exponencial ( y fase de declinamiento)

Despejando µ :

 = dx/dt . 1 / x
Esta ecuación es la forma diferencial de la ecuación de
crecimiento Se puede usar para describir el
crecimiento en cualquier etapa durante el ciclo de este.
 TASA DE CRECIMIENTO () : ECUACIÓN INTEGRAL

dx/dt = x ln X = ln Xo +  ( t – to )

Antilogaritmo
Integrando:  t
x = xo . e
dx / x =  dt
x t

xo
 dx / x = to  dt
x
 t
ln X - ln Xo =  ( t – to ) x = xo . e

xo
to t
Despejando 

 = ln x - lnxo / (t - to )  velocidad específica de crecimiento rapidez de

aumento de la densidad celular por unidad de tiempo (h-1)

Esta ecuación es la forma integral de la ecuación de crecimiento Solo se aplica en el crecimiento exponencial
(donde  es constante). Se adapta muy bien a los datos experimentales de la fase exponencial.
 Intervalo de tiempo entre dos duplicaciones de la
TIEMPO DE DUPLICACION (td) : densidad celular

 t
x = xo . e x = 2 xo Para una duplicación de la masa celular inicial

 td
2 xo = xo . e

 td
2 = e
logaritmo natural

ln 2 =  td

td = ln 2 / 

TASA DE CRECIMIENTO  Número de duplicaciones de densidad celular por hora

 = ln 2 / td  = 2.303 log 2 / ( td )
= 2.303 (0.301) / ( td )
 = 0.693 / td
 = 0.693 / td
 EJERCICIO 4

Deducir la relación que hay entre el tiempo de duplicación (td) y la tasa

de crecimiento (μ) de un cultivo a partir del modelo matemático del
crecimiento exponencial.microbiao
 Calculo de la Tasa de Crecimiento (  )

 = Velocidad específica de crecimiento

• Se calcula a partir de las densidades Xo y X medidas en los tiempos to

y t según la ecuación (1) o sus equivalencias (2) y (3):

(1)  = ln x - ln xo / ( t – to )

(2)  = log x - log xo / log e ( t – to )

(3)  = ( log10 x - log10 xo ) 2.303 / ( t – to )

donde: log e = 0.43429.

Es una medida de la velocidad del crecimiento celular durante la fase de

crecimiento exponencial.
Para un tipo de microorganismo dado depende principalmente de la composición y
concentración del medio de cultivo, inhibidores, temperatura y pH.
 EJERCICIO 5

Calcular la tasa de crecimiento (μ, expresada en h-1) de un cultivo bacteriano que pasa
de producir 3.0 g/l de biomasa total a producir 10 g/l en 50 min.

Solución

Método Ecuaciones

 = lnX - ln Xo / (t -to) = log X - log Xo / log e (t -to) = (log10X - log10Xo) 2.303/ (t -to)

= ln 10 - ln 3 / ( 0.833 ) = log 10 - log 3 / 0.434 (50 ) = (log10 10 - log10 3) 2.303/(50)

= 2.30 - 1.1 / (50) = - / 0.434 (50) = ( - ) 2.303 / (50)

= / 50 = / = ( ) 2.303 / 50

 = h-1  = h-1  = h-1

 
También relaciona la velocidad de incremento de N y
cualquier componente celular dado (Z):

En términos matemáticos:

dN / dt =  N
dZ / dt =  Z

donde:
N numero de células / ml
Z Cantidad de cualquier componente dado / ml
 EJERCICIO 6
El cultivo tiene 104 células/ml en el tiempo to y 108 células/ml 4 horas mas tarde en
un sistema de cultivo ¨batch¨ con agitación. Determine la velocidad específica de
crecimiento
Solución

Método Ecuaciones

 = lnN - ln No / (t -to) log N - log No / log e (t -to) (log10N - log10No) 2.303/ (t -to)

= ln108- ln 104 / (4 h) log 108 - log 104 / 0.434 (4 h) (log10108 - log10104) 2.303/(4h)

= 20.7 - 11.5 / 4 9 - 5 / 0.434 (4 h) (8 - 4) 2.303 / 4

= 9.2 / 4 9.5 / 1.736 (4 ) 2.303 / 4

 = 2.303 h -1  = 2.303 h -1  = 2.303 h -1

EJERCICIO 7
Relación Tasa de Crecimiento (  ) y Tasa de División ( v )

(1) g = 1/v

(2) td = ln 2 / 
Al comparar la tasa de crecimiento  con la tasa de división v
el número de células (N) y la masa celular (X) no coinciden y la relación entre ambas
medidas se altera en el curso del crecimiento de un cultivo estático.

Sin embargo, si se determina X o N y se comparan en condiciones que el incremento

de N sea exactamente igual al incremento de X (células estándar)) se tiene:

g = td

Esto es: (1) = (2) 1/v = ln 2 / 

Despejando  :
 = ln2 . V
 PROBLEMA

Deducir la relación que hay entre el tiempo de generación (g) y la

tasa de crecimiento (μ) de un cultivo a partir de las ecuaciones de
crecimiento.

(1) g = 1/v

(2) td = ln 2 / 

g = td

(1) y (2) 1/v = ln 2 / 

Entonces :
g = ln2 / 
 REPRESENTACION GRAFICA
DEL CRECIMIENTO EXPONENCIAL

La Fase exponencial

constituye el periodo mas

adecuado para determinar la
tasa de división, (v) y la tasa
de crecimiento, ();
debido a la constancia relativa
de la tasa de división.

Se le llama crecimiento exponencial o geométrico

a aquella progresión que aumenta por multiplicación de una
cantidad constante llamada razón.
Representación Aritmética
X (g/L)
Cuando en el eje de ordenadas se
representa el número de células o la
masa celular, y en el eje de abscisas el
tiempo, expresadas ambas magnitudes
en unidades aritméticas.

El crecimiento exponencial queda

representado por una curva
exponencial.

No es adecuada para expresar un

numero grande de divisiones celulares,
ya que según sea la medida elegida
solo pueden reconocerse las primeras t (horas)
o solo las ultimas divisiones celulares.
 Representación
semi-logarítmica
Cuando en el eje de ordenadas se x Ln x
representa el logaritmo del número de
células o de la masa celular y en el eje de
abscisas el tiempo, este expresado en
unidades aritméticas
El crecimiento exponencial queda
representado por una línea recta.
La velocidad de crecimiento (u) viene
dada por la pendiente de dicha recta; es
tanto mayor cuanto mayor sea la
pendiente de la recta.
Debido a que el crecimiento exponencial
se caracteriza por la relación lineal entre Grafico:
el log del número de células y el tiempo Velocidades de crecimiento
representadas sobre
se habla también de crecimiento escalas aritmética y logarítmica.
logarítmico.
 METODO GRAFICO PARA CALCULAR EL VALOR DE 
1. Se calcula a partir de la ecuación: ln X - ln Xo =  ( t – to )
2. Reordenando a una línea recta: y = a x
Resulta: ln X / XO =  (t)
3. Graficando ln X/ Xo Vs t (tiempo)
y

ln X / XO

 = a = Pendiente

(t) x

Cuando  es constante dará una línea recta de pendiente  (h -1)

En este caso la velocidad especifica de crecimiento será la pendiente (a) de la línea
recta obtenida según se observa en el grafico.
El valor de  es suficiente para definir la velocidad de crecimiento de un cultivo .
 EJERCICIO 2:
El cultivo tiene 104 células/ml en el tiempo to y 108 células/ml 4 horas mas tarde en un
sistema de cultivo ¨batch¨ con agitación. Determine la velocidad específica de crecimiento 
Solución:

Método Gráfico:

Grafique: ln N/No vs t

ln N/ No =  ( t )
ln N/ No y = a x
 = a = Pendiente

Para : ln N/ No = 9.21 t = 4 horas

Aplicando la ecuación de línea recta ( y = a x) : ln N/ No =  t
 = 9.21 / 4
 = 2.30 h -1
La pendiente:  es igual a 2.30 h -1
 Rendimiento

Rendimiento (X):

Es igual a la diferencia entre la biomasa máxima y la biomasa inicial:

X = Xm - Xo (en gramos de peso seco/ L)

Coeficiente de rendimiento ( Y = X / S ) :

La relación entre el rendimiento y el consumo de sustrato (X / S) tiene un

interés especial.

Si ambas magnitudes se expresan en unidades de peso, se denomina el cociente

“coeficiente económico” o “coeficiente de rendimiento”

Y = X / S ( g masa celular / g sustrato consumido)

De los resultados experimentales del estudio del crecimiento se puede
deducir el valor del “coeficiente de rendimiento celular” Yx/s.

Yx/s = Xm - Xo / So – S

S : Concentración residual de sustrato, casi siempre tiende a cero y

despreciable con respecto a So

So : Cconcentración inicial de sustrato

Yx/s : Se expresa en gramos de masa celular producido /

por gramo de sustrato metabolizado (rendimiento ponderal)
o por mol de sustrato metabolizado (rendimiento molecular)
Coeficiente de Rendimiento Molar ( Ym = g / mol )

Cuando el coeficiente de rendimiento se expresa en:

gramos de masa celular / moles de sustrato.

Coeficiente de Rendimiento Energético (YATP = g /mol ATP)

Cuando el coeficiente de rendimiento se expresa en:

gramos de masa celular / moles de ATP

Puede calcularse cuando se conocen tanto la vía de degradación de un

sustrato como la energía (ATP) obtenida de dicha degradación.
TIPOS DE MODELOS MATEMATICOS

DEL

CRECIMIENTO MICROBIANO
 TASA DE CRECIMIENTO VS CONCENTRACIÓN DE
NUTRIENTES
Existen diversas expresiones para  . La mas difundida es :

Cuando S  Ks  toma el valor de max y rx solo depende de X

S = concentración del
sustrato limitante
max = velocidad de
crecimiento
especifica máxima
Ks = constante de
saturación

S
Ks
El Valor de Ks esta inversamente relacionado con la
afinidad del microorganismo por el sustrato.

En general Ks tiene valores muy bajos (mgL-1) por tanto

concentraciones bajas de S son suficientes para hacer
que  = max
Las bacterias poseen valores de max cercanos a 0.9 h-1
Las levaduras 0.45 h-1 y los hongos filamentosos 0.25
h-1;
De todos modos debe ser determinado
experimentalmente para cada caso en particular.
CRECIMIENTO MICROBIANO

Y SU

RELACION CON EL AMBIENTE

EFECTO DE TEMPERATURA

EFECTOS DEL PH

EFECTO DE ALTA CONCENTRACIÓN DE NUTRIENTES

EFECTO DE NUTRIENTES INSOLUBLES EN AGUA